水中大肠菌群的测定

1、水体卫生质量评价水体卫生质量评价水中大肠菌群的测定水中大肠菌群的测定一、目的要求一、目的要求1了解和学习大肠菌群的测定原理和测定意义。2学习和掌握水中大肠菌群的检测方法。二、基本原理二、基本原理 水是微生物广泛分布的天然环境。各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中微生物的主要来源有：水中的水生性微生物(如光合藻类)、来自土壤径流、降雨的外来菌群和来自下水道的污染物和人畜的排泄物等。水中的病原菌主要来源于人和动物的传染性排泄物。 水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过

2、3个，细菌总数每mL不超过100个。 所谓大肠菌群，是指在3724h内能发酵乳糖产酸、产气的兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌的总称，主要由肠杆菌科中四个属内的细菌组成，即埃希氏杆菌属、柠檬酸杆菌属、克雷伯氏菌属和肠杆菌属。二、基本原理二、基本原理 水的大肠菌群数是指100mL水检样内含有的大肠菌群实际数值，以大肠菌群最近似数(MPN)表示。在正常情况下，肠道中主要有大肠菌群、粪链球菌和厌氧芽胞杆菌等多种细菌。这些细菌都可随人畜排泄物进入水源，由于大肠菌群在肠道内数量最多，所以，水源中大肠菌群的数量，是直接反映水源被人畜排泄物污染的一项重要指标。目前，国际上已公认大肠菌群的存在是粪便污染的指标。因

3、而对饮用水必须进行大肠菌群的检查。 水中大肠菌群的检验方法，常用多管发酵法和滤膜法。多管发酵法可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。滤膜法仅适用于自来水和深井水，操作简单、快速，但不适用于杂质较多、易于阻塞滤孔的水样。三、器材三、器材 1)培养基： 乳糖胆盐蛋白胨培养基： 蛋白胨20g，猪胆盐(或牛、羊胆盐)5g，乳糖10g，0.04%溴甲酚紫水溶液25mL，水1000mL，pH7.4。 伊红美蓝琼脂培养基（EMB）： 蛋白胨10g，乳糖10g， K2HP04 2g， 2伊红水溶液20Ml，0.65美蓝水溶液lOmL，琼脂17g，水1000mL，pH7.1。 乳糖发酵管： 除不加胆盐

4、外其余同乳糖胆盐蛋白胨培养基。 2)器材： 灭菌三角瓶，灭菌的具塞三角瓶，灭菌平皿，灭菌吸管，灭菌试管等。四、实验步骤1）自来水样的检测 初步发酵试验：在2个各装有50mL的3倍浓缩乳糖胆盐蛋白胨培养液的大使管中(内有倒置杜氏小管),各加入100mL自来水样；在10支装有5mL三倍乳糖蛋白胨发酵试管中(内有倒置小管)，以无菌操作各加入水样10mL.摇匀后，37培养24h,23h未产生气体的积蓄培养至48h。 平板分离 经24h培养后，将产酸产气及只产酸的发酵管(瓶)，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板(EMB培养基)上，37培养18-24h。将符合下列特征菌落：菌落呈紫黑色，具有或略带有或不带有金

5、属光泽，呈淡紫红色，仅中心颜色较深，其中的一小部分，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。 复发酵试验 将革兰氏阴性无芽胞杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同类型菌落1-3个，37培养24h，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。 报告 根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管数，查表2（或表3），报告每升水样中的大肠菌群数(MPN)。六、成功关键：六、成功关键： 实验过程中所用玻璃器皿均要求无菌。实验过程中所用玻璃器皿均要求无菌。 检查开始前要充分振摇混合水样，这样可以确保细菌检查开始前要充分振摇混合水样，这样可以确保细菌在水样中均匀分布，以保证大肠菌群数量的准确性，在水样中均匀分布，以保证大肠菌群数量的准确性，这对检验结果是十分重要的。这对检验结果是十分重要的。 对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合对于污染严重的水样，为了保证在接种后得到一个合适范围的阳性结果，需要设置四个以上的连续稀释度；适范围的阳性结果，需要设置四个以上的连续稀释度；当四个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大当四个连续稀释度的最低管或全部呈现阳性，应加大稀释度。稀释度。 若复发酵试验阳性结果明显，平板分离试验可以省略。若复发酵试验阳性结果明