《生物化学简明教程》第四版 第二章蛋白质

1、第第 2 2 章章 蛋蛋 白白 质质(Protein) 蛋白质的分类蛋白质的分类 蛋白质的组成单位蛋白质的组成单位-氨基酸氨基酸肽肽蛋白质的结构蛋白质的结构蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系蛋白质的性质与分离、分析技术蛋白质的性质与分离、分析技术内容提要内容提要 是由许多不同的是由许多不同的-氨基酸按一定的序氨基酸按一定的序列通过酰胺键（肽列通过酰胺键（肽键）缩合而成的，键）缩合而成的，具有较稳定的构象具有较稳定的构象和一定生物功能的和一定生物功能的生物大分子。生物大分子。纤维状纤维状球状球状蛋白质蛋白质(Protein)(Protein)蛋白质的生物学作用蛋白质是生物体的重要蛋白质

2、是生物体的重要组成成分组成成分蛋白质具有重要的生物学功能蛋白质具有重要的生物学功能v1）作为生物催化剂（酶）作为生物催化剂（酶）v2）物质的转运和储存）物质的转运和储存v3）运动与支持作用）运动与支持作用v4）免疫保护作用）免疫保护作用v5）代谢调节作用）代谢调节作用v6）参与细胞间信息传递）参与细胞间信息传递氧化供能氧化供能2.1.12.1.1依据蛋白质的形状分类依据蛋白质的形状分类 1 1）球状蛋白质：（）球状蛋白质：（globular proteinglobular protein）外形接近球形或椭圆形，溶解）外形接近球形或椭圆形，溶解性较好，能形成结晶，大多数蛋白质属于这一类。性较好，

3、能形成结晶，大多数蛋白质属于这一类。2 2）纤维状蛋白质）纤维状蛋白质(fibrous protein)(fibrous protein)分子构象类似纤维或细棒。它又分子构象类似纤维或细棒。它又可分为可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。可分为可溶性纤维状蛋白质和不溶性纤维状蛋白质。3 3）膜蛋白质）膜蛋白质 2.1 蛋白质的分类蛋白质的分类1.1.简单蛋白简单蛋白(simple protein)(simple protein) ：又称为单纯蛋白质；这类蛋白又称为单纯蛋白质；这类蛋白质只含由质只含由 - -氨基酸组成的肽链，不含其它成分。氨基酸组成的肽链，不含其它成分。（1 1）清蛋白和球蛋

4、白：）清蛋白和球蛋白：albumin and globulinalbumin and globulin广泛存在于动物组织中。广泛存在于动物组织中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。清蛋白易溶于水，球蛋白微溶于水，易溶于稀酸中。（2 2）谷蛋白）谷蛋白(glutelin)(glutelin)和醇溶谷蛋白和醇溶谷蛋白(prolamin)(prolamin)：植物蛋白，不溶于：植物蛋白，不溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于水，易溶于稀酸、稀碱中，后者可溶于70708080乙醇中。乙醇中。（3 3）精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中。）精蛋白和组蛋白：碱性蛋白质，存在与细胞核中

5、。（4 4）硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为角蛋）硬蛋白：存在于各种软骨、腱、毛、发、丝等组织中，分为角蛋白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。白、胶原蛋白、弹性蛋白和丝蛋白。（1 1）核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。）核蛋白：由简单蛋白与核酸结合而成。如细胞核中的核糖核蛋白等。（2 2）糖蛋白与蛋白聚糖：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖）糖蛋白与蛋白聚糖：由简单蛋白与糖类物质组成。如细胞膜中的糖蛋白等。蛋白等。糖与蛋白质的结合方式：糖与蛋白质的结合方式：O O连接和连接和N N连接连接（3 3）脂蛋白：由简单蛋白与脂类结合而成。）脂蛋白：由简

6、单蛋白与脂类结合而成。 如血清如血清 - -， - -脂蛋白等。脂蛋白等。（4 4）色蛋白：由简单蛋白与色素结合而成。如血红素、过氧化氢酶、细）色蛋白：由简单蛋白与色素结合而成。如血红素、过氧化氢酶、细胞色素胞色素c c等。等。 （5 5）磷蛋白：由简单蛋白质和磷酸组成。如胃蛋白酶、酪蛋白、角蛋）磷蛋白：由简单蛋白质和磷酸组成。如胃蛋白酶、酪蛋白、角蛋白、弹性蛋白、丝心蛋白等。白、弹性蛋白、丝心蛋白等。2.结合蛋白结合蛋白(conjugated protein)：由简单蛋白与其它非蛋白成分结由简单蛋白与其它非蛋白成分结 合而成合而成2.1.32.1.3按功能分类按功能分类u酶酶u调节蛋白调节蛋

7、白u贮存蛋白贮存蛋白u转运蛋白质转运蛋白质u运动蛋白运动蛋白u防御蛋白和毒蛋白防御蛋白和毒蛋白u受体蛋白受体蛋白u支架蛋白支架蛋白u结构蛋白结构蛋白u异常功能异常功能2.2 蛋白质的组成单位蛋白质的组成单位-氨基酸氨基酸氨基酸氨基酸 （amino acid) 是蛋白质的基本组成单是蛋白质的基本组成单位。从细菌到人类，所有蛋白质都由位。从细菌到人类，所有蛋白质都由2020种标准种标准氨基酸组成。氨基酸组成。2.2.12.2.1氨基酸的结构通式氨基酸的结构通式C O O HCHH2NR不带电形式不带电形式 H2NCHCOOHR +H3NCHCOO-R两性离子形式两性离子形式氨基酸的结构式书写氨基酸

8、的结构式书写20种常见氨基酸的名称和结构式种常见氨基酸的名称和结构式甘氨酸甘氨酸(a-氨基乙酸氨基乙酸)Glycine 丙氨酸丙氨酸(a-氨基丙酸氨基丙酸)Alanine 亮氨酸亮氨酸(-甲基甲基-a-氨基戊酸氨基戊酸)*Leucine 异亮氨酸异亮氨酸(-甲基甲基-a-氨基戊氨基戊酸酸)*Isoleucine 缬氨酸缬氨酸(b-甲基甲基-a-氨基丁酸氨基丁酸)*Valine 脯氨酸脯氨酸(a-四氢吡咯甲酸四氢吡咯甲酸)Proline 苯丙氨酸苯丙氨酸(b-苯基苯基-a-氨基丙酸氨基丙酸)*Phenylalanine 蛋蛋(甲硫甲硫)氨酸氨酸(a-氨基氨基-甲硫基戊酸甲硫基戊酸) *Methi

9、onine 色氨酸色氨酸a-氨基氨基-(3-吲哚基吲哚基)丙酸丙酸*Tryptophan 丝氨酸(a-氨基-羟基丙酸)Serine 谷氨酰胺(a-氨基戊酰胺酸)Glutamine 天冬酰胺(a-氨基丁酰胺酸)Asparagine 苏氨酸(a-氨基-b-羟基丁酸)*Threonine 半胱氨酸(a-氨基-b-巯基丙酸)Cysteine 酪氨酸(a-氨基-对羟苯基丙酸)Tyrosine 天冬氨酸(a-氨基丁二酸)Aspartic acid 谷氨酸(a-氨基戊二酸)Glutamic acid 赖氨酸(a,w-二氨基己酸)*Lysine 精氨酸(a-氨基-d-胍基戊酸)Arginine 组氨酸a-氨基

10、-b-(4-咪唑基)丙酸Histidine 20种标准氨基酸种标准氨基酸蛋白质的元素组成：蛋白质的元素组成：C（5055%）、）、H（68%）、）、O（2023%）、）、N（1518%）、）、 S（04%）、）、Others: P、Cu、Fe、Zn、Mn、Se、I等等v蛋白质氮占生物组织中所有含氮物质的绝大部分。蛋白质氮占生物组织中所有含氮物质的绝大部分。因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白因此，可以将生物组织的含氮量近似地看作蛋白质的含氮量。质的含氮量。v由于大多数蛋白质的含氮量接近于由于大多数蛋白质的含氮量接近于16%，所以，所以，可以根据生物样品中的含氮量来计算蛋白质的大可以根据生

11、物样品中的含氮量来计算蛋白质的大概含量概含量蛋白质含量蛋白氮蛋白质含量蛋白氮6 .256 .25 16的倒数，每测定的倒数，每测定g 氮相当于氮相当于6 .25g的的蛋白质。也就是蛋白质。也就是1 g 氮所代表的蛋白质量（克数）氮所代表的蛋白质量（克数）蛋白质含量的测定（自学）蛋白质含量的测定（自学） 凯氏定氮法凯氏定氮法 (测定氮的经典方法测定氮的经典方法) 优点：对原料无选择性，仪器简单，优点：对原料无选择性，仪器简单， 方法也简单；方法也简单； 缺点：易将无机氮缺点：易将无机氮(如核酸中的氮如核酸中的氮) 都归入蛋白质中都归入蛋白质中,不精确。不精确。v除了上法外，还有除了上法外，还有v

12、双缩脲法双缩脲法 ，Folin酚，考马斯亮兰酚，考马斯亮兰G250比色法等比色法等总结v从蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种，除从蛋白质水解物中分离出来的氨基酸有二十种，除脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸在结构上的脯氨酸和羟脯氨酸外，这些天然氨基酸在结构上的共同特点为：共同特点为：(1)与羧基相邻的与羧基相邻的-碳原子上都有一个氨基，因而称为碳原子上都有一个氨基，因而称为-氨基酸氨基酸(2)除甘氨酸外除甘氨酸外,其它所有氨基酸分子中的其它所有氨基酸分子中的-碳原子都为碳原子都为不对称碳原子不对称碳原子,所以：所以： A.氨基酸都具有旋光性，氨基酸都具有旋光性， 左旋（左旋（- -）或右旋

13、（）或右旋（+ +） B.每一种氨基酸都具有每一种氨基酸都具有D-型和型和L-型两种立体异构体。型两种立体异构体。目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为目前已知的天然蛋白质中氨基酸都为L-型。型。2.2.22.2.2氨基酸的分类氨基酸的分类1 1.根据根据R R的化学结构的化学结构（1 1）脂肪族氨基酸：）脂肪族氨基酸： 1 1）疏水性：）疏水性：GlyGly、AlaAla、ValVal、LeuLeu、IleIle、MetMet、CysCys； 2 2）极性：）极性：ArgArg、LysLys、AspAsp、GluGlu、AsnAsn、GlnGln、SerSer、ThrThr（2 2）芳香族氨基酸：

14、）芳香族氨基酸：PhePhe、TyrTyr（3 3）杂环氨基酸：）杂环氨基酸：TrpTrp、HisHis（4 4）杂环亚氨基酸：）杂环亚氨基酸：ProPro2.根据根据R的极性的极性（1）极性氨基酸：）极性氨基酸： 1）不带电：）不带电：Ser、Thr、Asn、Gln、Tyr、Cys； 2）带正电：）带正电：His、Lys、Arg； 3）带负电：）带负电：Asp、Glu（2）非极性氨基酸：）非极性氨基酸： Gly、Ala、Val、Leu、Ile、Phe、Met、Pro、Trp总结总结v属于芳香族氨基酸的是：属于芳香族氨基酸的是：属于亚氨基酸的是：属于亚氨基酸的是：含硫氨基酸包括：含硫氨基酸包括

15、：几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸CH2CHCOO-NH2+CH2CH2CH2CHCOO-NH2+CH2CH2 脯氨酸脯氨酸（亚氨基酸）（亚氨基酸）-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3-OOC-CH-CH2-S+NH3S-CH2-CH-COO-+NH3 半胱氨酸半胱氨酸 +胱氨酸胱氨酸二硫键二硫键-HH-OOC-CH-CH2-SH+NH3-OOC-CH-CH2-SH+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3HS-CH2-CH-COO-+NH3几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸NHHOCOOH4-羟基脯氨酸H2NCH2CHCH2CH2CHCOOHOHNH25-羟基赖氨酸N

16、H2CH3NHCH2CHCH2CH2CHCOOH6-N-甲基赖氨酸HOIICH2CHCOOHNH23,5-二碘酪氨酸 这些氨基酸都是由相应的基本氨基酸衍生而来的几种特殊氨基酸几种特殊氨基酸2.2.32.2.3氨基酸的重要理化性质氨基酸的重要理化性质 一般物理性质一般物理性质:氨基酸一般有味（无味、甜、苦、鲜等）氨基酸一般有味（无味、甜、苦、鲜等）一般均溶于水，溶于酸、碱中；不溶于有机一般均溶于水，溶于酸、碱中；不溶于有机溶剂。溶剂。高熔点高熔点（200以上）以上） 除甘氨酸外，氨基酸含有一个手性-碳原子，因此都具有旋光性左旋（-）或右旋（+），比旋光度是氨基酸的重要物理常数之一，是鉴别各种氨基

17、酸的重要依据。氨基酸的光吸收氨基酸的光吸收构成蛋白质的20种氨基酸在可见光区都没有光吸收，但在远紫外区( pI aa “ - ” aa向正极移动pH pI aa “ + ” aa向负极移动pH = pI aa “ 0 ” aa不移动v溶液的溶液的pH偏离偏离p pI I越远，氨基酸带净电荷越多，在电越远，氨基酸带净电荷越多，在电场中越容易分离。场中越容易分离。v利用不同的氨基酸在同一利用不同的氨基酸在同一pH下所带电荷不同而分离，下所带电荷不同而分离，如用阴离子交换树脂柱层析分离氨基酸。如用阴离子交换树脂柱层析分离氨基酸。v等电点时等电点时,氨基酸溶解度最小，容易聚集沉淀。氨基酸溶解度最小，容

18、易聚集沉淀。(2)氨基酸的化学性质H2N C HC O O HR+H3N C HC O O-RH2N C HC O O HR+H3N C HC O O-R1 1）与茚三酮的反应）与茚三酮的反应v氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧氨基酸与水合茚三酮共热，发生氧化脱氨反应，生成化脱氨反应，生成NH3与酮酸。水合与酮酸。水合茚三酮变为还原型茚三酮。茚三酮变为还原型茚三酮。v加热过程中酮酸裂解，放出加热过程中酮酸裂解，放出CO2，自身变为少一个碳的醛。水合茚三自身变为少一个碳的醛。水合茚三酮变为还原型茚三酮。酮变为还原型茚三酮。vNH3与水合茚三酮及还原型茚三酮脱与水合茚三酮及还原型茚三酮脱水缩合，生成水

19、缩合，生成蓝紫色化合物蓝紫色化合物。脯氨酸与茚三酮反应的产物：脯氨酸与茚三酮反应的产物：N N+ +黄色化合物反应要点与应用vA.该反应由该反应由-NH2与与-COOH共同参与共同参与vB.茚三酮是强氧化剂茚三酮是强氧化剂vC.用于氨基酸的定性、定量分析用于氨基酸的定性、定量分析v该反应非常灵敏，可在该反应非常灵敏，可在570nm测定吸测定吸光值光值v测定范围：测定范围：0.550g/ml vD.脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮直接生成黄脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮直接生成黄色物质（不释放色物质（不释放NH3）2 2）与甲醛的反应）与甲醛的反应：氨基酸的甲醛滴定法RCHCOO-NH3+RCHCOO-NH2

20、+ H+OH-中和滴定HCHORCHCOO-NHCH2OHHCHORCHCOO-N(CH2OH)2A.为- NH2的反应B.在常温，中性条件，甲醛与- NH2很快反应，生成羟甲基衍生物，释放氢离子。应用氨基酸定量分析-氨基酸的甲醛滴定法（间接滴定）vA.直接滴定，终点pH过高（12），没有适当指示剂。vB.与甲醛反应，滴定终点在9左右，可用酚酞作指示剂。vC.释放一个氢离子，相当于一个氨基（摩尔比1：1）简单快速，一般用于测定蛋白质的水解或合成的速度.3 3）与）与2,4-2,4-二硝基氟苯二硝基氟苯(DNFB)(DNFB)的反应的反应NO2FO2N+ HN2CHCOOHRNO2O2NHN2C

21、HCOOHR + HF弱碱性DNP-氨基酸（黄色）A.为为- NH2的反应的反应B.氨基酸氨基酸- NH2的一个的一个H原子，在弱碱性条件下，与原子，在弱碱性条件下，与DNFB发生芳环取代，生成黄色的发生芳环取代，生成黄色的2,4二硝基苯基氨基二硝基苯基氨基酸（酸（DNP氨基酸，稳定）氨基酸，稳定）应应 用用v鉴定多肽或蛋白质的鉴定多肽或蛋白质的N-末端氨基酸末端氨基酸v此反应首先由此反应首先由Sanger应用测定蛋白质中氨应用测定蛋白质中氨基酸的排序，确定了胰岛素的一级结构基酸的排序，确定了胰岛素的一级结构v5二甲氨基萘磺酰氯（二甲氨基萘磺酰氯（DNSCl，又称，又称丹磺酰氯）可以代替丹磺酰

22、氯）可以代替DNFB试剂测定蛋白试剂测定蛋白质的质的N端氨基酸端氨基酸肽链氨基末端残基的检测（肽链氨基末端残基的检测（ SangerSanger法）法） 黄色黄色: :根据它在薄层层析或纸电泳中的根据它在薄层层析或纸电泳中的迁移特性进行鉴定迁移特性进行鉴定H2NCHCOOH + RNCH3CH3O=S=OCl5-二甲氨基萘磺酰氯二甲氨基萘磺酰氯（DNS-Cl，为荧光试剂），为荧光试剂）pH9.7 40NCH3CH3O=S=OHNCHCOOH RDNS-氨基酸氨基酸二甲氨基萘磺酰氯的简称丹磺酰氯丹磺酰氯可以取代DNFB测定蛋白质N端氨基酸，灵敏度高 与与5-二甲氨基萘磺酰氯的反应二甲氨基萘磺酰氯

23、的反应（4 4）与异硫氰酸苯酯（）与异硫氰酸苯酯（PITCPITC）的反应）的反应N=C=S + NCHCOOHHHRPITCNCNCHCOOHHHRSPTC-氨基酸NCHRSNCCOPTH-氨基酸pH8.3无水HF重复测定多重复测定多肽链肽链N端氨基端氨基酸排列顺序，酸排列顺序，设计出设计出“多多肽顺序自动肽顺序自动分析仪分析仪”反应特点及应用v为为- NH2的反应的反应v由由Edman于于1950年首先提出年首先提出v用于用于N末端分析末端分析，又称，又称Edman降解法降解法, 此法的特点是能够不断重复循环，将肽链此法的特点是能够不断重复循环，将肽链N-端氨基酸残基逐一进行标记和解离。端

24、氨基酸残基逐一进行标记和解离。5 5）与亚硝酸的反应）与亚硝酸的反应NH2CHCOOH +HNO2 R-CH-COOH + N2 R OH+H2O 应用：在标准条件下测定生成氮气的体积，可计算氨基酸的应用：在标准条件下测定生成氮气的体积，可计算氨基酸的 量，称为范斯莱克法。量，称为范斯莱克法。 6）与荧光胺反应）与荧光胺反应氨基酸与荧光胺反应生氨基酸与荧光胺反应生成具有荧光的产物，是成具有荧光的产物，是- NH2的反应的反应用于氨基酸定量分析用于氨基酸定量分析 根据荧光强度测定氨基酸根据荧光强度测定氨基酸含量（含量（ng级）（激发波长级）（激发波长x=390nm， 发射波长发射波长m=475n

25、m）。）。荧光胺荧光胺H2NCHCH2SSHNO2HOOCSNO2COOHCOOH+SSNO2NO2HOOCCOOHH2NCHCOOH +CH2SHpH8.0硫代硝基苯甲酸硫代硝基苯甲酸(412nm)应用应用:-SH的反应的反应,测定样品中游离测定样品中游离- SH的含量的含量7 7）与）与5,5-5,5-双硫基双硫基- -双（双（2-)2-)硝基苯甲酸反应硝基苯甲酸反应2.3 肽肽2.3.1肽的结构肽的结构一个氨基酸的一个氨基酸的-羧基和另一个氨基酸的羧基和另一个氨基酸的-氨基脱水缩合而氨基脱水缩合而成的化合物称为成的化合物称为肽肽。 氨基酸之间脱水后形成的键称氨基酸之间脱水后形成的键称肽键

26、肽键（酰胺键）（酰胺键）。 多肽（链）多肽（链）：多个氨基酸残基之间以肽键连接起来的链状化合物叫多：多个氨基酸残基之间以肽键连接起来的链状化合物叫多 肽或多肽链。肽或多肽链。氨基酸残基：氨基酸残基：N N 末端：多肽链中有末端：多肽链中有自由氨基自由氨基的一端的一端C C 末端：多肽链中有末端：多肽链中有自由羧基自由羧基的一端的一端多肽链有方向性：多肽链有方向性：N端C端肽链写法肽链写法：肽键的特点肽键的特点肽键平面肽键平面由于肽键具有部分双键的性质，使由于肽键具有部分双键的性质，使参与肽键构成的六个原子（参与肽键构成的六个原子（ ）被束缚在同一平面上，这一平面称为肽键）被束缚在同一平面上，这

27、一平面称为肽键平面或肽单元。平面或肽单元。生物活性肽生物活性肽（biological active peptide,BAP）是能够调节生物机体的生命活动或具有某些生是能够调节生物机体的生命活动或具有某些生理活性的寡肽和多肽的总称。理活性的寡肽和多肽的总称。2.3.2生物活性肽的功能（1）谷光甘肽（）谷光甘肽（GSH）H2N-CHCH2CH2COCOOH-GluNHCHCOCH2SHCysNHCH2COOHGly2GSHGSSG 分子中具有一个由谷氨酸的分子中具有一个由谷氨酸的 - -羧基和羧基和半胱氨酸的半胱氨酸的 - -氨基脱水缩合的氨基脱水缩合的 - -肽键肽键含有自由的巯基，具有很强的还

28、原性，含有自由的巯基，具有很强的还原性，可作为体内重要的还原剂，保护某些蛋可作为体内重要的还原剂，保护某些蛋白质或酶分子中的巯基免遭氧化，使其白质或酶分子中的巯基免遭氧化，使其处于活性状态。处于活性状态。 谷光甘肽的作用谷光甘肽的作用GSH过氧过氧化物酶化物酶H2O2 2GSH 2H2O GSSG GSH还原酶还原酶NADPH+H+ NADP+ 氧化型谷胱甘肽氧化型谷胱甘肽举例举例（2 2）催产素和升压素）催产素和升压素（3）促肾上腺皮质激素（）促肾上腺皮质激素（ACTH） 39肽，活性部位为第410位的7肽片段： Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly。（4）脑肽）脑肽脑啡肽

29、具有强烈的镇痛作用（强于吗啡），不上瘾。Met-脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-MetLeu-脑啡肽 Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu-内啡肽（31肽）具有较强的吗啡样活性与镇痛作用。（5）胰高血糖素）胰高血糖素 由胰岛由胰岛-细胞分泌（细胞分泌（-细胞分泌胰岛素），细胞分泌胰岛素），29肽。胰高血糖素调节肽。胰高血糖素调节 维持血糖浓度。维持血糖浓度。（6）胃肠道活性肽）胃肠道活性肽2.4 蛋白质的结构蛋白质的结构 蛋白质是氨基酸以肽键相互连接的线性序列蛋白质是氨基酸以肽键相互连接的线性序列,在蛋白质中，在蛋白质中，多肽链折叠形成特殊的形状（构象多肽链折叠形成特殊的形状（构象,

30、conformation）。在结构）。在结构中，这种构象是原子的三维排列，由氨基酸序列决定。中，这种构象是原子的三维排列，由氨基酸序列决定。2.4.1蛋白质的一级结构（化学结构）蛋白质的一级结构（化学结构）蛋白质的一级结构指蛋白蛋白质的一级结构指蛋白质多肽链中质多肽链中AA的序列，也的序列，也包括二硫键的位置。包括二硫键的位置。 在基因编码的蛋白质中，在基因编码的蛋白质中，这种序列是由这种序列是由mRNAmRNA中的核中的核苷酸序列决定的。苷酸序列决定的。 一级结构中包含的共价键一级结构中包含的共价键 主要指肽键（主要指肽键（peptide peptide bondbond）和二硫键）和二硫键

31、（disulfide bonddisulfide bond）NH CH COR4NH CH COR3NH CH COR2NH CH COR1HPhe-Val-Asn-Gln-His-Leu-Cys-Gly-Ser-His- Leu-Val- Glu- Ala- Leu- Tyr Leu -Val-Cys-GlyGlu-Arg-Gly-Phe-Phe-Tyr-Thr-Pro-Lys-AlaOHB链157101519 20212530HGly-Ile-Val-Glu-Gln-Cys-Cys-Ala-Ser-Val-Cys-Ser-Leu-Tyr-Gln-Leu-Glu-Asn-Tyr-Cys-As

32、nOH15102015A链711621SSSS牛胰岛素的化学结构牛胰岛素的化学结构SS2.4.2 蛋白质的空间结构（构象、高级结构）蛋白质的空间结构（构象、高级结构）构象是蛋白质分子中所有原子在三维空间的排列构象是蛋白质分子中所有原子在三维空间的排列分布和肽链的走向分布和肽链的走向。研究蛋白质构象的方法研究蛋白质构象的方法v一X射线衍射法：v二研究溶液中蛋白质构象的光谱方法：v1紫外差光谱v2荧光和荧光偏振v3圆二色性v4核磁共振（NMR）共价键次级键化学键化学键 肽键一级结构氢键二硫键二、三、四级结构疏水作用盐键范德华力三、四级结构3.3.稳定蛋白质空间结构的作用力稳定蛋白质空间结构的作用力

33、（2 2）蛋白质的二级结构）蛋白质的二级结构蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸链主链骨架原子的相对空间位置，并不涉及氨基酸残基侧链的构象残基侧链的构象 。主要的化学键主要的化学键： 氢键氢键1）-螺旋（螺旋（-helix） Pauling和和Corey于于1951年提出年提出是多肽链的主链原子沿一中心轴是多肽链的主链原子沿一中心轴盘绕所形成的有规律的螺旋构象盘绕所形成的有规律的螺旋构象 结构特征结构特征 螺旋的每圈有螺旋的每圈有3.6个氨基酸个氨基酸残基，每个氨基酸残基的高度残基，每个氨基酸残

34、基的高度为为0.15nm，螺旋间距离为，螺旋间距离为0.54nm，每个残基沿轴旋转，每个残基沿轴旋转100，螺旋直径，螺旋直径0.6nm。（2）每个肽键的羰基氧与远在）每个肽键的羰基氧与远在第四个氨基酸氨基上的氢形成第四个氨基酸氨基上的氢形成氢键，氢键的走向平行于螺旋氢键，氢键的走向平行于螺旋轴，所有肽键都能参与链内氢轴，所有肽键都能参与链内氢键的形成。键的形成。 （要点：单链，右旋，一圈3.6残基，上升0.54nm维系力：氢键，且全部平行，R基指向外侧）结构特征结构特征螺旋的帽化-螺旋（螺旋（-helix）结构特点结构特点C(NHCCO)3 NOHHR3.613 螺旋 (ns)此外还有：此外

35、还有： 310， 4.416(3)R侧链基团伸向螺旋的外侧。侧链基团伸向螺旋的外侧。RRRRRRRRR螺旋的横截面(4）绝大多数天然蛋白质中的绝大多数天然蛋白质中的 - -螺旋几乎都是螺旋几乎都是右手螺旋右手螺旋。结构特征：结构特征：影响影响-螺旋形成的因素螺旋形成的因素v在多肽链中连续的出现在多肽链中连续的出现带同种电荷的极带同种电荷的极性氨基酸性氨基酸，-螺旋就不稳定。（螺旋就不稳定。（Lys、Glu） v在多肽链中只要出现在多肽链中只要出现pro，-螺旋就被螺旋就被中断，产生一个弯曲（中断，产生一个弯曲（bend）或结节。）或结节。 vGly的的R基太小，难以形成基太小，难以形成-螺旋所

36、需的螺旋所需的两面角，所以和两面角，所以和Pro一样也是螺旋的最一样也是螺旋的最大破坏者。大破坏者。v肽链中连续出现带肽链中连续出现带庞大侧链庞大侧链的氨基酸如的氨基酸如Ile，由于空间位阻，也难以形成，由于空间位阻，也难以形成-螺旋。螺旋。 2）-折叠结构（折叠结构（-pleated sheet） - -折叠或折叠或 - -折叠片，也称折叠片，也称 - -结构或结构或 - -构象。构象。 - -折叠是由两条或多条几乎完折叠是由两条或多条几乎完全伸展的多肽链平行排列，通全伸展的多肽链平行排列，通过链间的氢键进行交联而形成过链间的氢键进行交联而形成的，或一条肽链内的不同肽段的，或一条肽链内的不同

37、肽段间靠氢键而形成的。肽链的主间靠氢键而形成的。肽链的主链呈锯齿状折叠构象。链呈锯齿状折叠构象。 - -折叠结构几乎所有肽键都参折叠结构几乎所有肽键都参与链间氢键的形成，与链间氢键的形成，氢键与链氢键与链的长轴接近垂直的长轴接近垂直. .氨基酸侧链伸展在折叠片的上氨基酸侧链伸展在折叠片的上面和下面面和下面v - -折叠有两种类型：折叠有两种类型： 一种为一种为平行式平行式，另一种为，另一种为反平行式反平行式N N端在同一端。端在同一端。氨基酸残基的长氨基酸残基的长度度0.325nm0.325nmN N端不在同一端。端不在同一端。氨基酸残基的长度氨基酸残基的长度0.347nm0.347nm丝心蛋

38、白的构象丝心蛋白的构象v丝心蛋白的性能丝心蛋白的性能 丝心蛋白具有抗张丝心蛋白具有抗张强度高，质地柔软的特性。具有强度高，质地柔软的特性。具有0.7nm的周期。的周期。v丝心蛋白丝心蛋白(fibroin) 是蚕丝和蜘蛛丝是蚕丝和蜘蛛丝的一种蛋白质。的一种蛋白质。v丝心蛋白的构象丝心蛋白的构象 丝心蛋白是典型的丝心蛋白是典型的反平行反平行折叠片折叠片，多肽链取锯齿状折叠构象。侧链交多肽链取锯齿状折叠构象。侧链交替地分布在折叠片的两侧。反平行替地分布在折叠片的两侧。反平行折叠片以平行的方式堆积成多层结折叠片以平行的方式堆积成多层结构。链间主要氢键连接，层间主要构。链间主要氢键连接，层间主要靠范德华

39、力维系。靠范德华力维系。N1CHCC2CHNHO=C3CHNC4CHNRRHOHRROHO特点：特点：肽链回折肽链回折180180度度, ,在在 - -转角转角部分，由四个氨基酸残基组部分，由四个氨基酸残基组成成;(;(常见氨基酸：常见氨基酸：Pro,GlyPro,Gly) )以主链间氢键维持稳定。以主链间氢键维持稳定。弯曲处的第一个氨基酸残基弯曲处的第一个氨基酸残基的的 -C=O -C=O 和第四个残基的和第四个残基的 N-H N-H 之间形成氢键，形成一之间形成氢键，形成一个不很稳定的环状结构。个不很稳定的环状结构。这类结构主要存在于球状这类结构主要存在于球状蛋白分子中。蛋白分子中。3 3

40、） - -转角（转角（-turn）4 4） 凸起（凸起（-bugle-bugle）v在某些反平行的在某些反平行的片层中，片层中，有一股有一股折叠中有一个残基折叠中有一个残基的肽键没有参与和相邻的的肽键没有参与和相邻的折叠间的氢键，致使这一折叠间的氢键，致使这一部位有所凸起，这一现象部位有所凸起，这一现象被称为被称为凸起凸起 ( bulge)。插入的氨基酸残基4 4） 凸起（凸起（-bugle-bugle）v是一种小片的非重复性是一种小片的非重复性结构，能单独存在，但结构，能单独存在，但大多数经常作为反平行大多数经常作为反平行折叠片中的一种不规折叠片中的一种不规则情况而存在。则情况而存在。v凸起

41、可认为是凸起可认为是折叠折叠股中额外插入的一个残股中额外插入的一个残基，它使得在两个正常基，它使得在两个正常氢键之间、在凸起折叠氢键之间、在凸起折叠股上是两个残基，而另股上是两个残基，而另一侧的正常股上是一个一侧的正常股上是一个残基。残基。 5）无规卷曲或自由回转无规卷曲或自由回转(random coil)v指无规律的松散肽链结构v在一般球蛋白分子中，往往含有大量的无规则卷曲，它使蛋白质肽链从整体上形成球状构象。v没有一定规律的松散肽链结构。常常是酶的活性部位。（3） 超二级结构和结构域超二级结构和结构域超二级结构超二级结构 : :是指若干是指若干相邻的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形相邻

42、的二级结构中的构象单元彼此相互作用，形成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体。成有规则的，在空间上能辨认的二级结构组合体。是蛋白质二级结构至三级结构层次的一种过渡态是蛋白质二级结构至三级结构层次的一种过渡态构象层次。构象层次。超二级结构的基本类型：超二级结构的基本类型： 、 、 、 X 超二级结构的基本类型：模体模体在许多蛋白质分子中，可发现二个或在许多蛋白质分子中，可发现二个或三个具有二级结构的肽段，在空间上相互三个具有二级结构的肽段，在空间上相互接近，形成一个特殊的空间构象，被称为接近，形成一个特殊的空间构象，被称为模体模体(motif)。钙结合蛋白中结钙结合蛋白中结合钙离子的模体合钙

43、离子的模体 锌指结构锌指结构 结构域结构域(domain)是球状蛋白质的折叠单位。多肽链在超二级结构的基是球状蛋白质的折叠单位。多肽链在超二级结构的基础上进一步绕曲折叠成紧密的近似球形的结构，具有础上进一步绕曲折叠成紧密的近似球形的结构，具有部分生物功能。部分生物功能。对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个以对于较大的蛋白质分子或亚基，多肽链往往由两个以上结构域缔合而成三级结构。上结构域缔合而成三级结构。类型：类型： -螺旋域；螺旋域； -折叠域；折叠域； +域；域； /域；无规则卷曲域；无规则卷曲+-回折域；回折域； 无规则卷曲无规则卷曲+ -螺旋结构域等螺旋结构域等（4）蛋白质的三级

44、结构）蛋白质的三级结构v多肽链在二级结构、超二级结构和结构域的基础上，多肽链在二级结构、超二级结构和结构域的基础上，主链构象和侧链构象主链构象和侧链构象相互作用，沿三维空间多方向相互作用，沿三维空间多方向卷曲，进一步盘曲折叠形成特定的球状分子结构。卷曲，进一步盘曲折叠形成特定的球状分子结构。v是多肽链上的所有原子（包括主链和侧链）在三维是多肽链上的所有原子（包括主链和侧链）在三维空间的分布。空间的分布。三级结构的特征三级结构的特征含多种二级结构单元，如含多种二级结构单元，如 螺旋、螺旋、 折叠等；折叠等； 有明显的折叠层次；有明显的折叠层次； 是紧密的球状或椭球状实体；是紧密的球状或椭球状实体

45、； 分子表面有一空穴分子表面有一空穴( (活性部位活性部位) )； 疏水侧链埋藏在分子内部，疏水侧链埋藏在分子内部， 亲水侧链暴露在分子表面。亲水侧链暴露在分子表面。 主要由疏水作用力维持主要由疏水作用力维持实例实例：肌红蛋白肌红蛋白抹香鲸肌红蛋白（抹香鲸肌红蛋白（Myoglobin）的三级结构）的三级结构肌红蛋白的结构与功能肌红蛋白的结构与功能（1 1）功能）功能：哺乳动物肌肉中哺乳动物肌肉中 储存氧并运输氧的蛋白。储存氧并运输氧的蛋白。（2 2）肌红蛋白的结构特点）肌红蛋白的结构特点： a .a .一条多肽链，一条多肽链，153153个氨基酸残基，一个个氨基酸残基，一个血红素辅基，血红素辅

46、基，分子量分子量1780017800道尔顿。道尔顿。 b.b.肌红蛋白的整个分子具有外圆中空的不对称结构，肌红蛋白的整个分子具有外圆中空的不对称结构，肽链共折叠成肽链共折叠成8 8段长度不等的段长度不等的 - -螺旋体（螺旋体（A-HA-H），最长），最长的有的有2323个氨基酸个氨基酸残基，残基，最短的有最短的有7 7个氨基酸个氨基酸残基。拐弯残基。拐弯处多由处多由ProPro、SerSer、IleIle、ThrThr等组成。等组成。 c.c.具有极性侧链的氨基酸残基分布于分子表面，而带具有极性侧链的氨基酸残基分布于分子表面，而带非极性侧链的氨基酸残基多分布于分子内部，使非极性侧链的氨基酸残

47、基多分布于分子内部，使肌红肌红蛋白成为可溶性蛋白。蛋白成为可溶性蛋白。辅基血红素辅基血红素 FeFe原子被称为原卟啉原子被称为原卟啉IXIX（9 9）的有机分子固定）的有机分子固定的，共称血红素的，共称血红素（HemeHeme），使血液呈红），使血液呈红色。色。 Fe Fe有六个配位键，其有六个配位键，其中四个与卟啉的吡咯环中四个与卟啉的吡咯环的的N N原子相连。原子相连。Fe2+Fe2+称亚称亚铁血红素，铁血红素，Fe3+Fe3+为高铁为高铁血红素，只有血红素，只有Fe2+Fe2+的蛋的蛋白才能结合氧白才能结合氧肌红蛋白的结构肌红蛋白的结构氧与肌红蛋白的结合氧与肌红蛋白的结合Fe2+Fe2+

48、与珠蛋白的与珠蛋白的9393位位（F8F8）HisHis的咪唑基的咪唑基N N相连；相连；当形成氧合肌红蛋白当形成氧合肌红蛋白（oxy-myoglobinoxy-myoglobin）时，）时，第第6 6个配位键与氧结合；个配位键与氧结合；当成高铁肌红蛋白时，当成高铁肌红蛋白时，第第6 6配位键被配位键被H H2 2O O分子占据；分子占据；在氧结合一侧有一在氧结合一侧有一E7 E7 HisHis氧结合部位形成空间氧结合部位形成空间位阻区位阻区肌红蛋白的结构肌红蛋白的结构（5 5） 蛋白质的四级结构蛋白质的四级结构四级结构四级结构是指由两是指由两 个或两个以上具有三级结构个或两个以上具有三级结构

49、的的多肽链多肽链按一定方式聚合而成的特定构象的蛋按一定方式聚合而成的特定构象的蛋白质分子。白质分子。其中每条多肽链称为其中每条多肽链称为亚基亚基(subunit)。 通常通常亚基亚基只有一条多肽链，但有的只有一条多肽链，但有的亚基由两条亚基由两条或多条多肽链组成或多条多肽链组成，亚基单独存在时无生物学，亚基单独存在时无生物学活性。当亚基聚合成为具有完整四级结构的蛋活性。当亚基聚合成为具有完整四级结构的蛋白质后，才有功能。白质后，才有功能。亚基之间的结合力主要是疏水作用，其次是氢亚基之间的结合力主要是疏水作用，其次是氢键和离子键。键和离子键。 一般来说具有四级结构的蛋白属于寡聚蛋白。一般来说具有

50、四级结构的蛋白属于寡聚蛋白。血红蛋白的结构血红蛋白的结构 Hb Hb分子近似球形；分子近似球形；M.W.=65 000M.W.=65 000 Hb Hb由四个亚基组成由四个亚基组成（二条（二条亚基和二条亚基和二条亚基）；亚基）； 亚基（亚基（141aa141aa）比）比亚基（亚基（146aa146aa）短，）短，但都比肌红蛋白链（但都比肌红蛋白链（153aa153aa）短；这主要）短；这主要是因为末端是因为末端H H螺旋比较短；螺旋比较短； 4 4个血红素分别位于四条多肽链的个血红素分别位于四条多肽链的E E和和F F螺旋之间的裂隙处，并暴露于分子表面。螺旋之间的裂隙处，并暴露于分子表面。 H

51、b- Hb- 和和Hb- Hb- 及及MbMb虽然三级结构相虽然三级结构相似，但其氨基酸序列却有很大的不同，似，但其氨基酸序列却有很大的不同，约只有约只有2727个位置是相同的。个位置是相同的。四级缔合在结构和功能上的优越性四级缔合在结构和功能上的优越性v1、降低比表面积，增加蛋白质的稳定性、降低比表面积，增加蛋白质的稳定性v2、丰富蛋白质的结构，以行使更复杂的功能。、丰富蛋白质的结构，以行使更复杂的功能。v3、提高基因编码的效率和经济性。、提高基因编码的效率和经济性。v4、使酶的催化基团汇集，提高催化效率。、使酶的催化基团汇集，提高催化效率。v5、形成一定的几何形状，如细菌鞭毛。、形成一定的

52、几何形状，如细菌鞭毛。v6、适当降低溶液渗透压。、适当降低溶液渗透压。v7、具有协同效应和别构效应，实现对酶活性、具有协同效应和别构效应，实现对酶活性的调节的调节总结v一个天然蛋白质在一定条件下，往往只有一种或很少几种构象。v用一个蛋白质中各个原子范德华体积的总和，除以蛋白质所占体积即得装配密度，一般0.730.77.2.5 蛋白质结构与功能的关系蛋白质结构与功能的关系蛋白质分子具有多样的生物学功能，需要一定的化学蛋白质分子具有多样的生物学功能，需要一定的化学结构，还需要一定的空间构象。结构，还需要一定的空间构象。2.5.1 蛋白质一级结构与功能的关系蛋白质一级结构与功能的关系1. 种属差异种

53、属差异蛋白质一级结构的种属差异十分明显，但相同部分氨蛋白质一级结构的种属差异十分明显，但相同部分氨基酸对蛋白质的功能起决定作用。基酸对蛋白质的功能起决定作用。根据蛋白质结构上的差异，可以断定它们在亲缘关系根据蛋白质结构上的差异，可以断定它们在亲缘关系上的远近。上的远近。举例举例胰岛素，细胞色素胰岛素，细胞色素C从细胞色素从细胞色素c c的一级的一级结构看生物进化结构看生物进化物种进化过程中越物种进化过程中越接近的生物，细胞接近的生物，细胞色素的一级结构越色素的一级结构越相似相似一级结构相似的多肽或一级结构相似的多肽或蛋白质，其空间构象以及功蛋白质，其空间构象以及功能也相似。能也相似。 2.分子

54、病分子病 A A、分子病的概念：由于遗传基因的突变导致蛋白质分子、分子病的概念：由于遗传基因的突变导致蛋白质分子 结构的改变或某种蛋白质缺乏引起的疾病。结构的改变或某种蛋白质缺乏引起的疾病。 B B、例如：镰刀性贫血病、例如：镰刀性贫血病N-val his leu thr pro glu glu C(146) HbS 肽链肽链HbA 肽肽 链链N-val his leu thr pro val glu C(146) 结 论v蛋白质的一级结构决定它的空间结构，而特蛋白质的一级结构决定它的空间结构，而特定的空间结构是蛋白质具有生物活性的保证定的空间结构是蛋白质具有生物活性的保证2.5.2蛋白质构象

55、与功能的关系蛋白质构象与功能的关系v别构效应：别构效应： 又称变构效应，是指寡聚蛋白与配基结又称变构效应，是指寡聚蛋白与配基结合，改变蛋白质构象，导致蛋白质生物活性合，改变蛋白质构象，导致蛋白质生物活性改变的现象改变的现象. 例：血红蛋白的别构效应例：血红蛋白的别构效应免疫球蛋白蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象改变与疾病蛋白质构象疾病蛋白质构象疾病：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一：若蛋白质的折叠发生错误，尽管其一级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其级结构不变，但蛋白质的构象发生改变，仍可影响其功能，严重时可导致疾病发生。功能，严重时可导致疾病发生。蛋白质构象改变导致疾病的机理蛋白质构

56、象改变导致疾病的机理：有些蛋白质错误折叠：有些蛋白质错误折叠后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，后相互聚集，常形成抗蛋白水解酶的淀粉样纤维沉淀，产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病产生毒性而致病，表现为蛋白质淀粉样纤维沉淀的病理改变。理改变。这类疾病包括这类疾病包括：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨：人纹状体脊髓变性病、老年痴呆症、亨停顿舞蹈病、疯牛病等。停顿舞蹈病、疯牛病等。2.6 蛋白质的性质与分离、分析技术蛋白质的性质与分离、分析技术2.6.1 蛋白质的性质蛋白质的性质（1）蛋白质相对分子量：）蛋白质相对分子量：在在10 0001 000 000之间。测定分子量之

57、间。测定分子量的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电的主要方法有渗透压法、超离心法、凝胶过滤法、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。泳等。超离心法超离心法（Svedberg于于1940年设计）：蛋白质颗粒在年设计）：蛋白质颗粒在2550*104 g离心离心力作用下从溶液中沉降下来。力作用下从溶液中沉降下来。沉降系数（沉降系数（s）：单位（）：单位（cm）离心场里的沉降速度）离心场里的沉降速度。 s = v2x v =沉降速度（dx/dt）=离心机转子角速度（弧度/s） x =蛋白质界面中点与转子中心的距离（cm）沉降系数的单位常用S，1S=110-13（s）蛋白质分子量（蛋白质分子量（

58、M）与沉降系数（）与沉降系数（s）的关系）的关系M = RTsD（1V）R气体常数（8.314107ergsmol -1 度-1）T绝对温度D扩散常数（蛋白质分子量很大，离心机转速很快，则忽略不计）V蛋白质的微分比容（m3g-1）溶剂密度（20，gml-1） s沉降系数凝胶过滤法：凝胶过滤法：分子量对数对洗脱体积作图，并用标准分子分子量对数对洗脱体积作图，并用标准分子量蛋白质作对照，从图中就可以查得未知蛋白质的分子量蛋白质作对照，从图中就可以查得未知蛋白质的分子量。量。SDS-PAGESDS-PAGE电泳法：电泳法：为什么可用为什么可用SDS-PAGESDS-PAGE电泳来测定蛋白质的分子量？

59、电泳来测定蛋白质的分子量？ SDS SDS的加入的加入使蛋白质变性使蛋白质变性两者结合（两者结合（1g1g蛋白质蛋白质结合结合1.4g SDS1.4g SDS）使之复合物带大量负电荷，远远掩盖使之复合物带大量负电荷，远远掩盖了蛋白质本身所带电荷量和种类，因此在电场中由于与了蛋白质本身所带电荷量和种类，因此在电场中由于与SDSSDS结合全部带负电荷，因此迁移速率只与分子量有关，结合全部带负电荷，因此迁移速率只与分子量有关，以分子量对迁移率作图成线性关系，以标准分子量蛋白以分子量对迁移率作图成线性关系，以标准分子量蛋白质作对照，通过迁移率查得分子量。质作对照，通过迁移率查得分子量。凝胶过滤法凝胶过

60、滤法v凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构状结构v一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外在外v洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大v测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：测定蛋白质分子量一般用葡聚糖，商品名：SephadexSeph