高效液相色谱法测定人血清中舒必利的浓度

1、高效液相色谱法测定人血清中舒必利的浓度摘要目的:建立人血清中舒必利的测定方法，为临床应用和动力学研究提供技术参考。方法:采用HPLC法荧光检测，流动相为甲醇-5 mmol.L-1磷酸二氢钠(3367，v/v)，CN氢基柱分离，荧光激发波长298 nm，发射波长345 nm，以甲氧氯普胺为内标，氯仿提取。结果:线性范围101 500 g.L-1，平均回收率为98.57%，日内RSD%为2.87%，日间RSD%为3.78%。结论:方法简单，分析速度快，灵敏度高，重复精度好，适用于临床血药浓度测定及药物动力学研究。关键词舒必利；血药浓度；高效液相色谱法中分类号：R927.2文献标识码：A文章编号：1

2、001-5213(2000)06-0338-02 Determination of sulpiride in human serum by HPLCYan Xiaohua,Deng Xiaomin,Wu Huaian(Shenzhen KangNin Hospital,Guangdong Shenzhen,518003)ABSTRACTOBJECTIVE：An high performance liquid chromatography for the determination of sulpiride in human serum was established.METHODS：A mob

3、ile phase was methyl alcohol-5 mmol.L-1 NaH2PO4(3367 v/v),a CLC-CN column(150 mm6.0 mm I D)spectrofluorometric detector was used,with metoclopramide as internal stardard.The sulpiride in serum was extracted with chloroform.The tetection wavelength was ex 298 nm，em 345 nm.RESULTS：The linear range was

4、 from 10 to 1 500 g.L-1(r=0.999 9)，and the detection limit was 2ng(S/N=5).The average recovery in serum was 98.57% with RSD of 3%.CONCLUSIONS：This method is simple and rapid,and reproduciable.KEY WORDSsulpiride;serum concentration;HPLC舒必利(sulpiride)为苯甲酰胺类抗精神病药，对垂体、中脑-皮层和中脑-边缘系统D2受体有高度亲和力，而对纹状体的亲和力低。

5、1966年首先用于临床胃肠疾病，1967年用于精神病患者1。由于其无镇静作用，锥外反应少，不良反应轻微，临床研究越来越多。现已广泛应用于各类精神疾病2。舒必利血药浓度测定的报道有TLC法3，HPLC法4和放射配基结合分析法5。我们根据其药物的特性，选择CN柱分析的高效液相色谱荧光测定法，测定人血清中舒必利浓度，现报道如下。1材料与试剂LC-6A高效液相色谱仪，配置包括LC-6A高压泵、RF-551荧光检测器、CTO-6A柱恒温箱、C-R3A数据积分仪(以上均为日本岛津产品)；舒必利对照品、甲氧氯普胺原料药(均为湖南医科大学附属二医院临床药学研究室提供)；甲醇和乙腈(色谱纯)、氯仿(AR级)、三

6、蒸水(本实验室制备)。2方法2.1舒必利标准液的配制精密称取舒必利对照品100 mg，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解，然后稀释至刻度成1g.L-1的标准贮备液。精密吸取贮备液1 ml置100 ml量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度成10 mg.L-1的标准工作液。2.2内标标准液的配置精密称取甲氧氯普胺适量，置100 ml量瓶中，用甲醇溶解稀释至刻度，配成50 mg.L-1的内标标准液。2.3色谱分析条件CLC-CN分析柱(150 mm6.0 mm I.D，日本岛津公司)，流动相：甲醇-5 mmol.L-1磷酸二氢钠(3367 v/v)，流速：1 ml.min-1，柱温：40 ，荧光检测激发波长2

7、98 nm，发射波长345 nm，标准谱见1-a。1色谱a. 标准谱(舒必利5.75 min，内标10.60 min)b. 空白血清+内标c. 服药病人血样2.4样品预处理取全血后分离血清1 ml，加入内标标准液(50 mg.L-1)5 l，混匀，静置片刻，加氯仿4 ml，旋涡振荡1 min(以液体刚好旋起为准，避免乳化)，置离心机中，3 000 r.min-1离心3 min。用移液枪小心取出下层氯仿置另一干净尖底试管，放入5055 的水浴中，空气流挥干溶剂，100 l流动相复溶待测。血清提取谱见1-b.c。2.5标准曲线的绘制取5支尖底刻度离心管，分别加入舒必利标准工作液1，10，50，10

8、0，150 l置温水浴中吹干溶剂，再向每一管中加入健康空白人血清1 ml和5 l的内标标准液，混匀，照样品预处理方法操作，20 l注入色谱分析。2.6回收率和精密度测定制备相当于每升血清中含10，300，800，1 500 g的舒必利血样，每一浓度平行管3份，加入内标，照样品预处理项下操作测定，每份样品同日内进样5次，一周内连测5 d，然后求出其平均回收率和日内日间RSD%。2.7样品测定根据CCMD-2R诊断标准确诊的精神病患者，口服舒必利0.51.0 g.d-1达稳态后，于次日给药前采肘静脉血3 ml，分离血清，取0.5 ml照样品处理项下操作测定。3结果3.1线性关系与检测灵敏度按标准曲

9、线绘制项下测定，以舒必利浓度为纵坐标，舒必利与内标峰面积之比为横坐标进行线性回归，线性关系良好，线性范围为101500 g.L-1，回归方程为A=0.015 82+0.001 775C(A为面积比，C为舒必利浓度，r=0.999 9)，最低检测限为0.2 ng，最低检测浓度为10 g.L-1。3.2回收率及精密度测定制备上述10，300，800，1 500 g.L-1的血清样本，照样品预处理项下操作，其平均回收率为98.57%，同浓度平行管3份，当日进样5次，计算日内RSD%，一周内测定5次，计算日间RSD%，结果见表1。表1舒必利平均回收率和日内、日间精密度加入浓度g.L-1日内精密度 (n

10、=5)日间精密度 (n=5)实测g.L-1RSD%实测g.L-1RSD%1096.93.13.2199.24.34.3298.03.7300300.76.92.29295.810.93.6799.43.6800789.730.03.80793.836.44.5999.04.81 5001 468.832.12.181 464.737.52.5697.82.13.3临床患者在给予舒必利0.51.0 g.d-1，稳态后其血清药物浓度在2001 000 g.L-1之间。4讨论4.1柱的选择舒必利属于弱极性化合物，一般采用反相色谱分析，在用反相色谱中最常用的ODS(C18)柱分析，采用不同比例的甲醇水

11、溶液预试，甲醇比由67%30%，舒必利与溶剂峰无法分离，在甲醇比例继续降低时，舒必利即使延长保留时间，但此时峰形扩展，拖尾，灵敏度也随之降低。由于这种特殊性质，选用极性CN柱，舒必利在不同比例甲醇水溶液为流动相时，其K值变化明显，能与溶剂峰分离，色谱峰形尖锐对称，且无血清杂质干扰，故选CN柱为分析柱。4.2流动相的确定考虑采用最简单经济的甲醇和水系统为原则，在保证分析的重复精度和与血清杂质分离度的同时，使分析时间尽可能短，确定本流动相组成。4.3提取溶媒的确定选择的溶媒有乙醚、乙酸乙酯、氯仿和氯仿-异丙醇(41)的混合液，经空白血清加样回收对照实验，乙醚和乙酸乙酯提取回收率在(4050)%，之

12、间，提取率低，且有干扰杂质存在。氯仿和氯仿-异丙醇混合液的提取回收率较好，采用氯仿提取，溶剂挥干速度快，残留物干净，可节省样品处理时间，且杂峰小。4.4本法经临床应用，其方法稳定，效果较好，在临床给予常规剂量后，其血药浓度范围在2001 000 g.L-1之间，符合本法所控制的线性范围内。舒必利血药浓度测定的文献不多，可能是因为其血药浓度与临床效应无相关性6.7，没有更深入的研究。但在临床上血药浓度与不良反应却有明显的相关性8，因此测定血药浓度可以帮助医生合理用药，防止不良反应的发生。对于指导临床用药是有意义的。闫小华（深圳市康宁医院，广东 深圳 518003）邓小敏（深圳市康宁医院，广东 深

13、圳 518003）吴怀安（深圳市康宁医院，广东 深圳 518003）参考文献1王祖欣，裴印权，金有豫主编.临床精神药理学M.北京：北京医科大学，中国协和医科大学联合出版社，1990：1582方之平.一个新颖的抗精神病药-舒必利J.国外医学-精神病学分册，1980，7(1)：183赵洁生，张相林，张欣.薄层色谱扫描法测定舒必利的血清浓度J.中日友好医院学报，1997，11(2)：1294于遐，罗振，唐济生等.高效液相色谱法测定血浆中舒必利浓度M.色谱，1997，15(6)：5465安登魁.药物分析M.济南：济南出版社，1992：4226陈美娟，高哲石，宋立升等.舒必利治疗精神分裂症阴性症状的临床效应与