皮革水解物的检测技术

1、皮革水解物的检测技术 1概述 皮革水解物是将皮革用化学的办法举行水解，因为动物的皮毛主要成分是蛋白质，因此水解产物被称为皮革水解蛋白，添加到食品中可以提高蛋白质的含量。皮革水解物的生产原料主要来自制革工厂的边角废料，而其中往往含有和。因此皮革水解物含有危害人体健康的重金属六价铬，含有致癌物，不能用于食品加工。 目前发觉可能添加的食品有乳制品、含乳饮料。与不同，皮革水解物是真正的蛋白质，若添加到乳制品、乳饮料当中，检测起来难度比更大。 2乳与乳制品中动物水解蛋白鉴定 动物水解蛋白中的特有成分为和，且的含量较高，达10以上，而大豆蛋白与乳蛋白中不含有此成分。通过对的测定，就可鉴定乳与乳制品中是否添

2、加了动物水解蛋白的成分。 1)检测原理 试样经酸水解，释放出。经氯胺t氧化，生成含有吡咯环的氧化物。用破坏过量的氯胺t。脯氨酸氧化物与反应生成红色化合物，在波长558nm处举行比色测定。 2)检测范围 引用标准gb 9695.23-7.990肉与肉制品l(-)-羟脯氨酸含量测定。本办法适用于乳与乳制品中l(-)-pac脯氨酸含量的测定，可判定是否为动物水解蛋白。 3)试剂 所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或同等纯度的水。 (1)(gb 638-2007) : 0.75溶液。将7.5g溶于500ml水中，再加入500ml浓盐酸(gb 622-1989)。 (2)(gb 622-1989)：6mol

3、/l溶液。 (3)(gb 629-1997)：1mol/l、10mol/l溶液。 (4)缓冲液：将50g，26.3g和146.1g结晶乙酸钠(gb 694)溶于水，稀至1l，此溶液与200ml水和300ml混合。 (5)氯胺t (hg3-972 )溶液：将1.41g氯胺t,溶于10ml水中，依次加入10 ml正丙醇和80ml缓冲溶液(用时现配)。 (6)显色剂：称取10g对二甲氨基苯甲醛，用35ml(gb623)溶解，缓慢加入65ml异丙醇。 (7) l(-)-羟脯氨酸(c5h9no3)标准溶液。 标准储备液500ug/ml：称取50.0mg/l(-)-羟脯氨酸用少量水溶解，加一滴6mol/l

4、盐酸，定容至100ml容量瓶中。 标准工作液5ug/ml：吸取标准储备液5.00ml于500ml容量瓶中，定容。 4)仪器和设备 (1)配有冷凝管的三角瓶：250ml。 (2)恒温水浴。 (3)试管加热器或水浴，可控温于60。 (4)分光光度计。 5)试样处理 (1)办法1。精确称取样品25g(液体样品510g)放入250ml磨口三角瓶中。加几粒沸石。加入溶液100ml，置水浴上加热回流16h。趁热将水解溶液过滤于200ml容量瓶中，用6mol/l热盐酸10ml反复3次冲洗三角瓶和滤纸，冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取525ml(v1)水解液于100ml烧杯中，用10mol/l,1mol/l溶

5、液调整ph为80.2，过滤于250ml容量瓶中，用30ml水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀，反复3次，把洗液并入滤液中，以水洗至刻度，摇匀备用。 (2)办法2。精确称取一定量样品，精确到0.0001g，使样品蛋白质含量在1020mg范围内，将称好的样品放于水解管中。在水解管内加6mol/l盐酸1015ml(视样品蛋白质含量而定)或加入12mol/l盐酸1015ml，含水量高的样品(如牛乳)可加入等体积的浓盐酸，加入新蒸馏的苯酚34滴，再将水解管放入冷冻剂中，冷冻35min，再接到真空泵的抽气管上，抽真空(临近0)，然后充入高纯氮气；再抽真空充氮气，重复3次后，在充氮气状态下封口或拧紧螺丝盖将

6、已封口的水解管放在1101的恒温干燥箱内，水解24h后(如加入12mol/l盐酸，水解时光可缩短至6h)后，取出冷却。 打开水解管，趁热将水解溶液过滤于100ml三角瓶中，用6mol/l热盐酸10ml反复三次冲洗试管和滤纸，冷却，用水定容到刻度，混匀。吸取525ml (v1)水解液于100ml三角瓶中，用10mol/l、1mol/l溶液调整ph为80.2，过滤于50ml容量瓶中，用水冲洗烧杯和滤纸上的氢氧化亚锡沉淀，反复3次，把洗液并入滤液中，以水洗至刻度，摇匀备用。 6)检测步骤 (1)测定。标准曲线的绘制：吸取l (-)-羟脯氨酸标准工作液0.00、10.00、20.00、30.00、40

7、.00ml，分离置于100ml容量瓶中，定容摇匀。浓度分离为0.0、0.5、1.0、1.5、2.0ug/ml。取不同浓度的上述溶液4.00ml，分离加入20ml具塞试管中，加氯胺t溶液2ml，摇匀后于室温放置20min。加入显色剂2ml，摇匀，塞上塞子于60试管加热器(或恒温水浴)中保温20min后取出，快速冷却，在波长558nm2 nm处测定吸光值，绘制标准曲线。 (2)试样测定。从待测液中吸取已制备好的样液4.00ml于20ml具塞试管中，以下按6)中(1)步骤举行，同时作空白实验。 7)结果计算 式中：x样品中l(-)-羟脯氨酸的含量，； c从标准曲线上查得相应的l(-)-羟脯氨酸量，ug; m称取试样的质量，g； v1样液体积，ml; a稀释倍数。 当符合允许差所规定的要求时，取两次测定结果的算术平均值作为结果，结果精确到0.01。 8)允许差 同一分析者同时或相