胃癌组织中DNA聚合酶β基因突变特点分析

1、胃癌组织中DNA聚合酶P基因突变特点分析作者：赵洁，董子明，毛海洲，王煊，赵国强【关键词】，DNA聚合酶pMutatio n characteristics of DNA poly merase beta gene in huma n gastric carci noma tissue【Abstract 】AIM: To detect the mutation characteristics of DNApolymerase beta gene (pol p gene) in human gastric careinoma.METHODS: Total RNAwas extracted fro

2、m 32 gastric cancer samp les and 32 tissue samp les adjace nt to tumors. The RTPCR was carried out and the PCR p roduct was cloned and seque need with San gers method subseque ntly.RESULTS: Three from the seven abnormal SSCPsamples were sequeneed and the mutatio n sites were: site 196 Af G, site 268

3、 A f G and site 790 A f T.No mutati on was found by seque ncing in a no rmal P CRSSC P samp le of the tissues adjace nt to the tumor. Omiga an alysis showed that the three point mutati ons led to cha nges of ami no acid: site 196 Af G of nu cleic acidresulted in site 28 Asrf Ser of ami no acid, site

4、 268 Af G of nu cleic acid resu lted in site 52 Lys f Arg of ami no acid, and site 790 A f T of nu cleic acid resulted in site 226 Aspf Val of ami no acid. Choufasma n method ofDn asis showed that site 196 Af G mutati on caused great cha nges in thesec on dary structure of pol p en zyme. CONCLUSION:

5、 The pol p gene mutatio n rate is up to %. The three point mutations observed in this study all lead to the alter nati on ofami no acid. Site196 A f G mutatio n can cause greatcha nges in the sec on dary structure of polp en zyme.【Keywords! DNA poly merase beta; gene mutatio n; stomach neopl asms 【摘

6、要】目的：探讨人胃癌DNA聚合酶p (pol p )基因突变的特点.方法： 对32例人胃癌组织及32例正常对照组织中提取总 RNA进行RTPCR SSCP对 PCF产物克隆后以San gers法测序，并采用Omiga及Dan sis软件分析结果.结 果:人胃癌标本的pol p基因突变率%.测序分析了 7例SSC畀常中的3例,其 突变分别为196位Af G 268位Af G 790位Af T;经OMIGA软件分析，这3 个pol p的点突变均导致了氨基酸的改变，具体形式为：核酸196位AfG导致氨基酸28位Asnf Ser；核酸268位AfG导致氨基酸52位Lysf Arg；核酸790 位AfT

7、导致氨基酸226位Aspf Val. DNASIS软件Choufasman算法推测，pol p这3个pol p的点突变都导致了氨基酸的改变, P酶蛋白的二级结构明显改变.P ;基因突变；胃肿瘤的196位 LG突变可以导致pol P酶蛋白的二级结构图明显改变.结论：人胃 癌组织pol P基因突变率达% 196位LG突变可以导致pol【关键词】DNA聚合酶0引言DNA聚合酶P (pol P )为真核生物中5种DNA聚合酶之一，是一重要的碱基 切除修复(BER)酶,有利于维持基因组的稳定性.有关DNA修复酶基因的表达及 突变和遗传性微卫星不稳定性及与基因突变途径的关系已为肿瘤分子机制的深 入研究提供

8、了一个新领域1-3 :.我们研究人胃癌组织中pol P基因突变位点 及对应氨基酸、蛋白质二级结构的改变，探讨其在胃癌发生中的作用.1材料和方法材料胃癌及癌旁组织标本32例，取自济南军区第155中心医院、郑州大学第一 医院、河南省人民医院胃镜室，经病理检查确诊为胃癌.每份标本取自癌组织和 癌旁正常组织各3块,标本离体后迅速置于-196C液氮保存.方法应用Qiagen公司总RNA提取试剂盒提取总RNA,AMV2C反转录合成cDNA 用pol P SSCP引物进行PCRT增，扩增出pol P的7个基因片段；将PCRT增 产物进行SSCP分析，筛选出突变基因序列；以全基因引物扩增在SSC冲被发现 的异

9、常标本的pol P基因完整DNA序列；选择PGEM为载体，用T4 DNA连接酶 连接目的基因pol P和质粒DNA选用JM109为宿主菌，用氯化钙共沉淀法制备 感受态细胞并将重组体转入宿主菌.在用插入灭活法和蓝白筛选下得到阳性克 隆(pGEMTpop )；使用T7/SP6引物扩增方法鉴定重组体；提取重组质粒(PGEMTpoP )进行DNA序列测定；得到序列用 DNASIS Omiga软件与GenBank 中查到的DNA聚合酶P基因序列进行同源性比较分析，推测其蛋白序列并分析 蛋白同源性及结构改变情况.2结果在32例胃癌组织标本中有7例SSCP异常，突变率为%.而对应的32例癌 旁组织PCRSS

10、CPP果中未见异常.对7例SSCP异常中的3例进行DNA测序,与 Gen Ba nk中查到的pol p基因进行同源比较和分析,结果发现，pol p基因的第 790位由A变为T,突变类型为颠换,第268位由A变为G,突变形式为转换，第 196位由A变为G突变形式为转换.经Omiga软件分析，推测pol p各变异位 点对应的氨基酸的变异情况(Tab 1).应用ASIS软件ChouFasmai算法推测pol p 氨基酸序列二级结构结果(Fig 1).表1pol p各变异位点对应的氨基酸变异情况(略)3讨论细胞DNA®伤与肿瘤的发生有密切关系.pol P是一重要的DNA修复酶，其 突变与一些

11、肿瘤的发生有关.在结直肠癌、膀胱癌、前列腺癌和食管癌等中检测 到的pol P基因突变4-7 和本实验中检测到胃癌的pol P基因突变的形式和 部位均不相同，突变率也有差异.本组32例癌组织标本中突变率为突变形式 仅有点突变一种，不存在pol P基因缺失的现象.推断：pol P突变率，结直肠 癌食管癌胃癌.在胃癌中pol P突变的研究中发现，178位TC(22LeuPro) ,828 位 TC (2Cys Arg) ,229 位 AG (TyrCys) ,591 位 GA (160Asr Asn) ,993 位 A G (294Asr Asp) ,996 位 3A (295Glu Lys)等 点

12、突变，并且指出996位GA是胃癌中pol P突变的相对热点.我们发现的 pol P的突变位点与日本学者Iwanaga等8不同，从我们的结果似乎不支持 996位GA是胃癌中pol P突变的相对热点.【参考文献】1 Li B , Lee MY. Transcriptional regulation of the human DNA poly merase S catalytic sub unit gene po Id1 by p53 tumor supp ressor and Sp1 J: . Biol Chem, 20XX;276(8):29729-297.2 白飞虎，郭新宁，杨力，等.人胃癌裸

13、鼠胃原位移植转移模型的建立J.第四军医大学学报，20XX 24(10): 873-875.Bai FH, Guo XN, Yang L, et al. Establishme nt of transplan tati on ofin situ humangastric tumor metastasis model in nude mice J . J Fourth Mil Med Un iv,20XX;24(10):873-875.3 蔡永国，房殿春，杨仕明，等.胃癌组织中肝素酶mRNA勺表达意义J.第四军医大学学报,20XX;25(10):909-911.Cai YG, Fa ng DC,

14、Yang SM ,et al. Sig nifica nee of hep ara nase mRNA exp ressi on in gastric carci noma tissues J . J Fourth Mil MedUn iv,20XX;25(10):909-911.4 Dobashi Y, Shuin T, Tsuruga H, et al. DNApolymerase beta gene mutation in human prostate cancer J . Cancer Res, 1994;54(11):2827-2829.5 Matsuzuaki J, Dobashi

15、 Y, Miyamoto H, et al. DNAolymerase betagene mutation in human bladder cancerJ . MolCarci nog,1996;15(1):38-43.6董子明，赵国强,赵勤，等.人食管癌中聚合酶B基因突变的研究J:. 中华医学杂志，20XX;82(13):899-902.Dong ZM, Zhao GQ, Zhao Q, et al. A study of DNA polymerase mutation in human esophageal cancer J . Natl Med J Chi na,20XX;82(13):899-902.7 Wang L, Patel U, Ghosh L, et al. DNA polymeraseB mutationin human colorectal