动物细胞融合与单克隆抗体LGL

1、 指用自然或人工方法、使两指用自然或人工方法、使两个或多个不同的细胞融合成个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程，又称为细一个细胞的过程，又称为细胞杂交胞杂交 杂交细胞：融合后形成的具杂交细胞：融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传有原来两个或多个细胞遗传信息的信息的单核细胞单核细胞，称为杂交，称为杂交细胞。细胞。细胞核细胞核病毒颗粒病毒颗粒细胞核细胞核灭活的灭活的病毒颗粒黏附在细胞表面病毒颗粒黏附在细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿过细胞膜被病毒颗粒穿过细胞膜连接细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞细胞融合，形成杂种细胞细胞融合方法 化学：PEG（聚乙二醇）（聚乙二醇） 物理：电融合：电融合 生物：灭活

2、的病毒（仙台病毒）：灭活的病毒（仙台病毒）仙台病毒仙台病毒紫外线紫外线丧失感染性丧失感染性 （不感染细胞）（不感染细胞）保留融合活性保留融合活性 （诱导细胞融合）（诱导细胞融合）主要用于制备主要用于制备单克隆抗体单克隆抗体获得杂种植株获得杂种植株用途用途物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、物理（离心、振荡、电刺激）振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合去除细胞壁后诱去除细胞壁后诱导原生质体融合导原生质体融合细胞融合的方法细胞融合的方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜

3、的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原理原理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目植物、动物细胞融合的比植物、动物细胞融合的比较较读读下面一段文字资料，思考以下问题：下面一段文字资料，思考以下问题： 长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗长期以来，为了获得抗体，采用的是把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产所需抗体的方法。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。人们发现，在动物发生

4、免疫反应的过程中，体敏。人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的内的B B细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体，但是每个但是每个B B细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B B细细胞进行无性繁殖，即克隆。胞进行无性繁殖，即克隆。什么是抗体？什么是抗体？由何种细胞产生？由何种细胞产生？主要分布在哪里？主要分布在哪里？起何作用？起何作用？什么是单什么是单克隆抗体？克隆抗体？效应效应B细胞细胞血清血清特异性免疫作用特异性免疫作用抗体：机

5、体受抗原刺激后产生的，抗体：机体受抗原刺激后产生的，并且能与该抗原发生特异性结合的并且能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。具有免疫功能的球蛋白。 用单个用单个B淋巴细胞进行无性淋巴细胞进行无性增殖（扩增）增殖（扩增），也就是通过克隆，形成细胞群，这样的细胞群也就是通过克隆，形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗就有可能产生出化学性质单一、特异性强的抗体体 单克隆抗体单克隆抗体 单克隆单克隆抗抗 体体讨论：怎样才能获得单克隆抗体？提示提示1：仅：仅用细胞培养用细胞培养技术可行吗？技术可行吗？提示提示2：我们：我们所学的哪种细所学的哪种细胞是可以无限胞是可以无

6、限增殖的？增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？力同时具备呢？设计方案：设计方案：一个一个B B淋巴细胞淋巴细胞只分泌一种特异性抗体只分泌一种特异性抗体小鼠小鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞能无限增殖能无限增殖化学性质单一、特异性强的抗体。化学性质单一、特异性强的抗体。杂种细胞杂种细胞单克隆单克隆抗抗 体体抗原抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选细胞培养细胞培养筛选筛选提提 取取体外培养体外培养体内培养体内培养3.3.本过程利用了哪些本过程

7、利用了哪些原理？原理？ 注射抗原注射抗原B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选细胞融合、筛选杂交瘤细胞杂交瘤细胞细胞培养细胞培养筛选，继续培养筛选，继续培养足够数量的、能产生足够数量的、能产生特定抗体的细胞群特定抗体的细胞群体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔单克隆抗体单克隆抗体2.2.两次筛选分别有什么两次筛选分别有什么目的？目的？1.1.为什么选用小鼠骨髓为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与瘤细胞与B B细胞融合？细胞融合？单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显性强，灵敏度高，优

8、越性十分明显。应用主要有：应用主要有：1、临床诊断、临床诊断2、作为载体，运载抗癌药物，形成、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹生物导弹”治疗肿治疗肿瘤瘤 下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案菌的抗体实验方案3、图中、图中B为为_过程，常用过程，常用_作为诱导剂，该细胞继作为诱导剂，该细胞继承承_的遗传特性，既能的遗传特性，既能_,又能又能_。1、该实验方案的目的是、该实验方案的目的是_2、A是从小鼠的脾脏中取得是从小鼠的脾脏中取得_,该细胞能够产生该细胞能够产生_4、C过程指细胞培养，该过程包括过程指细胞

9、培养，该过程包括_培养和培养和_培养两个阶段。培养两个阶段。制备单克隆抗体制备单克隆抗体B细胞细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活病毒灭活病毒双亲细胞双亲细胞分泌抗体分泌抗体无限增殖无限增殖原代原代传代传代B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC练一练练一练A 、 B细胞为动物细胞细胞为动物细胞,请据图回答问题请据图回答问题:A细胞细胞B细胞细胞C细细胞胞D细细胞胞(1)若若A细胞为骨髓瘤细胞细胞为骨髓瘤细胞B细胞为淋巴细胞细胞为淋巴细胞,那么那么D细胞细胞称为称为 细胞细胞,D细胞具有两个亲本细胞的特征细胞具有两个

10、亲本细胞的特征,一方一方面因具有骨髓瘤细胞的面因具有骨髓瘤细胞的 性质性质,通过通过 方式方式产生大量细胞产生大量细胞,我们称之为我们称之为 过程过程;另一方面能分泌另一方面能分泌大量的抗体大量的抗体,我们把该过程分泌的抗体称我们把该过程分泌的抗体称 .杂交瘤杂交瘤连续分裂连续分裂有丝分裂有丝分裂单克隆单克隆单克隆抗体单克隆抗体练一练练一练(2)D细胞中产生的抗体其化学本质是细胞中产生的抗体其化学本质是 ,合合成该物质的场所是成该物质的场所是 ,它是由它是由 控制控制合成的合成的,合成过程包括合成过程包括 和和 两个重要步骤两个重要步骤.球蛋白球蛋白核糖体核糖体基因基因转录转录翻译翻译(3)D

11、细胞中产生的抗体具有细胞中产生的抗体具有 作用作用,与血清抗与血清抗体相比其优越之处在于体相比其优越之处在于 强强, 高高.免疫免疫特异性特异性灵敏度灵敏度(4)若若A为人细胞为人细胞,B为鼠细胞为鼠细胞,用同位素标记用同位素标记A细胞膜上的细胞膜上的蛋白质蛋白质,B不标记不标记,在在C细胞时细胞时,检测结果发现整个细胞一检测结果发现整个细胞一半有放射性另一半没有半有放射性另一半没有.在在D细胞时细胞时,检测结果发现整个检测结果发现整个细胞都有放射性细胞都有放射性,请解释原因请解释原因 .构成细胞膜的蛋白质构成细胞膜的蛋白质分子大都可以流动分子大都可以流动练一练练一练思考：思考：1、本过程利用

12、了哪些原理？、本过程利用了哪些原理？免疫原理免疫原理细胞融合原理细胞融合原理动物细胞培养原理动物细胞培养原理（1 1）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与）为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B B淋巴细胞融合淋巴细胞融合? ?（小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，小鼠骨髓瘤细胞可以在体外培养条件下大量增殖，B B淋巴细胞能够产生抗体淋巴细胞能够产生抗体，这样融合成的杂交瘤细胞，这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B B细胞分泌抗体细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体量单

13、克隆抗体, ,细胞的同源性越近，融合形成的杂种细细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活。胞越易成活。（2 2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗）骨髓瘤细胞是癌细胞吗? ? 有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞，有无限增殖能力的细胞是肿瘤细胞， 具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞，具有转移能力的肿瘤细胞，称为癌细胞， 所以说，所以说，瘤细胞不能等于癌细胞。瘤细胞不能等于癌细胞。（3 3）整个制备过程为何要经过两次筛选）整个制备过程为何要经过两次筛选? ?（第一次第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种），筛选得到杂交瘤细胞（多种），第二次第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养，然后再筛选出细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能