总糖和还原糖的测定讲课稿

1、总糖和还原糖的测定（ 3,5 二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见， 我们吃的米饭、 水果、 零食中或多或少都含有一些糖类。同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。 我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。 本次实验我们将用3,5 二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。首先， 让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类， 单糖都是还原糖， 双糖和多糖不一定是

2、还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同， 可将植物样品中的单糖、 双糖和多糖分别提取出来， 对没有还原性的双糖和多糖， 可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计） 。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,5- 二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3- 氨基 -5- 硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算， 便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 由于多糖水解为单糖时， 每断裂一个糖苷键需加入一分

3、子水，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9 。一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类， 单糖都是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖， 其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来， 对没有还原性的双糖和多糖， 可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定， 再分别求出样品中还原糖和总糖的含量 （还原糖以葡萄糖含量计） 。还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物， 3,

4、5- 二硝基水杨酸则被还原为棕红色的 3-氨基 -5- 硝基水杨酸。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算， 便可求出样品中还原糖和总糖的含量。 由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以 0.9 。三、材料与器具的准备。实验材料：面粉。实验试剂（1）、1mg/mL®萄糖标准液准确称取80c烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg置于小烧杯中，力口少 量蒸储水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸储水定容至100mL混匀，4c 冰箱中保存备用。(2)、3,5-二硝基水杨

5、酸(DNS试剂将6.3g DNSffi 262mL2M NaO哈液，力口到500mL含有185g洒石酸钾 钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸储水定 容至1000mL贮于棕色瓶中备用。(3)、碘-碘化钾溶液：称取5g碘和10g碘化钾，溶于100mL蒸储水中。(4)、酚吹指示剂：称取0.1g酚酥，溶于250mL 70%醇中。(5)、6M HCl 和 6M NaOK 100mL实验器材(1)具塞玻璃刻度试管：20mL< 11(2)大离心管：50mL<2(3)烧杯：100mL< 1(4)三角瓶：100mL<1(5)容量瓶：100mL< 3(

6、6)刻度吸管：1mL< 1; 2mL<2; 10mL<1(7)恒温水浴锅(8)沸水浴(9)分光光度计分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射下，产生了对光吸收的效 应，物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱， 因此当某单色光通过溶液时，其能量就会被吸收而减弱，光能量减弱的程度和物 质的浓度有一定的比例关系，也即符合比色原理Lambert-Beer's law:数学表达式：A=lg(1/T)=KCLA为吸光度T为透射率，是投射光强度比上入射光强度C为吸光物质的浓度L为吸收层厚度K为吸收系数物理意义是当一束平行单色光垂直通过某一均匀非散射的

7、西光物质时 ，其吸光度 A与吸光物质的浓度C及吸收层厚度L成正比.四、实验步骤。器材与材料准备完毕之后，便开始按照以下步骤进行实验。 首先，制作葡萄 糖标准曲线。取6支20mL具塞刻度试管编号，按下表分别加入浓度为1mg/mL的 葡萄糖标准液、蒸储水和3,5-二硝基水杨酸(DNS试剂，配成不同葡萄糖含量 的反应液。_012345标准葡萄00.0.0.0.8 11.糖溶液ml2460蒸储水ml2.1.1.1.1.21.08640 IDNS试齐1J1.1.1.1.1.51.ml55555接下来，提取还原糖。准确称取 2.00g食用面粉，放入100mL烧杯中，先 用少量蒸储水调成糊状，然后加入50m

8、L蒸储水，搅匀，置于50。叵温水浴中保 温20min,使还原糖浸出。过滤，将滤液收集在 100ml容量瓶中，用蒸储水定容 至刻度，混匀，作为还原糖待测液。紧接着，提取总糖。准确称取 1.00g食用面粉，放入100mL三角瓶中，加 15mL蒸储水及10mL 6M HC|置沸水浴中加热水解30min (水解是否完全可用碘 -碘化钾溶液检查)。待三角瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚吹指示剂，用6mol/LNaOH中和至微红色，用蒸储水定容在 100mL容量瓶中，混匀。将定容后 的水解液过滤，取滤液10mL移入另一 100mL容量瓶中定容，混匀，作为总糖 待测液。然后，取4支20mL具塞刻度试管，编号，

9、6、7、8、9,按下表所示分别加 入待测液和显色剂。管号还原糖待测液(ml)总糖待测 液(ml)蒸储水 (ml)DNS (ml)60.51.51. 570.51.51. 58111. 59111. 5最后，用分光光度计进行比色。先将机器打开预热20分钟。选择540nm的波长。再按MODE!切换到T,将黑体放入光路中，合上盖，0键校零。再按MODE 键切换到A,将倒入比色皿中的0号液体放入到光路中，合上盖，100键校零。 再将倒入比色皿中的各号液体放入到光路中即可测得光密度值。五、注意事项:1、每次测量前检查，检查波长是否所需值;2、比色皿应拿磨砂面，不可用手接触透光面；3、比色皿在盛装样品前，

10、应用所盛样品冲洗两次，装样量为比色皿的2/3容 积；4、向比色皿加样时，若样品流到比色皿外壁时，应用滤纸点干，切忌用滤纸擦 拭，以免比色皿出现划痕；5、测量结束后应用蒸储水清洗比色皿，清洗干净后放起.六、数据处理试 管123456789光 密度值 (nnr)0.0250.1320.1860.2970.3240.0770.0820、710、73葡萄糖标准皿线y = 0.3557x - 0.0172查曲期将新药精亳克数K提取液总体枳八测定时取用体枳川还原据（用）-X1DO样品毫克勒：查曲线所得不斛后还原糖密克数X稀释傍数¥ 总糖评）XD.9X1DM样品套克数口根据公式可以算得还原糖为0.

11、27mg总糖为2.07mg.则还原糖百分含量二毫克数X提取液总体积 测定时取用体积+样品的质量 =13.5%总糖的百分含量二毫克数X稀释倍数一样品质量X 0.9=18.63%总结：本实验测得还原糖的含量为13.5%,总糖含量为18.63%, R2为0.9739 , 实验数据还是略有偏差。七、误差分析。1、在配置制作葡萄糖标准曲线的溶液时，使用移液管移动液体，由于不够 熟练，所以并没有准确移动相应的液体量，导致 R2偏低。2在提取还原糖时，由于我们采用的是最简单的棉花过滤方法，这个方法可 能导致有许多还原糖被浪费，导致所测还原糖含量偏低。止匕外，我们也需要注意，在标准的实验中，标准曲线的制定与样品含糖量必 须同时进行，一起显色和比色。八、体会。这次试验我们学习了植物总糖、还原糖的提取鉴定及其含量测定，掌握了还 原糖和总糖测定的基本原理，同时也对比色法测定还原糖有了一定了解并且还掌 握了使用分光光度计测定还原糖和总糖的光密度值收获许多，试验中要求每只试管同时进行水浴加热加热