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文档简介
1、2021/8/1412021/8/1422021/8/143高效液相色谱高效液相色谱2021/8/144 一、一、概述概述 1、基本概念:又称层析法。是、基本概念:又称层析法。是利用混合物中各成分的物理化学性利用混合物中各成分的物理化学性质差异,使各成分得到分离的一种质差异,使各成分得到分离的一种方法。方法。 2021/8/145 2、分类:、分类: 按两相所处的状态分按两相所处的状态分: 液相色谱液相色谱液液固色谱固色谱液液液色谱液色谱气气固色谱固色谱气相色谱气相色谱气气液色谱液色谱2021/8/146 按原理分按原理分:离子交换色谱吸附色谱吸附色谱凝胶色谱凝胶色谱分配色谱分配色谱2021/
2、8/147 按操作形式分按操作形式分:柱柱色色谱谱纸色谱纸色谱薄薄层层色色谱谱2021/8/1482021/8/149 一、吸附色谱法:一、吸附色谱法: 主要是指以吸附剂作为固主要是指以吸附剂作为固定相,以液体作为流动相的定相,以液体作为流动相的液液固色谱法。固色谱法。2021/8/1410 (一)基本原理:(一)基本原理: 利用固定相吸附剂对混合物中利用固定相吸附剂对混合物中各成分的吸附能力的差异,以及流各成分的吸附能力的差异,以及流动相对各成分解吸附能力的差异,动相对各成分解吸附能力的差异,而使各成分得以分离。流动相解吸而使各成分得以分离。流动相解吸附。附。2021/8/1411吸附吸附解
3、吸附解吸附再吸附再吸附再解吸附再解吸附2021/8/1412 (二)、吸附剂、移动相与被分离(二)、吸附剂、移动相与被分离成分成分 1、吸附剂:应具有较大的表面积吸附剂:应具有较大的表面积和足够的吸附能力,颗粒要均匀,和足够的吸附能力,颗粒要均匀,具有一定的细度;不与流动相、溶具有一定的细度;不与流动相、溶剂及样品中各成分发生化学反应,剂及样品中各成分发生化学反应,在流动相及所用的溶剂中不溶解。在流动相及所用的溶剂中不溶解。2021/8/1413 常用的吸附剂:常用的吸附剂:氧化铝氧化铝硅胶硅胶2021/8/1414 氧化铝:氧化铝: 碱性碱性 分为:分为: 中性中性 酸性酸性 硅硅胶:胶:含
4、水越高,吸附能力越小。含水越高,吸附能力越小。2021/8/1415 2、移动相:是由一种或几种溶剂移动相:是由一种或几种溶剂按一定比例组成的溶剂系统,在色按一定比例组成的溶剂系统,在色谱过程中的主要作用是解吸附。谱过程中的主要作用是解吸附。 根据被分离成分的极性选择移动相。根据被分离成分的极性选择移动相。极性小选择极性小的溶剂;移动相极性小选择极性小的溶剂;移动相的极性越大,成分的迁移速度越快。的极性越大,成分的迁移速度越快。2021/8/1416 3、被分离成分:被分离成分:在吸附色谱中当吸附在吸附色谱中当吸附剂和移动相固定时,被分离成分的被剂和移动相固定时,被分离成分的被吸附情况取决于它
5、的结构和性质。通吸附情况取决于它的结构和性质。通常极性越大的成分被吸附剂吸附性越常极性越大的成分被吸附剂吸附性越强;同系物中碳原子少者比碳原子多强;同系物中碳原子少者比碳原子多者被吸附性强;分子中双键或共轭双者被吸附性强;分子中双键或共轭双键多者被吸附性强;母核相同时,取键多者被吸附性强;母核相同时,取代基的极性越大被吸附性越强。代基的极性越大被吸附性越强。2021/8/1417 (三)操作技术:(三)操作技术:铺板铺板点样点样展开展开显色显色Rf值计算值计算2021/8/14182021/8/14192021/8/14202021/8/1421 原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离 Rf = 原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离2021/8/1
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