仪器分析――质谱法

1、仪器分析质谱法质谱法是将被测物质离子化， 按离子的质荷比分离， 测量各种离子谱峰的强 度而实现分析目的的一种分析方法。 质量是物质的固有特征之一， 不同的物质有 不同的质量谱质谱， 利用这一性质， 可以进行定性分析 （包括分子质量和相 关结构信息）；谱峰强度也与它代表的化合物含量有关，可以用于定量分析。质谱仪一般由四部分组成： 进样系统按电离方式的需要， 将样品送入离 子源的适当部位； 离子源用来使样品分子电离生成离子， 并使生成的离子会 聚成有一定能量和几何形状的离子束；质量分析器一一利用电磁场（包括磁场、 磁场和电场的组合、 高频电场、 和高频脉冲电场等） 的作用将来自离子源的离子 束中不

2、同质荷比的离子按空间位置， 时间先后或运动轨道稳定与否等形式进行分 离；检测器一一用来接受、检测和记录被分离后的离子信号。一般情况下，进样 系统将待测物在不破坏系统真空的情况下导入离子源（10-610-8mmH）,离子 化后由质量分析器分离再检测；计算机系统对仪器进行控制、采集和处理数据， 并可将质谱图与数据库中的谱图进行比较。一、进样系统和接口技术来源：考试大 将样品导入质谱仪可分为直接进样和通过接口两种方式实现。1. 直接进样 在室温和常压下，气态或液态样品可通过一个可调喷口装置以中性流的形式 导入离子源。吸附在固体上或溶解在液体中的挥发性物质可通过顶空分析器进行 富集，利用吸附柱捕集，

3、再采用程序升温的方式使之解吸， 经毛细管导入质谱仪。对于固体样品，常用进样杆直接导入。将样品置于进样杆顶部的小坩埚中， 通过在离子源附近的真空环境中加热的方式导入样品， 或者可通过在离子化室中 将样品从一可迅速加热的金属丝上解吸或者使用激光辅助解吸的方式进行。 这种 方法可与电子轰击电离、 化学电离以及场电离结合， 适用于热稳定性差或者难挥 发物的分析。目前质谱进样系统发展较快的是多种液相色谱 /质谱联用的接口技术，用以 将色谱流出物导入质谱， 经离子化后供质谱分析。 主要技术包括各种喷雾技术 （电 喷雾，热喷雾和离子喷雾） ；传送装置（粒子束） 和粒子诱导解吸 （快原子轰击） 等。2. 电喷

4、雾接口 带有样品的色谱流动相通过一个带有数千伏高压的针尖喷口喷出， 生成带电 液滴，经干燥气除去溶剂后， 带电离子通过毛细管或者小孔直接进入质量分析器。 传统的电喷雾接口只适用于流动相流速为15卩l/min的体系，因此电喷雾接口主要适用于微柱液相色谱。 同时由于离子可以带多电荷， 使得高分子物质的质荷 比落入大多数四极杆或磁质量分析器的分析范围（质荷比小于4000），从而可分析分子量高达几十万道尔顿（Da）的物质。3. 热喷雾接口存在于挥发性缓冲液流动相 （如乙酸铵溶液） 中的待测物， 由细径管导入离 子源，同时加热，溶剂在细径管中除去，待测物进入气相。其中性分子可以通过 与气相中的缓冲液离子

5、（如 NH4+反应，以化学电离的方式离子化，再被导入 质量分析器。热喷雾接口适用的液体流量可达 2ml/min ，并适合于含有大量水的 流动相，可用于测定各种极性化合物。 由于在溶剂挥发时需要利用较高温度加热， 因此待测物有可能受热分解。4. 离子喷雾接口 在电喷雾接口基础上，利用气体辅助进行喷雾，可提高流动相流速达到1ml/min. 电喷雾和离子喷雾技术中使用的流动相体系含有的缓冲液必须是挥发 性的。5. 粒子束接口将色谱流出物转化为气溶胶， 于脱溶剂室脱去溶剂， 得到的中性待测物分子 导入离子源， 使用电子轰击或者化学电离的方式将其离子化， 获得的质谱为经典 的电子轰击电离或者化学电离质谱

6、图，其中前者含有丰富的样品分子结构信息。 但粒子束接口对样品的极性， 热稳定性和分子质量有一定限制， 最适用于分子量 在lOOODa以下的有机小分子测定。6. 解吸附技术将微柱液相色谱与粒子诱导解吸技术 （快原子轰击， 液相二次粒子质谱） 结 合，一般使用的流速在110卩l/min之间，流动相须加入微量难挥发液体（如 甘油）。混合液体通过一根毛细管流到置于离子源中的金属靶上，经溶剂挥发后 形成的液膜被高能原子或者离子轰击而离子化。 得到的质谱图与快原子轰击或者 液相二次离子质谱的质谱图类似，但是本底却大大降低。二、离子源离子源的性能决定了离子化效率， 很大程度上决定了质谱仪的灵敏度。 常见 的

7、离子化方式有两种： 一种是样品在离子源中以气体的形式被离子化， 另一种为 从固体表面或溶液中溅射出带电离子。在很多情况下进样和离子化同时进行。1. 电子轰击电离（ EI ）气化后的样品分子进入离子化室后， 受到由钨或铼灯丝发射并加速的电子流 的轰击产生正离子。离子化室压力保持在10-410-6mmHg轰击电子的能量大于 样品分子的电离能， 使样品分子电离或碎裂。 电子轰击质谱能提供有机化合物最丰富的结构信息， 有较好的重现性， 其裂解规律的研究也最为完善， 已经建立了 数万种有机化合物的标准谱图库可供检索。 其缺点在于不适用于难挥发和热稳定 性差的样品。医学教育网搜集整理2.化学电离（ CI）

8、引入一定压力的反应气进入离子化室， 反应气在具有一定能量的电子流的作 用下电离或者裂解。 生成的离子和反应气分子进一步反应或与样品分子发生离子 ?卜肿臃从r?通过质子交换使样品分子电离。常用的反应气有甲烷，异丁烷 和氨气。化学电离通常得到准分子离子， 如果样品分子的质子亲和势大于反应气 的质子亲和势，则生成M+H +,反之则生成M-H +.根据反应气压力不同， 化学电离源分为大气压、中气压（0.1lOmmH）和低气压（10-6mmH）三种。 大气压化学电离源适合于色谱和质谱联用， 检测灵敏度较一般的化学电离源要高 23 个数量级，低气压化学电离源可以在较低的温度下分析难挥发的样品，并 能使用难

9、挥发的反应试剂，但是只能用于傅里叶变换质谱仪。3. 快原子轰击（ FAB）LSIMS）。将样品分散于基质 （常用甘油等高沸点溶剂） 制成溶液， 涂布于金属靶上送 入FAB离子源中。将经强电场加速后的惰性气体中性原子束 （如氙）对准靶上样 品轰击。基质中存在的缔合离子及经快原子轰击产生的样品离子一起被溅射进入 气相，并在电场作用下进入质量分析器。如用惰性气体离子束（如铯或氩）来取 代中性原子束进行轰击，所得质谱称为液相二次离子质谱（此法优点在于离子化能力强， 可用于强极性、 挥发性低、 热稳定性差和相对 分子质量大的样品及EI和CI难于得到有意义的质谱的样品。FAB比EI容易得 到比较强的分子离

10、子或准分子离子；不同于 CI 的一个优势在于其所得质谱有较 多的碎片离子峰信息， 有助于结构解析。 缺点是对非极性样品灵敏度下降， 而且 基质在低质量数区（400以下）产生较多干扰峰。FAB是一种表面分析技术，需 注意优化表面状况的样品处理过程。样品分子与碱金属离子加合，如 M+Na 和 M+K，有助于形成离子。这种现象有助于生物分子的离子化。因此，使用氯化 钠溶液对样品表面进行处理有助于提高加合离子的产率。 在分析过程中加热样品 也有助于提高产率。在FAB离子化过程中，可同时生成正负离子，这两种离子都可以用质谱进行 分析。样品分子如带有强电子捕获结构， 特别是带有卤原子， 可以产生大量的负

11、离子。负离子质谱已成功用于农药残留物的分析。4. 场电离（ fieldionization ， FI ）和场解吸（ fielddesorption ， FD） FI 离子源由距离很近的阳极和阴极组成，两极间加上高电压后，阳极附近产生高达10+710+8V/C m的强电场。接近阳极的气态样品分子产生电离形成正 分子离子，然后加速进入质量分析器。对于液体样品（固体样品先溶于溶剂）可 用 FD 来实现离子化。将金属丝浸入样品液，待溶剂挥发后把金属丝作为发射体 送入离子源， 通过弱电流提供样品解吸附所需能量， 样品分子即向高场强的发射 区扩散并实现离子化。FD适用于难气化，热稳定性差的化合物。FI和F

12、D均易得 到分子离子峰。5. 大气压电离源（ API）API 是液相色谱 / 质谱联用仪最常用的离子化方式。常见的大气压电离源有 三种：大气压电喷雾（APES）,大气压化学电离（APCI）和大气压光电离（APPI）。 电喷雾离子化是从去除溶剂后的带电液滴形成离子的过程， 适用于容易在溶液中 形成离子的样品或极性化合物。 因具有多电荷能力， 所以其分析的分子量范围很 大，既可用于小分子分析，又可用于多肽、蛋白质和寡聚核苷酸分析。 APCI 是 在大气压下利用电晕放电来使气相样品和流动相电离的一种离子化技术， 要求样 品有一定的挥发性， 适用于非极性或低、 中等极性的化合物。 由于极少形成多电 荷离子，分析的分子量范围受到质量分析器质量范围的限制。 APPI 是用紫外灯 取代APCI的电晕放电，利用光化作用将气相中的样品电离的离子化技术，适用 于非极性化合物。由于大气压电离源是独立于高真空状态的质量分析器之外的， 故不同大气压电离源之间的切换非常方便。6. 基质辅助激光解吸离子化（ MALD）I将溶于适当基质中的样品涂布于金属靶上， 用高强度的紫外或红外脉冲激光 照射可实现样品的离子化。此方式主要用于可达 lOOOOODa质量的大分子分析， 仅限于作为飞行时间分析器的离子源使用