不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化活性影响的研究

1、不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化活性影响的研究 08-05-24 14:16:00 编辑：studa20 作者：刘建华，韩立强，赵汉雨，莫娟，张素梅，潘玉善【摘要】 目的研究不同提取方法对虎杖蒽醌类成分及其抗氧化作用的影响。方法采用回流、索氏、微波及超声四种提取方法，测定四种提取液中的游离蒽醌和总蒽醌的含量；采用DPPH，FRAP两种方法测定其抗氧化活性，并分析蒽醌类成分和抗氧化活性之间的关系。结果在对游离蒽醌的测定中以索氏法为最高（0.53%），其次为超声（0.45%），各种方法之间相比差异显著（P0.05）；在对总蒽醌的测定中，结果如下：索氏（1.16%）超声（1.15%）微波（1

2、.04%）回流（0.80%）；抗氧化活性测定发现，以回流液的抗氧化能力最强，其次是微波，二者与超声和索氏的相比有显著性差异（P0.05）；相关性分析发现，蒽醌的含量与抗氧化活性呈显著的负相关(P0.01)。结论不同提取方法影响虎杖蒽醌类成分和抗氧化活性，蒽醌类成分和抗氧化活性之间具有负相关的关系。 【关键词】 提取方法； 虎杖； 蒽醌； 分光光度法； 抗氧化Abstract:ObjectiveTo explore the effect of different extraction methods on the content of anthroquinone compound and its

3、 antioxidative activity in Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.MethodsAnthroquinone compound was extracted respectively by reflux method, Soxhlet extraction method ultrasound wave method and microwave-assisted extraction. The free and total anthroquinone content and its antioxidative activity was det

4、ermined by spectrophotometry. The correlation between anthroquinone compound and antioxidative activity was analyzed.ResultsThere were significant differences in the extraction content of free anthroquinone content among the four extraction method stated（P0.05）,Soxhlet extraction method was the high

5、est（0.53%），ultrasound wave method was better（0.45%）. In the determination of total anthroquinone, the result was:Soxhlet extraction method（1.16%） ultrasound wave method（1.15%）microwave-assistedreflux method extraction. The reflux method was better than microwave-assisted extraction, compared with So

6、xhlet extraction method and ultrasound wave method. There were significant differences in the determination of its antioxidant activity（P0.05） There was significant negative correlation between anthroquinone compound and its antioxidative activity (P0.01) .ConclusionAnthroquinone compound and antiox

7、idative activity in Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc. was affected by different extracting methods, there was negative correlation between anthroquinone compound and antioxidative activity.Key words:Extraction method; Polygonum cuspidatum Sieb. et Zucc.; Athroquinone compound; Spectrophotometry; A

8、ntioxidative activity 虎杖系蓼科蓼属植物虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.的根茎和根，具有抗菌、抗病毒等广泛的治疗作用1。其主要有效成分为蒽醌类、二苯乙烯类、黄酮类等。随着近年来对其药理作用的深入研究，虎杖的抗氧化作用也日益为人们所重视2，3。蒽醌类成分作为虎杖中主要有效成分，在治疗疾病过程中起着较为重要的作用，本实验主要研究了不同提取方法对虎杖中蒽醌类成分及其抗氧化作用的影响，并分析蒽醌类成分和抗氧化活性之间的关系。1 仪器与材料1.1 仪器JY92-超声波细胞破碎仪，宁波新芝科器所；微波炉，广东美的微波炉制造有限公司；UV-280

9、0紫外分光光度计，尤尼柯（上海）仪器厂；酸度计，意大利哈钠；微量移液器，eppendorf；Sartorius 电子天平（型号1702，称量范围200g，感量0.1mg）,德国Sartorius；FZ102微型植物试样粉碎机，北京市永光明医疗仪器厂；回流提取装置；索氏提取装置。1.2 材料大黄素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110756200110，供含量测定用，经归一化法标定98.0%）；二苯代苦味酰基自由基(1，1-pheny-2-picrylhydrazyl，DPPH) Sigma；TPTZ（2，4，6-tripyridyl-s-trizine）Sigma；虎杖药材（购自河南仟僖堂

10、医药公司，经河南中医学院曹继华教授鉴定为正品）；其余试剂均为国产分析纯。2 方法2.1 对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品(105干燥至恒重)4.1 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度。精密吸取上述溶液1 ml，置10 ml量瓶中，加0.5%醋酸镁-甲醇溶液至刻度，作为对照品溶液。2.2 样品的前处理将虎杖经过干燥，采用微型植物试样粉碎机进行粉碎，过60目筛，粉末经恒温（60)干燥24 h后，放干燥器中，备用。2.3 供试品溶液的制备2.3.1 回流提取液的制备精密称取2.2项下样品约0.5 g，置50 ml的圆底烧瓶中，加70%的乙醇回流提取3次，提取时间分别为1.5，1，1

11、 h，乙醇用量分别为20，15，15 ml，合并3次回流提取液，定容至100 ml的容量瓶中，备用。2.3.2 索氏提取液的制备精密称取2.2项下样品约0.5 g，采用70%乙醇进行索氏提取，提取至无颜色为止（约6 h），提取液定容至100 ml的容量瓶中，备用。2.3.3 超声提取液的制备精密称取2.2项下样品约0.5 g，置50 ml的三角瓶中，70%的乙醇超声提取3次，3 min/次（辐射时间为10 s/次，间隙10 s，工作18次），乙醇用量分别为20，15 ，15 ml。合并3次的超声提取液，定容置100 ml的容量瓶中，备用。2.3.4 微波提取液的制备精密称取2.2项下样品约0.

12、5 g，置50 ml的三角瓶中，70%的乙醇微波提取，提取3次，1 min/次，（工作时间为10 s/次，间隙60 s，工作6次），乙醇用量分别为20，15，15 ml。合并3次的微波提取液，定容置100 ml的容量瓶中备用。2.4 蒽醌百分含量的测定2.4.1 游离蒽醌百分含量的测定分别精密吸取2.3项下各供试品溶液10 ml，水浴上蒸干，再加20 ml蒸馏水溶解，加氯仿萃取3次（20，15，15 ml），合并3次氯仿萃取液，定容至50 ml的容量瓶中，精密吸取15 ml，水浴上蒸去氯仿，残渣用0.5%醋酸镁-甲醇溶液溶解，定容至10 ml的容量瓶中，摇匀，放置20 min。以0.5% 醋酸

13、镁-甲醇溶液为空白，测定其在510 nm处吸光度值。2.4.2 总蒽醌百分含量的测定分别精密吸取2.3项下各供试品溶液10 ml，水浴上蒸干，加2.5 mol/L的硫酸20 ml水解2 h，稍冷，加氯仿20 ml继续水解2h。放置至室温后，转移至分液漏斗内，并用氯仿洗涤烧瓶，并入分液漏斗中，分取氯仿层置100 ml的容量瓶中，酸水层继续用氯仿萃取3次（20，15 ，15 ml），并入上述100 ml的容量瓶中，精密吸取30 ml，蒸馏水洗至中性，置水浴上挥干氯仿层，残渣用0.5%醋酸镁-甲醇溶液溶解，定容至10 ml的容量瓶中，摇匀，放置20 min。以0.5%醋酸镁-甲醇溶液为空白，测定其在510 nm处吸光度值。2.5 抗氧化活性的测定2.5.1 总抗氧化能力的测定5取2.3项下各供试品溶液，适当稀释后移液器取100 l，加入FRAP工作液（300m mol/L醋酸盐缓冲液，10 m mol/LTPTZ，20m mol/LFeCL3）3ml，混匀反应20 min，于593 nm处读取吸收度，以FeSO4为标准物质绘制标准曲线，样品的抗氧化能力以FRAP值表示：1FRAP单位