麦冬注射液抗衰老作用机制的实验研究

1、麦冬注射液抗衰老作用机制的实验研究刘杰书( 湖北民族学院医学院 恩施 445000 )摘要目的: 探讨最常用的抗衰老中药之一麦冬的延缓衰老的作用机理，观察和分析麦冬注射液对快速老化大鼠学习记忆及血、肝、肾、海马、脑皮质抗氧化酶SOD、GSH-PX表达的影响。方法: 雄性Wistar大鼠30只，随机分为对照组、模型组和实验组。除对照组外，其余大鼠均用氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)建立痴呆病(Alzheimer Disease，AD)动物模型，实验组同时腹腔注射麦冬注射液。观察各组大鼠行为学变化，测定各组大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-

2、PX)含量。结果: 与对照组和模型组比较，麦冬注射液对大鼠学习记忆功能无明显影响，但使大鼠多种组织SOD、GSH-PX显著升高，差异有非常显著性意义(P<0.001)。结论：麦冬确有提高抗氧化酶表达的作用，能促进抗氧化酶功能、抵抗氧自由基对细胞的损伤,说明麦冬可以有效的改善老人的嗜血栓状态，促进气血运行，改善微循环来抗衰老。关键词：麦冬 氟哌啶醇 抗氧化酶 SOD GSH-PX 抗衰老The experimental research on mechanism of slowing death of dwarf injection.LJU jieshuHubei Institute of

3、 Nationality school of Medicine.Enshi.Hubei.China.445000,Summary Objective: To study the mechanism and function of dwarf a kind material of traditional Chinese, to be used to slow death ; Observe and analyze the effect of injection of dwarf lilyturf tuber on the learning and remembering and on the e

4、xpression of superoxide dismutase (SOD) and glutathione peroxidase (GSH-PX) in serum, liver, kidney, hippocampus, cortex of rapid aging rat. Methods: 30 male Wistar rats were divided into contrast, model and experimental groups. Except contrast, all rats were set animal model of Alzheimer Disease by

5、 lilyturf tuber; the experimental ones were injected dwarf injection to stomach Rat model of acquired remembering deficiency induced with haloperidol was made. Electricity-stimulated jumping stand was used for observation on rat behavior change and meanwhile concentrations of SOD and GSH-PX in diffe

6、rent organs or tissues of the animals were detected. The changed rule and the relationship between different groups in dwarf lilyturf tuber treated animal experiments were analyzed. Results: In contrast with controls and groups each other, concentrations of SOD and GSH-PX strikingly increased in the

7、 drug-treated groups. The differences were statistically significant (P<0.001). Conclusion: Dwarf lilyturf tuber can be in up-regulating expression of the anti-oxidation, improve the old persons condition of philo-thrombosis effectively ,vital energy in motion renders blood circulatory normally,

8、and tiny circulatory system of body, suggesting that the efficacy of dwarf lilyturf tuber in improvement of lot of disorders probably be associated with enhancing of expression of anti-oxidation against damages of oxygen free radicals to cells.Key words: dwarf Haloperidol anti-oxidation SOD GSH-PX s

9、low death作者简介：刘杰书（1963），男，湖北建始人，现任湖北民族学院医学院副教授、副主任药师，主要从事民族医药开发与应用的研究。 E-mail: 麦冬原名麦门冬，始载于神农本草经，为百合科植物麦冬(Ophiopogon japonicus (L.F.) KerGawl )的干燥块根。为中医传统常用抗衰老中药之一，其味甘、微苦，性寒，归心、肺、胃经，具有养阴润肺、益胃生津、清心除烦等功效。临床常用于治疗肺阴不足的干咳痰粘、痨热咳嗽，胃阴虚的津伤口喝，心阴虚的心烦不眠等证1。国内外研究表明，麦冬含有主要化学成份为甾体皂苷、高异黄酮类、多糖、氨基酸等2。近代医学和药理学研究发现，麦冬具有

10、多种药效功能，主要表现为对中医“血瘀”证的内皮细胞的保护作用；保护心肌缺血和心肌梗塞；免疫调节作用；抗衰老作用；降低血糖作用；抗肿瘤作用；抗血栓及血液流变学改变及其它方面的作用3。麦冬水提物（3g/kg.d-1）能明显降低D半乳糖衰老模型大鼠脑中MDA含量，拮抗自由基对生物膜的脂质过氧化损伤，从而发挥抗衰延寿的作用4。另外麦冬可以降低全血高切黏度、低切黏度、血浆黏度等作用，增加血液循环来抗衰老5。本文采用麦冬注射液作实验动物腹腔注射，由于氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)制作帕金森氏病动物模型是目前最准确可靠的，是进行老年痴呆病研究中首选的动物模型6，因此本实验通过电跳台行为学训练选择

11、合格大鼠，与这种Hal诱导动物老化模型作对照，观察其行为学的变化，分析麦冬对抗Hal.僵住症的效果，并通过对血液和组织SOD、GSH-PX的含量测定，进一步研究麦冬对抗氧化酶是否产生影响，从而探讨其延缓衰老的作用机制。1 材料与方法1.1麦冬注射液制备麦冬采自湖北恩施自治州利川县植物麦冬的块根，洗净干燥后粉碎成粗末,由湖北省“施恩堂”药厂采用水提醇沉法制成相当于含生药1.0g/ml的注射液(供试验用)，瓶装密封消毒备用。1.2药品及实验仪器Hal.注射液（湖南洞庭药业股份有限公司生产,国药准字H43020555,1ml:5mgTM），SOD、GSH-PX试剂盒（南京建成生物工程研究所生产，批号

12、:20041228），回避反应箱（华中科技大学同济医学院病理生理实验室提供），GL-20G II型高速低温离心机，UV-2450分光光度仪，水溶箱。1.3实验分组雄性Wistar大鼠30只，鼠龄40-50w，体重300-350g，华中科技大学同济医学院动物中心提供。随机分为对照组：生理盐水10 只；模型组：Hal.10 只；实验组：麦冬注射液+Hal.10 只。1.4电跳台行为学训练分组实验装置为30cm×30cm回避反应箱，箱底为铜栅，可通刺激电流。另有一高5cm、顶端直径为5cm的橡胶圆台作避电击平台，固定放置在箱内一角的铜栅上，大鼠可在圆台上停留以回避电击。实验开始后，先将大鼠

13、轻放于电跳台箱内，使其适应3-5min，以消除探究反应。尔后底部铜栅通电（36V）2s，大鼠在受电击刺激中逐渐学会跳上平台回避电击。多数大鼠能再次或多次跳至铜栅上，受到电击后又重新跳回平台，如此训练3min，并记录每只大鼠受电击次数和不跳上平台的犯错次数，以此作为学习成绩。如此持续3d，。剔除犯错次数在2次以上的大鼠，将犯错次数为01的大鼠作为合格大鼠，然后均分至各实验组。1.5给药途径和剂量实验动物在行为学训练结束后，除对照组外，模型组和实验组均按大鼠体重0.001ml/g腹腔注射Hal.注射液6，持续3d。尔后实验组在继续Bid腹腔注射Hal.注射液0.001ml/g的同时，再按大鼠体重B

14、id腹腔注射0.0006ml/g麦冬注射液(麦冬原生药人体常用量10-30g,注射液常用量30ml,按50kg/人计算,相当于0.0006ml/g)，持续4d。对照组每天等量Bid腹腔注射生理盐水，持续4d。1.6电跳台行为学测试实验装置为30cm×30cm回避反应箱，取三组30只注射后的大鼠，进行电跳台行为学测试，方法同上。1.7 组织SOD、GSH-PX测定电跳台行为学测试实验结束后，断颈处死各组动物，迅速取血及肝、肾、海马、脑皮质。血液离心取血清、组织制成10%匀浆，备用。SOD、GSH-PX测定：按试剂盒说明书进行。蛋白定量采用双缩脲法测定。1.8统计学方法所有结果用SPSS

15、统计软件进行统计学处理，计量资料用均数加减标准差表示，在对数据进行分析的过程中，发现个别数据不符合ANOVAO比较的要求，则采用非参法进行比较分析。2 结果与分析 2.1电跳台行为学分析从表1可见：实验组与模型组比较差异显著，说明模型组学习记忆能力显著下降，与对照组比较差异不明显，说明实验组学习记忆能力维持正常，能有效对抗Hal.僵住症。表1 各组行为学测试结果比较 ( n=10 )Tab I comparative result of each group on Statistics ( n=10 ) 3min内犯错记录组别 0次 % 1次 % 2次 % 2次以上 %对照组 7 70 3 3

16、0 0 0 0 0 模型组 0 0 0 0 0 0 10 100实验组 8 80 1 10 1 10 0 02.2 SOD、GSH-PX测试从表2、表3可见：麦冬注射液能显著提高大鼠血、肝、肾、海马、脑皮质SOD、GSH-PX的含量，说明麦冬确有提高抗氧化酶表达的作用。实验组海马、脑皮质GSH-PX表达值，与对照组和模型组比较，说明麦冬在脑组织中增强GSH-PX表达上作用更强。 表2 各组SOD结果比较 ( x±s, n=10)Tab comparative result of SOD for each group ( x±s, n=10)组别 血 肝 肾 海马 脑皮质 对

17、照组 3.29±0.63 3.52±0.14 2.79±0.42 5.650±1.29 4.43±0.61 模型组 0.38±0.03 1.99±1.06 0.29±0.05 1.54±0.31 1.68±0.42实验组 13.11±1.75 7.85±0.97* 3.60±0.60 20.84±2.12 13.82±3.00实验组分别与对照组和模型组相应组织比较：P<0.05，* P<0.01，P<0.001。The expe

18、rimental group compared with the control, and model groups on relative organs P<0.05，* P<0.01，P<0.001。表3 各组GSH-PX结果比较 ( x±s, n=10 )Tab comparative result of GSH-PX for each group ( x±s, n=10 )组别 血 肝 肾 海马 脑皮质 对照组 3.62±0.26 6.11±2.01 4.91±0.82 16.±1.73 27.90±

19、;6.11 模型组 1.30±0.31 2.16±1.10 1.41±0.27 1.74±0.20 1.95±0.45实验组 6.70±0.80* 8.07±1.16* 6.41±1.03* 30.41±3.54 45.62±7.02 实验组分别与对照组和模型组相应组织比较：* P<0.01，P<0.001。The experimental group compared with the control, and model groups on relative organs * P

20、<0.01，P<0.001。3 讨论随着老年社会的到来，人们对抗衰老的研究越来越重视。中医理论有肾虚致衰、脾胃虚弱致衰、气滞血瘀致衰等几种学说，其中由瘀致衰学说认为：人体是一种耗散结构，是在与外部环境不断进行物质能量交换过程中保持自身稳定的系统。老年人存在着血液循环和微循环障碍，呈现一种嗜血栓状态，瘀血产生后，气血运行受阻，脏腑得不到正常濡养，气化功能受损，毒害机体，从而形成恶性循环，加速衰老7。现代医学证实，衰老是机体各种生化反应的综合表现，是体内外许多因素（环境污染、精神紧张、遗传等）共同作用的结果。早在1956年，由Denham Harman提出的“氧化自由基学说”是目前比较

21、公认的的致衰学说之一，该理论认为，机体在有氧物质代谢过程中（细胞线粒体的呼吸氧化代谢过程），不断产生氧自由基（oxygen free radicals），同时又具有有效的自由基清除系统（如SOD和GSH-PX等抗氧化酶），以对抗和消除氧自由基的损伤，使体内氧自由基维持在正常水平8。老年人随着年龄的增长,这种平衡逐渐被破坏，造成自由基过剩，过量的氧自由基通过氧化作用攻击细胞膜及DNA、蛋白质和酶类大分子，引起细胞膜上的不饱和脂肪酸产生脂质过氧化反应，DNA及蛋白质分子交联，DNA基因突变或复制异常及生物酶活力下降，最终到致细胞功能严重受损以至衰老、死亡。这表明氧自由基与机体各组织、器官的老化和多

22、种慢性疾病的发生密切相关9，10、11。寻求改善自由基抗氧化平衡的药物成为延缓衰老和防治多种慢性疾病的重要方向12。麦冬是传统的延年益寿中药，本经载为“久服轻身，不饥不老”。本草正义载为“补胃阴、滋津液，本是甘药补益之上品”。有的学者用累积计分法统计的100首益寿方剂，积分最高的是肉桂与麦冬，这说明麦冬是最常用的抗衰老中药之一13，因此观察麦冬缓解Hal.僵住症，研究麦冬与SOD、GSH-PX的关系，对解释麦冬治疗老年痴呆的作用机制具有重要的理论意义和实践意义。本实验通过对Hal.诱导动物老化模型的行为学观察，表明麦冬能有效缓解大鼠的Hal.僵住症。通过探讨麦冬在大鼠不同组织对SOD、GSH-

23、PX表达量的影响，结果表明：麦冬注射液能提高实验组血、肝、肾、海马、脑皮质SOD、GSH-PX的含量，而未用麦冬注射液的对照组和模型组SOD、GSH-PX含量则降低，二者比较在多数组织差异有非常显著性意义（P<0.001）。由此说明，麦冬确有提高抗氧化酶表达的作用，具有很强的抗氧化作用。从而可以认为，麦冬作为常用的补阴药物，除其它方面作用外，与之能提升抗氧化酶作用也很有关。说明麦冬可以有效的改善老人的嗜血栓状态，促进气血运行，改善微循环，是有效的治疗老年痴呆的药物。此外，对照组和模型组之间，SOD、GSH-PX表达值的差异有显著性意义（P<0.05），提示Hal.对SOD和GSH-

24、PX有抑制作用，是很好的动物老化造模剂。然而，在实验动物行为学测试中，对照组和实验组学习记忆改变没有显著差异，其原因可能与用药时间与测试时间相隔较短有关。别外，麦冬注射液的制备还有待进一步研究提纯，以减少注射液的每次使用量。参考文献1 雷载权（主编）.中药学M，上海，上海科学技术出版社.2001，307.2 林晓,周强峰,徐德生.麦冬药理研究进展J.上海中医药杂志.2004，38（6）:59-61.3 蒋风荣,张旭, 范俊等. 麦冬药理作用研究进展J.中医药学刊.2006，24（2）:236-237.4 陶站华,白书阁,白晶, 麦冬对D半乳糖衰老模型大鼠的抗衰老作用研究J黑龙江医药科学. 1999，22（4）:36.5郭晶,陈非,李丽