病理科李军川院级课题申报201405

1、项目编号所属学科长 江 大 学 附 属 第 一 医 院 科 研 项 目 申 请 书（上册）项目名称乳腺癌上皮间质转化中Hedgehog与Wnt信号通 路的串话 项目负责人 李军川 所在科室 病理科 联系电话电子邮件 ljczhy 申请日期 2014年5月20日 长江大学附属第一医院 制填 报 说 明一、对申请书各项内容，要求实事求是，逐条认真填写。字体中文要求“宋体、小四”，英文要求“Times New Roman、小四”；标题中文要求“宋体、四号”，英文要求“Times New Roman、四号”，加粗，标题形式采用：1；1.1；1.1.1样式。二、申请书为A4纸，

2、请按此规格打印装订。三、申请书栏目中有多项选择时，请在相应选择项前打勾。四、封面“项目编号”栏请勿填写，项目“所属学科”分类按中华人民共和国国家标准GB/T13745-92学科分类版本填写到三级学科。五、研究年限统一为1年。六、仪器设备费：指2000元以内的小型专科设备或者自制专用仪器设备的材料、配件购置费和加工费。七、请勿在申请书下册部分出现申请者姓名、科室名称，需要提及时，请用“申请者、申请者科室”等方式代替。如有违反，将取消评审资格。一、基本信息項目信息项目名称乳腺癌上皮间质转化中Hedgehog与Wnt信号通路的串话所属学科（三级分类）320.6730 肿瘤病理学预计研究年限1年申 请

3、者信息姓名李军川性別男出生年月1968年4月学历学位大学本科硕士主 要研究领域肿瘤分子病理留学或国外进修情况电话07168113937手子邮件ljczhy科室病理科近五年承担或参加课题情況承担课题国家级（ ）项 省部级（3）项参加课题国家级（ ）项 省部级（1）项目前仍在研课题无近五年来有何科研获奖情况2008年获荆州市科技进步奖一等奖及三等奖2012年荆州市科技进步奖二等奖近五年来发表论文情况三篇SCI收录期刊，十余篇核心、统计源期刊课题组信息参加人数总人数高级中级初级辅助人员其中在读博士后博士生硕士生104333主要成员（不含项目负责人）姓 名性别出生年月职 称学

4、位单位及科室每年参加月数项 目分 工赵会传男1978、9主治医师硕士荆州市第一人民医院病理科9实验、数据分析、撰写论文竺红宇女1971、6副主任护师学士荆州市第一人民医院客户服务中心8随访、数据分析陈廷煊男1952、10主管技师荆州市第一人民医院病理科9实验、数据分析王晓艳女住院医师硕士荆州市第一人民医院病理科8数据分析、撰写论文邹兰英女1973、11副主任医师学士荆州市第一人民医院病理科8实验、随访王茁男1968、12副主任医师学士荆州市第一人民医院乳腺外科8数据收集分析中 文 摘 要（200字以内）乳腺癌复发和转移与上皮间质转化相关，Hedgehog、Wnt、Notch、PI3K/AKT、

5、TGF-、NF-B等信号通路因子参与了肿瘤发生及肿瘤细胞上皮间质转化调控，针对肿瘤上皮间质转化涉及多种信号通路及其串话现状，提出Hedgehog和Wnt信号通路在乳腺癌上皮间质转化中有交叉联系。拟采用免疫组化方法来检测乳腺癌及癌旁组织中HH信号通路中核心因子Shh、Ptch、Smo、Gli，Wnt信号通路中核心因子WIF-1、Wnt5a、cyclinD1、c-myc及EMT中重要指标E-cd、- cantenin、Vimentin、Snai，结合临床病理特征分析相关因素。阐明乳腺癌HH和Wnt信号通路的变化与上皮间质转化联系机制，揭示多种信号通路串话在乳腺癌皮间质转化中的规律，寻找共同作用的基

6、因，为新的分子靶点提供理论基础。英 文 摘 要As we know,breast cancer have a property of heterogeneity.Breast cancer recurrence and metastasis are closely related to epithelial mesenchymal transition（EMT）,according to the literature, Hedgehog（HH）and Wnt signaling pathway played important role in occurrence of many tumors

7、 as well as the regulation of EMT.Base on multiple signaling pathways involved and their cross-talk in EMT,our research indicates Hedgehog and Wnt pathway are closely associated with each other in regulation of EMT in breast cancer. Whats more, their cross talk would play a key role in progression o

8、f breast cancer.In this study,we test expression of major members of HH pathway（Shh.Ptch.Smo.Gli）,major members of Wnt pathway (WIF-1.Wnt5a.cyclinD1.c-myc),and E-cd.- cantenin.vimentin.Snai which are evey significant factors in EMT in breast cancer by immunohistochemical staining,On that basis,we an

9、alyze the relationship between our data and clinicopathologic features of all study participants.Our research aims to discuss how the linking mechanism be set up between the HH, Wnt signaling pathway and EMT,and try to research the work rule how cross-talk of the pathway plays an important role in E

10、MT in breast cancer , which is expected to help find the intersection,and serve as a theoretical underpinning for molecular target of breast cancer therapy.关键词中文上皮间质转化；Hedgehog信号通路；Wnt信号通路；串话；乳腺肿瘤英文Wnt；Notch；cross-talk；EMT；the breast tumor二、学术委员会审核意见 项目编号所属学科长 江 大 学 附 属 第 一 医 院 科 研 项 目 申 请 书 (下册)项目名

11、称 乳腺癌上皮间质转化中Hedgehog与Wnt信号通路的串话 一、立题依据（包括国内外研究现状分析）11 乳腺癌异质性提示其多样发生发展机制恶性肿瘤的生长、浸润、转移和复发的机制研究有很大进展，但是人类在恶性肿瘤的治疗中仍然存在不同类型肿瘤有不同的治愈率、出现转移与复发等诸多问题。恶性肿瘤长期在致癌因素作用下出现了基因组结构和功能的紊乱，随着肿瘤发生与进展，不断扩增产生亚克隆，当某一亚克隆达到多数的情况下，以此类成分为主要表现为该类肿瘤特性，同一种类肿瘤在同一个体的不同时期可以表现不同特性，同一种类肿瘤在不同的个体身上也可表现出不一样的临床表现、治疗效果及预后，同一类型恶性肿瘤可能存在不同的

12、肿瘤形成的分子学机制，肿瘤的生长速度、侵袭能力、对药物的敏感性、预后等各方面产生差异，形成了肿瘤的异质性（heterogeneity of tumor）1。乳腺癌也具有异质性的肿瘤，形成的分子学机制存在多种可能，各种分子分型和临床分期乳腺癌，临床进展和治疗效果也出现不同，鉴于以上现象，乳腺癌发生发展的多样机制以及个体化治疗的分子学基础的研究前景仍然存在，分子学机制研究的目的是寻找乳腺癌治疗的不同分子靶点，因此具有了多种可能性2。1.2 多种信号通路与肿瘤发生发展具有密切关系肿瘤的发生发展与细胞信号转导(cell signal transduction,CST)密切相关，细胞信号转导通路研究使人

13、们认识了恶性肿瘤的发生发展3。主要信号通路如下：Hedgehog(HH) 信号通路。Hedgehog(HH)基因最初是从突变的果蝇体内发现的，果蝇胚胎腹侧面布满尖状突起形似刺猬，因而命名为Hedgehog。Hedgehog（HH）信号通路是调控胚胎发育的信号转导途径，异常激活可以导致多种肿瘤的形成，如基底细胞癌、胰腺癌、前列腺癌、胃肠道恶性肿瘤等等4。Hedgehog(HH)有3种同源基因，分别为Sonic hedgehog(SHH)、Indian hedgehog(IHH)及Desert hedgehog(DHH)，SHH主要参与神经系统发育、肢体发生、皮肤及毛发以及消化道的发育，分布最广泛

14、，阳性表达率较高；IHH主要与骨及软骨，消化道、胰腺的发育相关；DHH仅分布于性腺、睾丸、外周神经系统以及胰腺组织中。HH信号通路的激活是通过配体HH与Ptch受体结合，进而解除Ptch 对另一跨膜蛋白Smo的抑制作用，Smo通过Gli来调控基因转录。Ptch对HH信号通路起负调控作用，当缺少HH蛋白时，Ptch通过下游信号抑制Smo，阻止了信号的传导，HH信号通路激活过程中，HH蛋白与Ptch受体结合时，Ptch对Smo的抑制作用解除，Smo可以激活下游基因Gli的表达。Gli为HH信号通路中核转录因子，具有激活下游目的基因转录功能，异常的Gli活化状态激活下游基因的转录5。HH信号通路过度

15、激活时，与多种肿瘤的形成有密切的联系，直接作用于Shh信号转导通路中的Smo，对Smo高表达细胞的生长有明显抑制作用，抑制Shh信号转导通路的活性，可使HH信号转导通路各成员的表达出现不同程度的降低，HH信号通路可能在肿瘤细胞中被活化6。Wnt 信号通路。在胚胎发育和中枢神经系统的形成中起关键作用，调控细胞的生长、迁移和分化。在乳腺癌、结直肠癌、胃癌、肝癌、黑色素瘤及子宫内膜癌、卵巢癌中都存在Wnt信号通路异常7。主要分为3种类型：经典的Wnt 信号途径，通过-连环蛋白(-catenin) 核易位，激活靶基因的转录活性；细胞平面极性途径，主要控制胚胎的发育时间和空间，在细胞水平上，通过重排细胞

16、骨架来调控细胞极性；Wnt/Ca2+途径，诱导细胞内Ca2+浓度增加并激活Ca2+敏感的信号转导组分。Wnt信号通路参与成体组织细胞的增殖、分化及凋亡过程，异常的Wnt信号转导过程常导致肿瘤生成。Wnt信号通路中关键的细胞内信号传导分子是-catenin，-catenin与E-钙黏附素(E-cadherin,E-cd)粘附复合体在细胞膜表面介导同种细胞之间的粘附作用，当Wnt信号通路被异常激活时，-catenin从细胞膜的定位中脱离出来，在细胞浆中稳定地聚集，并进一步被转运至细胞核中，激活Cyclin D1及c-myc等下游靶基因的转录。如果E-cd的表达缺失，则-catenin更容易从正常的

17、细胞膜定位中脱离出来进入细胞质中，起到异常激活Wnt信号通路的作用。Cyclin D1过表达可以促进肿瘤细胞周期的进展导致细胞过度增殖。c-myc 基因是一个被Wnt信号开启的致癌基因，c-myc 基因的表达与细胞周期密切相关。多数动物体内存在一些蛋白质，拮抗Wnt蛋白的功能，对Wnt信号通路产生负调节作用，而Wnt拮抗剂表达下调所致Wnt信号通路过度激活亦常诱导肿瘤发生，目前发现的Wnt拮抗剂主要包括分泌型Frizzled蛋白相关蛋白家族(sFRPs)和DICKKOPF(家族)DDKs8。其它相关信号通路：转化生长因子(transforming growth factor ,TGF-)具有调

18、节细胞生长、分化，调控细胞凋亡，促进细胞外基质合成和血管的新生，抑制机体免疫反应等多种生物学功能，与良恶性肿瘤发生发展有密切的关系9。核因子-B (nuclear factor-B,NF-B) 信号转导通路属于受调蛋白水解酶依赖的受体信号转导通路，与肿瘤细胞的发生、增殖、分化、凋亡、侵袭和转移有密切关系10。整合素(integrin)属于细胞黏附分子家族，可以调节细胞-细胞、细胞-细胞外基质(ext racellular matrix,ECM) 间的黏附。肿瘤的侵袭转移中，肿瘤细胞与肿瘤细胞、血管内皮细胞及ECM之间的黏附与解离在转移扩散中起决定作用，而整合素可以使肿瘤细胞同质性黏附下降，同时

19、也可以使肿瘤细胞异质性黏附增加11 。酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTKs)激活的细胞内信号通路是磷酸化后的受体与下游靶点结合，激活分裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK) 和磷酸肌醇-3-2激酶(PI3K)/AKT激酶通路，PTKs 催化受体磷酸化最终结果是促使细胞增殖、抑制细胞凋亡，与肿瘤的发生和发展直接相关12。Notch信号通路通过促进细胞增殖和抑制分化，促使肺癌的发生。在乳腺癌的研究中，一些逆转录病毒基因的插入使原本活性较低的Notchl/4基因发生转化而激活，表达出相应受体的细胞内结构域，进而

20、诱导正常细胞向肿瘤细胞转化13。1.3 上皮间质转化是恶性肿瘤发展的重要过程上皮间质转化(epithelial mesenehymal transition,EMT)是指具有极性的上皮细胞通过特定程序转化为具有活动能力、能够在细胞基质间自由移动的间质表型细胞的生物学过程，包括细胞形态学的改变及基因型的改变，EMT使上皮细胞失去了细胞极性及与基底膜连接等上皮表型特征，而获得高迁移、侵袭、抗凋亡及降解细胞外基质等间质表型特征。EMT过程包括：细胞黏附分子如E-钙黏蛋白（E-cadherin,E-cd)表达减少，导致立方上皮细胞失去细胞间相互作用，立方上皮细胞的细胞角蛋白结构改变，外形演变为纺锤形纤

21、维细胞形态，获得了纤维原细胞或间质细胞的特性，如波形蛋白（Vimentin）、骨桥蛋白、Snail、VI型胶原酶及其它间质蛋白表达上调14。E-cd功能缺失在诱导乳腺良性病变进展为恶性病变过程中发挥关键作用，与肿瘤低分化、高侵袭力及临床预后差密切相关15，促使-连环蛋白迁移至细胞膜，激活Wnt信号通路和EMT相关的下游信号通路，诱导自身转录抑制因子产生，包括锌指蛋白(Snai)，是重要的EMT诱导因子，含有锌指结构与靶基因DNA相关序列结合，通过调控E-cd及细胞间的紧密连接成分等相应基因表达增加细胞的迁徙转移力，促进EMT的发生，Snai高表达的恶性肿瘤分化较差、侵袭能力较强、易发生转移和复

22、发，是恶性肿瘤预后不良的重要生物学标记物16。波形蛋白(Vimentin)高表达与多个乳腺癌细胞系的侵袭、转移及EMT相关，与其他间质标志物共同发挥调节作用，乳腺癌细胞-连环蛋白/淋巴细胞增强因子-1途径介导Vimentin表达，与-连环蛋白激活后E-cd缺失相一致，Vimentin的表达是EMT晚期事件，表明基因调控的暂时性和上皮细胞表型缺失先于间质表型获得17。EMT的发生还受多种生长因子的调控，如TGF-、表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)、成纤维细胞生长因予、胰岛素样生长因子和血管内皮生长因子等。恶性肿瘤发生发展与EMT关系密切，其中有相关信号通路和

23、分子参与，如Wnt信号通路调节控制许多生命过程，是诱导EMT不可缺少的重要通路18。试图探讨乳腺癌EMT过程中参与信号传导途径和相关因子关系是本项目研究思路的出发点。1.4 HH和Wnt信号通路串话与EMT关系以及互相影响的机制不同的信号转导通路间具有相互的联系和作用，信号通路可以交错，形成复杂的网络，共同协调机体的生命活动，即信号通路串话(cross talk)。一条信号途径的成员，可参与激活另一条信号途径，两种不同的信号途径可共同作用于同一种效应蛋白或同一基因而协同发挥作用，一种信号分子可作用几条信号转导途径。Wnt和HH信号通路参与大多数动物早期发育，对正常胚胎发育起着重要作用，信号通路

24、的不恰当激活将导致肿瘤发生。HH和Wnt信号通路的紊乱是肿瘤细胞生长的特征之一，信号传导的高效性及信号通路间的交叉，显示信号传导在肿瘤的发生，发展中发挥着重要作用。 胃癌细胞中TGF-调控SHH活性，Gli因子的活化能被Smad、PI3KAkt、ERK、PKC等影响。Gli蛋白可能不仅是HH信号通路的下游靶点，还可能是影响肿瘤发病机制信号网络内的一个常见效应分子，和其它信号通路共同参与肿瘤的发生和发展19。EMT中重要转录因子Snai可能为Gli蛋白的下游转录调控靶点，Gli水平的升高可上调Snai的表达。胰腺癌使用环巴明阻断后，Snai水平明显下调，E-cd明显上调，肿瘤侵袭能力明显减弱，在

25、胃癌组织中HH和Wnt信号通路之间存在串话，呈负相关，信号间存在抑制20。HH信号通路可通过介导其下游转录因子Snai的表达，下调E-cd的表达来介导胰腺癌细胞EMT的发生，HH信号通路的异常活化可上调Wnt的表达，间接激活Wnt通路，与Snai协同作用于-catenin，破坏E-cadherin/-catenin复合物，细胞浸润和转移能力增强，促进EMT的发生21。HH和Wnt信号通路在胃肠道癌症发生发展中最为重要，都在胚胎时期组织分化发育调节中起巨大作用，有各自的启动激活范围，中间有一些共同的作用途径22，在乳腺的生长发育与功能分化过程中上皮间质转化的信号传递具有重要作用，包括Wnt、HH

26、、Notch、PI3K/ALK、TGF-、NF- B等许多信号通路参与了EMT的调控，活化Snail、Twist等核内转录因子，调节下游基因的表达，使肿瘤细胞更富于侵袭性和转移23，HH与其他细胞信号通路协同参与乳腺癌EMT调节，乳腺癌中多个EMT转录因子的上调与临床预后较差直接相关24，Wnt与HH信号通路之间存在着许多直接或间接的串话，在肿瘤的发生发展中，二者既可以表现为相互协同，也可以表现为相互拮抗。Wnt与HH信号通路的串话与肿瘤的关系，在基础与临床肿瘤研究中都具有重大意义。1.5 国内外研究现状，我们研究的基础和课题关注的问题从文献检索来看，在乳腺癌EMT方面研究较多，乳腺癌中各个信

27、号通路的研究文献也较多，乳腺癌EMT与信号通路的研究也见报道，单一的信号通路在乳腺癌发生发展中机制的研究文献较多，但对于多信号通路串话在乳腺癌EMT中的作用的研究未见报道。申请人在乳腺癌TGF-通路的研究中乳腺癌TGF-1和BRCA2的表达与临床因素的相关性。TGF-1和BRCA2在乳腺癌组织中表达，参与分析的变量中，与BRCA2明显相关的变量为HER2、TGF-1，与TGF-1相关的变量为BRCA2。乳腺癌BRCA2过表达与TGF-1、HER2表达相关，HER-2、TGF-1与BRCA2在乳腺癌的发展过程中存在协同作用25。在有关乳腺癌多方面研究的基础上，进一步发挥多学科交叉优势，构建适于乳

28、腺癌关键分子个体化预警新方法，初步评估新方法对乳腺癌临床诊疗的预测价值，并探索新技术体系对乳腺癌生物学行为的新认识，促进学科的交叉融合及基础成果的应用26-29。本课题主要人员均在乳腺癌的多方面研究有一定的基础，对于值得深入研究的乳腺癌多个信号通路串话在乳腺癌EMT过程中的作用机制，信号通路串话的研究可以揭示乳腺癌异质性机制，本课题尤其关注乳腺癌的HH与Wnt信号通路的串话机制，与乳腺癌EMT的关系，是否与乳腺癌复发转移的关系密切？在乳腺癌EMT中HH与Wnt信号通路串话中关键分子？通过统计学分析后怎样阐明乳腺癌EMT中多个信号因子之间的关系？是否能提出有利于乳腺癌分子靶点病理诊断和个体化治疗

29、的规范模式？参考文献1 Wong NK, Fuller M, Sung S,et al.Heterogeneity of breast cancer stem cells as evidenced with Notch-dependent and Notch-independent populationsJ.Cancer Med,2012, 1(2):105-113.2 Gest C,Joimel U,Huang L,et al.Rac3 induces a molecular pathway triggering breast cancer cell aggressiveness: diff

30、erences in MDA-MB-231 and MCF-7 breast cancer cell linesJ.BMC Cancer,2013,13(1):63.3 James R,Vishwakarma S,Chivukula IV,et al.EGFR targeting monoclonal antibody combines with an mTOR inhibitor and potentiates tumor inhibition by acting on complementary signaling hubsJ.Cancer Med,2012,1(2):114-127.4

31、Marini KD,Payne BJ,Watkins DN,et al.Mechanisms of Hedgehog signalling in cancer Growth FactorsJ.2011,29(6):221-234.5 Chen Y,Jiang J.Decoding the phosphorylation code in Hedgehog signal transductionJ.Cell Res,2013,23(2):186-200.6 Galimberti F,Busch AM,Chinyengetere F,et al.Response to inhibition of s

32、moothened in diverse epithelial cancer cells that lack smoothened or patched 1 mutationsJ.Int J Oncol,2012,41(5):1751-1761.7 Wang YZ, Han YS, Ma YS,et al.Differential gene expression of Wnt signaling pathway in benign, premalignant, and malignant human breast epithelial cellsJ.Tumour Biol,2012,33(6)

33、:2317-2327.8 Peng X, Liu T,Wang Y,et al.Wnt/beta-catenin signaling in embryonic stem cell converted tumor cellsJ.J Transl Med,2012,20(10):196.9 Lv ZD,Kong B, Li JG, et al.Transforming growth factor-1 enhances the invasiveness of breast cancer cells by inducing a Smad2-dependent epithelial-to-mesench

34、ymal transitionJ.Oncol Rep,2013,29(1):219-225.10 Klettner A,Westhues D,Lassen J,et al.Regulation of constitutive vascular endothelial growth factor secretion in retinal pigment epithelium/choroid organ cultures: p38,nuclear factor kappaB,and the vascular endothelial growth factor receptor-2/phosphat

35、idylinositol 3 kinase pathwayJ.Mol Vis,2013,19:281-291.11 Tringali C, Lupo B, Silvestri I,et al.The plasma membrane sialidase NEU3 regulates the malignancy of renal carcinoma cells by controlling 1 integrin internalization and recyclingJ. J Biol Chem,2012,287(51):42835-42845.12 Shields BJ, Wiede F,

36、Gurzov EN,et al.TCPTP regulates SFK and STAT3 signaling and is lost in triple-negative breast cancersJ.Mol Cell Biol,2013,33(3):557-570.13 Wong NK,Fuller M,Sung S,et al.Heterogeneity of breast cancer stem cells as evidenced with Notch-dependent and Notch-independent populationsJ.Cancer Med, 2012,1(2

37、):105-113.14 Keshamouni VG,Schiemann WP.Epithelial-mesenchymal transition in tumor metastasis:a method to the madnessJ.Future Oncol,2009,5(8):1109-1111.15 Izumiya M,Kabashima A,Higuchi H,et al.Chemoresistance is associated with cancer stem cell-like properties and epithelial-to-mesenchymal transitio

38、n in pancreatic cancer cellsJ.Anticancer Res,2012,32(9):3847-3853.16 Gao X, Xing D.Molecular mechanisms of cell proliferation induced by low power laser irradiationJ.J Biomed Sci,2009,12(16):4.17 Evat C,Erik WT,Jeanp T.Epithelial to mesenchymal transition and breast cancer J .Breast Cancer Research,

39、2009,1l(6):1-10.18 Wu Y,Ginther C,Kim J,et al.Expression of Wnt3 activates Wnt/-catenin pathway and promotes EMT-like phenotype in trastuzumab-resistant HER2-overexpressing breast cancer cellJ.Mol Cancer Res,2012,10(12):1597-1606.19 Li L,Tam L,Liu L,et al.Wnt-signaling mediates the anti-adipogenic a

40、ction of lysophosphatidic acid through cross talking with the Rho/Rho associated kinase (ROCK) pathwayJ. Biochem Cell Biol,2011,89(6):515-521.20 Galimberti F,Busch AM,Chinyengetere F,et al.Response to inhibition of smoothened in diverse epithelial cancer cells that lack smoothened or patched 1 mutat

41、ionsJ.Int J Oncol,2012, 41(5):1751-1761.21 Ohta H,Aoyngi K,Fukaya M,et a1.Cross talk between hedgehog and epithelial-mesenchymal transition pathways in gastric pit cells and in diffuse-type gastric cancersJ.Br J Cancer,2009,100:389-398.22 Yanai K,Nakamura M,Akiyoshi T, et a1.Crosstalk of hedgehog an

42、d Wnt pathways in gastric cancerJ.Cancer Lett,2008,263(1):145-156.23 Aziza N,Nicole S,Marta S,et a1.Diagnostic utility of snail in metaplastic breast carcinomaJ.Diagnosticpathology,2010,5:76.24 Ouyang G,Wang Z,Fang X,et al.Molecular signaling of the epithelial to mesenchymal transition in generating

43、 and maintaining cancer stem cellsJ.Cell Mol Life Sci,2010,67(15):2605-2618.25 Junchuan Li,Hongyu Zhu,Tingxuan Chen,et al.TGF-1 and BRCA2 Expression are Associated with Clinical Factors in Breast CancerJ.Cell Biochem Biophys,2011, 60(3):245-248.26 Chen C, Peng J, Xia HS,et al.Quantum dots-based immu

44、nofluorescence technology for the quantitative determination of HER2 expression in breast cancerJ.Biomaterials, 2009, 30(15):2912-2918. 27 Chen C, Peng J, Xia HS,et al.DW, Li Y. Quantum dots-based immunofluorescent imaging of HER2 and ER provides new insights into breast cancer heterogeneityJ.Nanote

45、chnology, 2010, 21(9):95101. 28 Chen C, Xia HS, Gong YP, et al.The quantitative detection of total HER2 load by quantum dots and the identification of a new subtype of breast cancer with different 5-year prognosisJ.Biomaterials, 2010,31(33):8818-8825. 29 Chen C, Sun SR, Gong YP, et al. Quantum dots-

46、based molecular classification of breast cancer by quantitative spectroanalysis of hormone receptors and HER2J.Biomaterials, 2011, 32(30):7592-7599. 二、 研究内容和预期目标2.1研究内容：2.1.1确定检测指标：选定HH信号通路中重要分子：SHH、膜受体 (Ptch、Smo)及下游转录因子Gli等，Wnt信号通路中重要分子：WIF-1、Wnt5a及下游靶基因cyclinD1、c-myc等，EMT调控因子：E-钙黏蛋白、-连环蛋白、波形蛋白、转录抑

47、制因子锌指蛋白(Snai)等指标作为检测指标。2.1.2多因素分析：在乳腺癌组织与癌旁组织检测上述指标表达，并与包括年龄、肿瘤大小、分型分期及预后等临床病理特征进行多因素分析。2.1.3寻找信号通路串话关键因子：明确乳腺癌EMT中HH信号通路和Wnt信号通路之间的联系和相互作用，寻找多个信号通路中关键因子，揭示在乳腺癌EMT中HH信号通路和Wnt信号通路串话的规律。2.1.4探讨乳腺癌EMT中HH信号通路和Wnt信号通路串话机制：通过分析上述指标在信号通路串话过程中的变化特点和相关因素，阐明乳腺癌EMT中HH信号通路和Wnt信号通路串话机制在乳腺癌发生发展中的作用。为寻找乳腺癌个体化治疗中的靶

48、点基因，建立起有关乳腺癌多信号通路研究的理论基础和模式。 2.2预期目标2.2.1检测乳腺癌EMT中HH信号通路和Wnt信号通路重要分子在乳腺癌组织和癌旁组织的蛋白质表达水平，通过结合临床病理特征分析其相互关系和乳腺癌发生发展的重要因素。2.2.2结合临床病理特征分析多个信号因子之间的关系，寻找乳腺癌发生发展中的关键因子。2.2.3试图建立研究乳腺癌多信号通路串话的理论框架，有利于更进一步积极规范地开展乳腺癌靶向病理诊断。三、 研究方法和技术路线及可行性分析3.1研究方法3.1.1首先选定HH信号通路中信号分子SHH、膜受体 (Ptch、Smo)及下游转录因子Gli等，Wnt信号通路WIF-1

49、、Wnt5a及下游靶基因cyclinD1、c-myc等， EMT调控因子E-钙黏蛋白、-连环蛋白、波形蛋白，转录抑制因子锌指蛋白(Snai)等指标作为检测指标。3.1.2选取了手术切除乳腺癌及癌旁乳腺组织蜡块，采用免疫组织化学方法检测上述指标并统计学分析与包括年龄、肿瘤大小、分型、分期及预后等临床病理特征的关系。3.1.3进行多元（因素）分析等方法，寻找乳腺癌EMT中HH与Wnt信号通路联系的关键因子，并说明多个因子之间的关系，并探索建立乳腺癌多信号通路串话研究模式以及靶向病理诊断的规范。3.2 技术路线乳腺癌组织、癌旁组织免疫组化SHH、Ptch、Smo、Gli、WIF-1、Wnt5a、cy

50、clinD1、c-myc、E-cd、-catenin、Vimentin、Snai的蛋白表达统计学分析：乳腺癌组织、癌旁组织中各相关基因蛋白的表达情况与各种临床病理特征的相关因素分析1、乳腺癌HH及Wnt信号通路及EMT相关因子蛋白表达，在不同癌组织和癌细胞系中分布特点。2、乳腺癌EMT中HH及Wnt信号通路串话机制及关键因子。3、建立乳腺癌发生发展过程的多信号通路串话研究模式和靶向病理诊断规范的探索。3.3 可行性分析 3.3.1理论依据可靠：HH与其他细胞信号通路协同参与乳腺癌EMT调节，乳腺癌中多个EMT转录因子的上调与临床预后较差直接相关，Wnt与HH信号通路之间存在着许多直接或间接的串

51、话，在肿瘤的发生发展中，二者既可以表现为相互协同，也可以表现为相互拮抗。与肿瘤的关系，在基础与临床肿瘤研究中都具有重大意义。在乳腺中研究EMT中Wnt与HH信号通路的串话机制，有利于寻找关键分子，乳腺癌多样的个体化治疗得以实现，有巨大的经济社会效益，研究乳腺癌多信号通路之间关系的理论依据可靠。3.3.2 技术路线可行：本课题涉及两个单位的多个相关学科，在肿瘤基础与临床研究、肿瘤分子学研究等方面积累了大量的研究工作基础和丰富的工作经验，并进行过多个有关乳腺癌的相关课题研究，已经充分掌握了有关乳腺癌信号通路研究的实验经验。3.3.3 技术支撑完善：本单位具有完成本项目所需的科研平台，如长江大学附属第一医院中心实验室、病理科等等。此外，临床病理资源丰富，建立了乳腺癌病人随访数据库，可获得预后随访