MS培养基配制

1、培养基的配制植物组织培养中常用的一种培养基是 MS 培养基。 MS 培养基的 配制包括以下步骤。培养基母液的配制和保存 MS 培养基含有近 30 种营养成分，为 了避免每次配制培养基都要对这几十种成分进行称量， 可将培养基中 的各种成分，按原量的 20 倍或 200倍分别称量，配成浓缩液，这种 浓缩液叫做培养基母液。这样每次使用时，取其总量的 1/20（50 mL） 或 1/200（5 mL） ，加水稀释，制成培养液。现将制备培养基母液所需 的各类物质的量列出，供配制时使用。大量元素（母液I ）mg/ LNH 4NO333 000KNO338 000CaCb2H2O8 800MgSO4 7H2

2、O7400KH 2PO43 400微量元素（母液H ）KI166H3BO31 240Mn SO4 4H2O4 460ZnSO4 7H2O1 720Na2MoO4 2H2O50CuSO4 5H2O5CoCl2 6H2O5铁盐（母液皿）FeSO4 7H2O5560Na2-EDTA 2H2O7 460有机成分（母液W ）IV A肌醇 20 000IV B烟酸 100盐酸吡哆醇 (维生素 B6)100盐酸硫胺素 (维生素 B1)100甘氨酸 400以上各种营养成分的用量，除了母液I为 20倍浓缩液外，其余 的均为 200 倍浓缩液。上述几种母液都要单独配成1L的贮备液。其中，母液I、母液 H及母液V的

3、配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后， 分别 用少量的蒸馏水彻底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到 1 L。母液皿的配制方法是：将称好的 FeSO4 7H2O和Na2-EDTA2H2O 分别放到 450 mL 蒸馏水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将 两种溶液混合，并将 pH 调至 5.5，最后定容到 1 L ，保存在棕色玻璃 瓶中。各种母液配完后， 分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液 号、配制倍数、日期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入 2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)、萘乙酸 (NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液 (0.1

4、 mg/mL)。其配制方法是：分别称取这 3种物质各10 mg,将2, 4-D 和 NAA 用少量(1 mL) 无水乙醇预溶,将 6BA 用少量(1 mL) 的物 质的量浓度为 0.1 mol/L 的 NaOH 溶液溶解,溶解过程需要水浴加热, 最后分别定容至100 mL,即得质量浓度为0.1 mg/mL的母液。配制培养液 用量筒或移液管从各种母液中分别取出所需的用 量：母液I为50 mL,母液H、皿、VA和V B各5 mL。再取2, 4-D 5 mL、 NAA 1 mL ,与各种母液一起放入烧杯中。配制培养液时应注意： 在使用提前配制的母液时, 应在量取各 种母液之前,轻轻摇动盛放母液的瓶子

5、,如果发现瓶中有沉淀、悬浮 物或被微生物污染，应立即淘汰这种母液，重新进行配制；用量筒 或移液管量取培养基母液之前, 必须用所量取的母液将量筒或移液管 润洗2次；量取母液时，最好将各种母液按将要量取的顺序写在纸 上,量取 1 种,划掉 1 种,以免出错。溶化琼脂 用粗天平分别称取琼脂9 g、蒸糖30 g,放入1 000 mL 的搪瓷量杯中，再加入蒸馏水 750 mL,用电炉加热，边加热边用玻璃棒搅拌， 直到液体呈半透明状。 然后再将配好的混合培养液加入到煮沸的琼脂中，最后加蒸馏水定容至 1 000 mL，搅拌均匀。需要注意的是， 在加热琼脂、制备培养基的过程中，操作者千万 不能离开，否则沸腾的

6、琼脂外溢，就需要重新称量、制备。此外，如 果没有搪瓷量杯， 可用大烧杯代替。 但要注意大烧杯底的外表面不能 沾水，否则加热时烧杯容易炸裂，使溶液外溢，造成烫伤。调 pH 用滴管吸取物质的量浓度为 1 mol/L 的 NaOH 溶液，逐滴 滴入溶化的培养基中，边滴边搅拌，并随时用精密的 pH试纸（5 47 0）测培养基的pH, 直到培养基的pH为5 8为止（培养基的pH必须 严格控制在 5 8）。培养基的分装 溶化的培养基应该趁热分装。分装时,先将培养 基倒入烧杯中, 然后将烧杯中的培养基倒入锥形瓶 （50 mL 或 100 mL） 中。注意不要让培养基沾到瓶口和瓶壁上。 锥形瓶中培养基的量约为

7、 锥形瓶容量的 1/5 1/4。每 1 000 mL 培养基,可分装 25 30 瓶。培养基分装完毕后,应及时封盖瓶口。用 2 块硫酸纸 （每块大小 约为9 cm>9 cm）中间夹1层薄牛皮纸封盖瓶口，并用线绳捆扎。最后 在锥形瓶外壁贴上标签。高压灭菌 培养基的高压灭菌包括以下几个步骤。 第一,码放锥形瓶。将装有培养基的锥形瓶直立于金属小筐中, 再放入高压蒸气灭菌锅内。 如果没有金属小筐, 可以在两层锥形瓶之 间放一块玻璃板隔开。第二,放置其他需要灭菌的物品。 将其他需要灭菌的物品也放入 高压蒸气灭菌锅内,如装有蒸馏水的锥形瓶、带螺口盖的玻璃瓶、烧 杯、广口瓶 （以上物品都要用牛皮纸封口 ）,用牛皮纸包裹的培