食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析_鞠长燕

1、·论著 ·食物中毒中不同血清型副溶血性弧菌基因特征分析鞠 长 燕 , 黄 锐敏 ,段永 翔 , 俞慕 华 【 摘要 】 目的对 2起 食 物 中 毒 中 不 同 血清 型 的 副 溶 血 性 弧菌 进行 基 因 特征 分析 。 方法第1起 食 物 中 毒 发 生 在 2010年 5月 17日深圳 市 某 食 堂 , 感 染 人 数 20人 左右 , 采 集 到 病人 肛拭子 9份 , 可 疑 食 品 3份 , 每 份样 本 挑 取 20个可 疑菌落 ; 第 2起 食 物 中 毒 发 生 在 2010年 7月 1日深圳 市 某 配 餐 中 心 , 感 染 人 数 10人 左右

2、 , 采 集 到 病人 肛拭子 7份 , 可 疑 食 品 2份 , 涂抹 样 3份 , 每 份样 本 挑 取 10个可 疑菌落 。 对 可 疑菌落 分别 进行 盐 耐受试 验 、 生 化 试 验 和 血清 学 鉴 定 。 从 2起 食 物 中 毒 的 每 份样 本 中 挑 取 不 同 血清 型 进行 tdh 、trh 、 GS-PC、 orf 8基 因 检测 和 脉冲场凝胶电泳 分析 (PFGE 。 结果 第 1起 食 物 中 毒 分 离 到副 溶 血 性 弧菌 180株 , 其中 O3:K6107株 , O2:K2870株 , O4:K34、 O3:K25、 O4:K12各 1株 ; 第 2

3、起 食 物 中 毒 分 离 到副 溶 血 性 弧菌 80株 , 其中 O3:K644株 , O4:K8、 O11:K36、 O11:K19各 10株 , O1:K566株 。 O3:K6、 O1:K56、 O4:K8、 O11:K36携带 tdh 基 因 , 不 携带 trh 基 因 , 其他 血清 型 (O2:K28,O4:K12, O3:K25, O4:K34, O11:K19 均不 携带 tdh 和 trh 基 因 。 O3:K6和 O11:K362种血清 型 的 GS-PC和 orf 8基 因 阳 性 , 其他 血清 型 阴 性 。 PFGE 结果显示 第 1起 食 物 中 毒 中食

4、品 和病人 肛拭 分 离 的 O2:K28(分别 3、 2株 的 PFGE 带 型 基 本 一 致 , 属 高 度 相 关 菌株 。 第 2起 食 物 中 毒 中病人 肛拭 分 离 的 4株 O3:K6与 卤鸡 蛋 盘涂抹 样 分 离 的 1株 O3:K6PFGE 带 型一 致 。 2起 食 物 中 毒 的 O3:K6带 型 基 本 一 致 。 来 自 相 同 样 本 不 同 血清 型 的 副 溶 血 性 弧菌 的 PFGE 带 型不 一 致 。 结论第 1起 食 物 中 毒 与食用 污 染 了 副 溶 血 性 弧菌 的食 品 有 关 , 第 2起 食 物 中 毒 与 污 染 了 副溶 血 性

5、 弧菌 的 卤鸡 蛋 盘 有 关 。 通 过 血清 分型 和 分 子 生 物 学 分析 , 可 认 为 相 同 样 本 中 分 离 的 不 同 血 清 型 副 溶 血 性 弧菌 未 发现 遗传 学 证 据 , 为 遗传 不相 关 菌株 。【 关键词 】 副 溶 血 性 弧菌 ; 食 物 中 毒 ;脉冲场凝胶电泳中图分类号 :155.31文献标识码 :A文章编号 :16715039(2014 03022906DOI :1013217/jscjpm20140229基金项目 :深圳市南山区科技计划项目 (2012057作者单位 :深圳市南山区疾病预防控制中心 , 广东 深圳 518054作者简介 :

6、鞠长燕 (1982 , 女 , 硕士研究生 , 主管技师 , 主要从事微生物检验工作 通讯作者 :俞慕华 , E-mail :yumuhuavip163com Genetic characterization of different serotypes of Vibrio parahaemolyticus isolated from food poison-ing casesJU Chang-yan , HUANG ui-min , DUAN Yong-xiang , YU Mu-huaShenzhen Nanshan Centerfor Disease Control and Preven

7、tion , Shenzhen 518054, China【 Abstract 】 ObjectiveTo analyze the genetic characteristics of different serotypes of Vibrio parah-aemolyticus (Vp isolated from two food poisoning outbreaksMethodsThe first outbreak occurred in thecanteen of an electronic company in Shenzhen on May 17, 2010About 20peop

8、le were infectedNine anal swabs from patients and 3suspicious food samples were collectedTwenty suspicious colonies were selected for each sample after cultureThe second outbreak occurred in a catering center in Shenzhen on July 1, 2010About 10persons were infectedSeven anal swabs from patients , 2s

9、uspicious food and 3tray swabs samples were collectedTen suspicious colonies were selected for each sample after cultureEach suspi-cious colony was identified using salt tolerance test , biochemical test , and serotypingDifferent serotyping isolates were collected from both outbreaks , and character

10、ized by tdh , trh , GS-PC, orf 8gene detection and pulsed field gel electrophoresis (PFGE analysisesultsOne hundred and eighty Vp isolates were·922·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40,No.3collected from the first outbreak , of which , 107isolates were serotype O3:K6, 70were

11、 O2:K28, 1was O4:K34, 1was O3:K25, and 1was O4:K12Eighty Vp isolates were collected from the 2nd outbreak , of which , 44isolates were serotype O3:K6, 10were O4:K8, 10was O11:K36, 10was O11:K19and 6were O1:K56All isolates of O3:K6, O1:K56, O4:K8, O11:K36were positive for tdh , while negative for trh

12、 gene detectionThe other isolates of O2:K28, O4:K12, O3:K25, O4:K34, and O11:K19were negative for both genesThe isolates of O3:K6and O11:K36showed positive for both GS-PCand orf 8gene detec-tion , while all the other isolates were negative for serotypesPFGE analysis indicated that the PFGE pattern o

13、f 2isolates (O2:K28 from patients were identical with 3isolates (O2:K28 from food in the first out-break , and 4isolates (O3:K6 from patients were identical with 1isolate (O3:K6 from egg tray swab in the second outbreakPFGE patterns of isolates of O3:K6from both outbreaks were identicalVp isolates f

14、rom the same sample with different serotypes were unrelatedConclusion The first food poisoning out-break was related to food contaminated by Vp and the second outbreak was related to egg tray contaminated by VpThe serotyping and genetic data suggests that Vp with different serotypes from the same sa

15、mple be-long to different clonal complex , and are unrelated isolates in genetics【 Key words 】 Vibrio parahaemolyticus ; Food poisoning ; Pulsed field gel electrophoresis副溶血性弧菌 (Vibrio parahaemolyticus , Vp 广 泛存在于海水 、 鱼虾等海产品以及被污染的食品 、 外 环境中 , 嗜盐 , 生长受温度影响较大 。 副溶血性弧菌 是导致人类急性胃肠炎的重要病原菌 , 尤其在沿海 地带 , 它是细

16、菌性食物中毒的重要病原菌 1。 以往食物中毒检测时存在着同 1份病例或食品 样本中分离到的副溶血性弧菌往往有几个血清型的 状况 , 但这些血清型之间是否存在遗传相关性 , 是否 属于同 一 克 隆 组 (clone complex , 目 前 较 少 资 料 报道 。1996年后 O3:K6在全世界范围内流行 , 并出现 了 O4:K68、 O1:K25、 O1:KUT 等 脉 冲 场 凝 胶 电 泳 (PFGE 图 谱 与 O3:K6十 分 接 近 的 菌 株 , 形 成 了 O3:K6克隆群 , 被称为大流行株 (pandemic strain , 与 1996年以前的 O3:K6菌株在

17、toxS 基因上有 7个碱基的不同 , 根据这一不同 , GS-PC方法被创 建起来 , 用于区分新旧 O3:K6克隆群 2。 orf 8可能 编码 1种粘附蛋白 , 能增加副溶血性弧菌粘附于人 类肠道细胞的能力或增加了其粘附于海生植物表面 的能力 , 也是大流行株的判断标志之一 3。副溶血性弧菌临床分离株多数可产生 1种耐热 直接溶血素 (TDH , 可以裂解我妻氏血平板上的红 细胞 , 产生溶血环 , 是目前所知的副溶血性弧菌主要 的毒力因子 , 另外一种 TDH 相关溶血素 TH被认 为与脲酶的产生有关 , 也被认为是副溶血性弧菌的 毒力因子之一 。 资料显示 4, 多数临床分离株携带

18、tdh 基因 , 不携带 trh 基因 。本文从血清学分型 、 毒力基因携带情况 (tdh 和 trh 基因 、 大流行株判断 (GS-PC和 orf 8基因阳 性 、 PFGE 分型等多方面分析 56, 对 2起食物中毒 中相同样本不同血清型的副溶血性弧菌进行基因特 征分析 。1材料和方法1. 1材料1. 1. 1菌 种 来源 沙门菌 H9812, 作为 PFGE 的分 子量标准 , 由中国疾病预防控制中心传染病所惠赠 。 1. 1. 2主 要 试 剂 副溶血性弧菌琼脂 (上海市疾病 预防控制中心 , 副溶血性弧菌诊断血清 (日本生研 株式会社 , SeaKem Gold Agarose (

19、美国 Cambrex Bio Science ockland , Xba I 、 Not I 限制性内切酶 (大连 宝生物公司 , 蛋白酶 K (上海生工 , 一步法 PC试 剂盒 (上海生工 。1. 1. 3主 要 仪器 及 分析 软 件 VITEK DENSICHEK 浊度仪 (法国 BioMérieux公司 , 恒温水浴摇床 (英 国 GANT公司 , 脉冲场凝胶电泳仪 (美国 Bio-ad CHEF Mapper , 凝 胶 成 像 系 统 (美 国 Bio-ad公 司 , BioNumerics 图像分析软件 (比利时 。1. 2方法1. 2. 1副 溶 血 性 弧菌 分

20、离 鉴 定 第 1起食物中毒 发生在 2010年 5月 17日深圳市南山区某电子有限 公司食堂 , 员工用餐后发生腹泻 、 腹痛症状 , 感染人 数有 20人左右 , 采集到病人肛拭子 9份 , 可疑食品 3份 , 按照 GB /T4789. 7 2008食品卫生微生物学检 验 副溶血性弧菌检验的要求 , 分别接种 3%NaCl 碱 性胨水 , 37 培养 18h , 划线副溶血性弧菌琼脂 , 37 培养 24h , 每个平板上挑取 20个可疑菌落 , 进 行盐耐受试验 、 生化试验和血清学鉴定 。 第 2起食 物中毒发生在 2010年 7月 1日深圳市南山区某配 餐中心 , 客人用餐后发生腹

21、泻 、 腹痛症状 , 感染人数·032·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40, No.3有 10人左右 , 采集到病人肛拭子 7份 , 可疑食品 2份 , 涂抹样 3份 , 经过上述相同的步骤 , 每个平板上 挑取 10个可疑菌落 。1. 2. 2毒 力 基 因 检测 参考文献 7进行 。 每份 样本挑选不同血清型的菌株各 1株 , 水煮法提取 DNA , 采用多重 PC扩增 tdh 和 trh 基因 。 引物见 表 1。1. 2. 3GS-PC和 orf 8基 因 检测 参考文献 8进 行 。 采用 1.

22、2. 2中提取的 DNA , 进行以下试验 。 GS-PC在 25L 反应体系中进行 :5LDNA , 12. 5L 2 PC缓冲液 , 引物各 0. 25L (10mmol /L , 以及 7L 灭菌蒸馏水 。 反应条件 :96 预变性 5min , 96 变性 1min , 45 复性 2min , 72 延伸 3min , 25个循环 , 最后延伸 72 7min 。 引物见表 1。表 1本试验中采用的引物序列目的基因 引物序列 (5'-3' 扩增片段大小 (bp tdh GTAAAGGTCTCTGACTTTTGGACTGGAATAGAACCTTCATCTTCACC269

23、trh TTGGCTTCGATATTTTCAGTATCTCATAACAAACATATGCCCATTTCCG500GS-PCTAATGAGGTAGAAACAACGTAACGGGCCTACA651orf 8GTTCGCATACAGTTGAGGAAGTACAGCAGGAGTGAG7001. 2. 4PFGE 参考文献 9进行 。 从 2起食物中 毒中挑取代表菌株 , 每份样本的每种血清型至少 1株 , 进行 PFGE 。 采用 40U 限制性内切酶 Not I 于 37 酶切 4h 。 H9812用 Xba I 50U 37 酶切 2h 作为分子量标准 。 电泳参数 :电压 6V /cm, 电场夹

24、角 120 , 起始转换时间 10s , 终末转换时间 35s , 电 泳 18h 。 用凝胶成像软件 Quantity one-4. 4. 0获取 图像 , BioNumerics 4. 0分析图像 , 聚类分析采用非加 权组平均法 (unweighted pair group method with aver-ages , UPGMA 方法和 Dice 系数 , 按 tolerance 1. 5%, optimization 1. 5%绘制聚类图 。2结果2. 1菌株分离情况 第 1起食物中毒共采集到 12份样本 , 经过分离培养 , 每份样本挑取 20个可疑菌 落 , 共挑取 240个可

25、疑菌落进行生化和血清学鉴定 , 副溶血性弧菌和非副溶血性弧菌分别为 180和 60株 , 其 中 O3:K6107株 , O2:K2870株 , O4:K34、 O3:K25、 O4:K12各 1株 , 见表 2。 表 2第 1起食物中毒分离到的副溶血性弧菌血清型分布 (株 来源(样本编号 不同血清型的副溶血性弧菌菌落数O3:K6O2:K28O4:K34O3:K25O4:K12非副溶血 性弧菌菌 落数 a第 2起食物中毒共采集到 12份样本 , 经过分离 培养 , 每份样本挑取 10个可疑菌落 , 共挑取 120个 可疑菌落进行生化和血清学鉴定 , 其中副溶血性弧 菌 80株 , 其 中 O3

26、:K644株 , O4:K8、 O11:K36、 O11:K19各 10株 , O1:K566株 , 非副溶血性弧菌 40株 , 见表 3。2. 2tdh 和 trh 基因携带情况 第 1起食物中毒 中 , 11份样本中挑出 17株菌进行毒力基因检测 , 分 别是 8株 O3:K6、 6株 O2:K28、 1株 O4:K34、 1株 O3:K25、 1株 O4:K12, 结果显示 , 8株 O3:K6携带 tdh 基因 , 不携带 trh 基因 , 其他血清型 tdh 和 trh 基 因都不携带 , 见图 1。 第 2起食物中毒中 , 8份样本 中挑出 10株 菌 进 行 毒 力 基 因 检

27、测 , 分 别 是 5株 O3:K6、 2株 O1:K56、 1株 O4:K8、 1株 O11:K36、 1株 O11:K19, 结果显示 , 除 O11:K19不携带 tdh 和 trh 基因外 , 其他 9株菌都携带 tdh 基因 , 不携带 trh 基因 , 见图 2。2. 3GS-PC和 orf 8基因携带情况 第 1起食物 中毒中 , 8株 O3:K6GS-PC和 orf 8基因阳性 , 其他 血清型 GS-PC和 orf 8基因阴性 (图 1 。 第 2起食 物中毒中 , 5株 O3:K6和 1株 O11:K36GS-PC和 orf 8基因阳性 , 其他血清型 GS-PC和 orf

28、 8基因阴 性 (图 2 。2. 4PFGE 结果2. 4. 1第 1起 食 物 中 毒 的 PFGE 结果 第 1起食 物中 毒 中 , 3份 食 品 样 和 3份 肛 拭 子 均 分 离 到 O2:K28, PFGE 显 示 , 其 中 5株 O2:K28的 带 型 一 ·132·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40, No.3致 ,1株 O2:K28(1103 的带型与其他 5株不一 致 。 8份肛拭子中都分离到 O3:K6,PFGE 带型一 致 , O3:K6与 O2:K28、O4:K12、 O3:K

29、25的带型均 不一致 , 见图 1。 其中 O4:K34由于复苏时污染 , 未做 PFGE 。表 3第 2起食物中毒分离到的副溶血性弧菌血清型分布 (株 来源 (样本编号 不同血清型的副溶血性弧菌菌落数O3:K6O4:K8O1:K56O11:K36O11:K19非副溶血性 弧菌菌落数 a总计 卤鸡蛋 (21 000010010卤鸡腿汁 (22 000001010罗鸡腿汁涂抹样 (23 000001010切鸡蛋刀涂抹样 (24 000001010卤鸡蛋盘涂抹样 (25 70300010病人肛拭子 (26 7310病人肛拭子 (27 1010病人肛拭子 (28 1010病人肛拭子 (29 1010

30、病人肛拭子 (210 1010病人肛拭子 (211 1010病人肛拭子 (212 1010合计44106101040120注 :a 非 副 溶 血 性 弧菌 是 通 过 盐 耐受试 验 、生 化 试 验 和 血清 学 鉴 定 排 除副 溶 血 性 弧菌 的 可能 , 为 未 检出 注 :菌株编号 为食 物 中 毒号 、样 本 号 和 可 疑菌落号 的 组 合 , 如 上 图 中 197为 第 1起 食 物 中 毒 中 第 9号 病人 肛拭子 中 挑 取 的 第 7个可 疑菌落图 1第 1起食物中毒中分离的副溶血性弧菌的 PFGE 聚类分析图2. 4. 2第 2起 食 物 中 毒 的 PFGE

31、结果 第 2起食物中毒中 ,4份肛拭子和 1份涂抹样中分离到 O3:K6, PFGE 带型一致 , 涂抹样分离的 O1:K56(252 与肛拭子分离的 O1:K56(262 有 1条带的差异 , 属高度相关菌株 , 肛拭子中分离到的 O11:K36(2121 与 O3:K6有 4条带的差异 。 O4:K8、 O11:K19的带型与 O3:K6有 7条以上条带差异 。见图 2。2. 4. 32起 食 物 中 毒 中 O3:K6的 PFGE 结果 2起 食物中毒中共有 13个样品检出 O3:K6, 每个样品取 1株 O3:K6进行 PFGE , 发现 13株 O3:K6的 PFGE 带型基本一致

32、, 只有 145比其他菌株多 1条带 , 属于高度相关菌株 。 见图 3。·232·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40,No.3 注 :菌株编号 为食 物 中 毒号 、样 本 号 和 可 疑菌落号 的 组 合 , 如 上 图 中 252为 第 2起 食 物 中 毒 中 第 5号卤鸡 蛋 盘涂抹 样 挑 取 的 第 2个可 疑菌落图 2第 2起食物中毒中分离的副溶血性弧菌的 PFGE 聚类分析图注 :菌株编号原则 同 图 1和 图 2图 32起食物中毒中分离的副溶血性弧菌 O3:K6的 PFGE 聚类分析图3

33、讨论本研究中同 1份食品样本最多分离到 3种血清型的副溶血性弧菌 , 同 1份肛拭中最多分离到 2种 血清型 , 说明副溶血性弧菌是多血清型混合存在于 食品和感染者身上 , 如果仅挑取 1个可疑菌落容易 造成漏检 。 以第 1起食物中毒为例 , 共有 17个不同 的血清型 (不同样本中血清型个数相加 , 如果每份 标本仅挑取 1个可疑菌落 , 将分离到 11个血清型 , 血清型漏检率 35. 3%(6/17 , 以此类推 ,如果每份 标本分别挑取 2、 3、 4、 5个可疑菌落 , 将分离到 11、 13、 14、 16个血清型 , 血清型漏检率分别为 35. 3%(6/17 、 23. 5%

34、(4/17 、 17. 6%(3/17 、 5. 8%(1/17 , 只有每份标本挑取 12个可疑菌落 , 才能分 离到目前已知的所有血清型 , 综合成本 -效益分析 , 本研究认为每份样本可以考虑挑取 5个可疑菌落 。本研究发现 , 副溶血性弧菌是多血清型混合存 在于食品和感染者身上 , 那么 , 相同样本中分离的不 同血清副溶血性弧菌是否有遗传关系 , 其遗传特征 是否一致 ? 现对基因特征分析如下 。第 1起食物中毒中 ,3份肛拭子中 (18, 19, 110 同时检 出 O3:K6和 O2:K28。 结 果 显 示 , O3:K6携带 tdh 基因 , 不携带 trh 基因 , GS-

35、PC和 orf 8基因阳性 , 属大流行株 , O2:K28不携带 tdh 和 trh基因 , GS-PC和 orf 8基因阴性 , 不属于大流行株 。 PFGE 显示 O3:K6和 O2:K28有 7个以上条带变化 , 根据 Tenovar 原则 10,O3:K6和 O2:K28为遗传 不相关菌株 。 水煮鱼 (13 分离到 3种血清型的 副溶血性弧菌 , O2:K28, O3:K25和 O4:K12, 它们不携带 tdh 和 trh 毒力基因 ,GS-PC和 orf 8基因阴 性 ,PFGE 显示 , 3种不同血清型的菌株有 7个条带 以上的变化 , 为遗传不相关菌株 。 第 2起食物中毒

36、中 , 餐盘涂抹样 (25 和肛拭 子 (26 都 检 出 O3:K6和 O1:K56, O3:K6和 O1:K56都携带 tdh 基因 , 不携带 trh 基因 , 但 O3:K6的 GS-PC和 orf 8基因阳性 , 属大流行株 , O1:K56的 GS-PC和 orf 8基因阴性 , 不属于大流行株 , PF-GE 显示 O3:K6和 O1:K56有 7个以上条带变化 , 为 遗传不相关菌株 。就本次研究显示 , 来自相同样本不同血清型的·332·20146403South China J Prev Med , June 2014, Vol. 40,No.3

37、3; 234· 华南预防医学 2014 年 6 月第 40 卷第 3 期 No.3 South China J Prev Med ， June 2014 ， Vol. 40 ， 副溶血性弧菌属于不同克隆， 为遗传不相关菌株。 1 2、 1 3） 和 第 1 起食物中毒中， 食品 （ 1 1 、 1 9、 1 10 ） 中都分离到 O2 ： K28 ， 肛拭（ 1 8 、 它们 GSPC 和 orf 8 基 因 阴 都不携带 tdh 和 trh 基 因， 性， 且 PFGE 带型基本一致， 属于高度相关菌株。 结 合流行病学资料， 可以证明患者是食用了该食品受 到感染。虽然 O2 ：

38、K28 不携带 tdh 和 trh 毒力基因， 但细菌的大量繁殖也会导致腹泻等症状， 或者 O2 ： K28 有尚未发现的致病因子。 即使每份样本挑取 20 个菌落， 仍然不能找到病 人肛拭中 O3 ： K6 的感染来源， 说明单纯靠多挑可疑 菌落是不行的， 或者感染来源并不限于这 3 种食品， 还有其 他 感 染 来 源 未 找 到。 另 一 原 因 可 能 是， 非 O3 ： K6 菌株进入人体后， 发生了基因水平转移， 转 11 O3 ： K6 。 Bhoopong 6 变成 等 发现 株副溶血性弧 菌分 别 在 小 鼠 体 内 传 代 50 次， 其中有 3 株菌从 O11 ： KUT

39、 转变成 O11 ： K15 ， 但毒力不发生改变， 而 在体外传代 50 次， 血清型和毒力都不会发生改变， 说明副溶血性弧菌在体内复制过程中血清型的变异 是可能发生的。 第 2 起食物中毒中， 从卤鸡蛋盘涂抹样 （ 2 5 ） 中 分 离 到 了 O3 ： K6 和 O1 ： K56 ， 与病例分离的 O3 ： K6 和 O1 ： K56 各有 1 条带的差异， 属高度相关菌 株， 推测 是 本 次 食 物 中 毒 的 污 染 源。 肛 拭 子 （ 2 10 ） 分离到 O4 ： K8 ， 携带 tdh 毒力基因， 不属于大流 行株， 推测属于不同传染源的感染。O11 ： K36 携带 t

40、dh 毒力基因， GSPC 和 orf 8 的结果显示属于大流 PFGE 显示， 行株， 与 O3 ： K6 有 5 条带的差异， 为可 能相关菌株。卤鸡蛋（ 2 1 ） 中分离到的 O11 ： K19 ， PFGE 带型 不携带 tdh 和 trh 基因， 不属于大流行株， O4 ： K8 等也不一致， 与 O3 ： K6 、 属于不相关菌株， 不 能证明与本次食物中毒有关。 综上所述， 前后 2 起食物中毒分离的 O3 ： K6 都 trh 阴性、 GSPC 和 orf 8 阳性， PFGE 带 是 tdh 阳性、 型一致， 属于大流行株。 ( 致谢: 感谢中国 疾病 预 防控 制 中 心

41、 传 染 病研究所 热 心 提供 技 术指导及惠赠 H9812 标准菌株 中国食品卫 产品中副溶血性弧菌污染状况的主动监测J 2005 ， 17 （ 2 ） ： 97 99 生杂志， 2 Matsumoto C，Okuda J，Ishibashi M，et， al Pandemic spread of an O3K6 Clone of Vibrio parahaemolyticus and emergence of related strains evidenced by arbitrarily primed PC and toxS sequence analysesJ Journal of

42、Clinical Microbiology， 2000 ， 38 （ 2 ） ： 578 585 3 Nasu H，Iida T，Sugahara T，et， al A filamentous phage associated with recent pandemic Vibrio parahaemolyticus O3 ： K6 strains J Journal of Clinical Microbiology， 2000 ， 38 （ 6 ） ： 2156 2161 4 潘劲草， 陈坤 副溶血性弧菌的分子流行病学研究进展 张蔚， J 国外医学： 流行病学 传染病学分册， 2004 ， 31 （ 3 ） ： 182 184 ， 190 5 Nair GB，amamurthy T，Bhattacharya SK，et， al Global dissemination of Vibrio parahaemolyticus serotype O3 ： K6 and its serovariants J Clinical Microbiology eview ， 2007 ， 20 （ 1 ） ： 39 48 6 Kam KM，Luey CK，Parsons MB， et， al Eval