甾类同化激素类药物残留分析技术测定方法（一）

1、甾类同化激素类药物残留分析技术测定方法（一） 8.1.4.2 测定办法 有关动物源基质中ass残留检测办法的报道无数，主要是免疫分析法和色谱分析法。免疫分析法主要有酶联免疫测定法(elisa)、发射免疫测定法(ria)和胶体金免疫试纸法(gica)；色谱分析法主要有气相色谱法(gc)、气质联使用(gc-ms)、高效液相色谱法(hplc)和液质联使用(lc-ms)。长久以来，gc-ms和elisa向来是ass残留分析的主要手段；但近年来，hplc和lc-ms的应用越来越多，新的筛查技术(如分子生物学检测办法)也开头有讨论报道。 (1) 气相色谱法(gaschromatography，gc) gc

2、以气体为流淌相，用于残留药物的检测，具有高效能、高挑选性、高敏捷度、分析速度快和应用范围广等特点。对于ass残留分析，较早之前有过相关报道，但已逐渐被gc-ms办法取代。李青等建立了gc-ecd测定畜禽肉及内脏中残留量的办法。采纳和提取，旋转蒸干后，石油醚溶解残渣，-水(4+1，v/v)llp净化，在吹干的试样残渣中加入1ml hfba，超声20min，再用氮气吹干，加入0.5ml，混匀后gc-ecd检测。色谱柱为se-54，载气为氦气，进样口温度为290，检测器温度为300。办法lod为0.5g/kg，回收率为84.0%93.0%。 (2)气相色谱-质谱联使用(gaschromatograp

3、hy-massspectrometry，gc-ms)gc-ms法是目前ass残留检测中采纳较多的办法。在各国颁布的标准办法中，gc-ms通常作为其最后确实证办法。ass可以采纳电子电离(ei)和化学电离(ci)的方式检测。 1)电子电离(ei) fritsche等建立了牛肌肉组织中雄激素、雌激素的gc-ms检测办法。极性ass通过甲醇-水混合液提取后，用c18 spe柱净化，而非极性ass则需要氨基柱进一步净化，最后混合后用mstfa-tmis-dte(1000+2+2，v/v)硅烷化衍生，gc-ms测定。分析柱为db-5 ms毛细管柱，载气为氮气，进样口温度260，质谱接口温度290，ei源

4、，电子能量为70ev，离子源温度为180。该办法lod为0.020.1g/kg，c19和c21甾类激素的添加回收率分离为56%79%和54%114%。seo等用gc-ms同时测定了鸡肉中的雌二醇、睾酮等多种激素。样品经甲醇-水超声波提取，冷冻后过滤除脂，c18 spe柱净化后，gc-ms测定。db-1ms柱分别，载气为氦气，进样口温度为250，质谱接口温度为280，ei-sim模式检测。办法lod可达0.10.4g/kg，合成和自然生长激素的总体回收率为68%106%。marchand等利用gc-ms检测肉中的23种ass。通过llp将ass分为两类：含d4-3-酮类和酚结构类。两类化合物分离

5、在60和室温，分离用mstfa-tmis-dtt和mstfa-i2举行衍生，再用gc-ms测定。酚结构药物用mn-3柱分别，d4-3-酮类药物用ov-1柱分别，进样口温度为250。该办法的lod为5100ng/kg。陈捷等建立了不同动物肌肉组织中ass残留的gc-ms检测办法。样品经组织捣碎、用/芳基硫酸酯酶溶液酶解和超声提取后，用叔丁基甲醚萃取，再举行反相spe净化，衍生化后举行gc-ms测定。采纳db-1毛细管柱分别，载气为he，不分流进样，进样口温度280，接口温度280，ei源，溶剂延迟10min。该办法lod可达1.02.0g/kg；在2.0g/kg添加水平上，平均回收率可达62.5

6、%80.5%，rsd为12.5%26.8% kootstra等建立了尿液中ass多残留检测的gc-ms办法。采纳了两种不同的衍生化试剂：hfba和tms，主要用于定性和半定量分析低剂量的ass。质谱条件为：he为载气，factorfourvf-17ms色谱柱分别，ei离子源，sim模式检测，质谱源温度为250，四极杆温度为120，进样口温度分离为260(hfba衍生化产物)和250(tms衍生化产物)。该办法在添加浓度为1g/l时，测得ass的cca为0.060.77g/l，cc为0.090.46ug/l；添加浓度为2g/l时，测得ass的cca为0.260.54g/l，cc为0.440.92

7、g/l。 图8-4 19-去甲雄酮羰基衍生化反应及其产物 图8-5 19-去甲雄酮羟基衍生化反应及其产物 yamada等报道了采纳gc-ms/ms同时检测马尿中蛋白同化类固醇主要代谢物的办法。尿液经-葡萄糖醛酸酶水解后，用sep-pak c18 plusspe柱净化，再经叠氮基衍生化后，gc-ms/ms离子源为ei源，在mrm模式下检测。该办法的lod为550ng/ml，平均回收率和cv分离为71.3%104.8%、1.1%9.5%。gaillard等采纳gc-ms/ms办法检测了人头发中的ass。采纳甲醇提取，碱性水解后，再用提取，用氨基柱和硅胶柱举行spe净化，mstfa衍生化反应后，gc

8、-ms/ms分析。cpsil 8 cb色谱柱分别，载气为氦气，脉冲不分流进样，质谱接口温度为300，离子源温度为160，四极杆温度为70，初始炉温为80；ei电离，碰撞气为ar。办法lod小于等于6.2ng/g，平均添加回收率在61%94%之间，日内cv小于15.2%。rambaud等建立了人头发中ass多残留检测办法。4-3酮类化合物用mstfa-tmis-dte(1000+5+5，v/v/w)衍生，群勃龙用mstfa-i2衍生化，苯酚类固醇用mstfa衍生后，gc-ms/ms分析。用0v-1毛细管柱分别，载气为he，脉冲不分流进样，质谱接口温度为320，碰撞气为ar，ei电离后采纳srm模

9、式分析。办法loq可达0.110g/kg，平均回收率为50%。 impens等建立了牛尿中ass多残留的气相色谱-离子阱质谱(gc-msn)检测办法。采纳非极性bpx-5柱(25m×0.22mm，id 0.25um)分别，氦气作为载气，程序升温，进样口温度为250，分流室气流速度为60ml/min，实行无分流进样模式；离子源温度200，传输线温度275，ei电离，离子化能量为70ev。当gc-ms2分析时，测得17种ass的cc为110g/l；gc-ms3分析时，测得cc为210g/l，可用于ass常规检测。 2)化学电离(ci) 我国国家标准gb/t22967-2008采纳gc-负化学电离源(nci)-ms检测牛奶和奶粉中-雌二醇残留量。样品经过-葡糖苷酸酶和芳基硫酸苷酶水解和hlbspe柱净化后，用五氟苯甲酰氯衍生化(60放置15min)，再用gc-nci-ms在sim模式下测定，色谱柱为hp-5ms(30m×0.25mm，0.25um)，载气为氦气，梯度洗脱，流速1.0ml/min，挑选离子监测，进样