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兽医微生物
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《兽医微生物》本科教学PPT课件,兽医微生物,兽医,微生物,本科,教学,PPT,课件
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实习报告学 院: 动物医学院 课 程: 兽医微生物学实习 班 级: 动医61班 学 号: 1716101 姓 名: 丁凤 指导教师: 任建鸾 职称: 副研究员 实习时间 2008年 06 月02日至2008年06月 07日 实习地点 微生物实验室（逸夫楼4046） 2008 年 06 月 07 日南京农业大学教务处制实习报告一、目的要求1 了解大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）形态与染色特性以及主要培养特性； 2 熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）常规微生物学诊断法； 3 掌握大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）生化试验的方法和原理； 4 熟悉大肠杆菌和沙门氏菌（变形和产气）在选择性和鉴别培养基上的生长表现； 二、实验材料1.菌种：大肠杆菌和沙门氏菌混合液 产气肠杆菌和变形杆菌混合液2.培养基：半固体培养基 SS平板 麦康凯平板 三糖铁高层斜面 蛋白胨水 葡萄糖蛋白胨水 3. 生化管：葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、卫矛醇、枸橼酸盐、H2S、尿素4. 生化试剂：吲哚试剂， MR 、 VP 试剂三、内容与安排第一天、 配培养基第一组(1-6号） S.S培养基：25g SS培养基+500ml蒸馏水，煮沸溶化浇平板（15ml/块平板），无需高压第二组（7-12号） 麦康凯培养基： 26g麦康凯培养基+500ml蒸馏水+1g琼脂粉，煮沸，高压15磅，15分钟，浇平板第三组（13-18号） 三糖铁琼脂：30.5g三糖铁琼脂+500ml蒸馏水，煮沸溶化， 装长试管40根（10ml/管）， 高压15磅，15分钟，做高层斜面第四组（19-24号）半固体：（61班）：分别称取蛋白胨5g、牛肉膏2.5g、氯化钠2.5g、磷酸氢二钾0.5g、蒸馏水500ml，加热溶解，调pH7.6，过滤（62班）：称琼脂粉2g+肉汤500ml,煮沸，待琼脂粉完全溶化，分装短试管（2指高，约2-4ml）第五组（25-30号） 葡萄糖蛋白胨水：1.25g蛋白胨+1.25g葡萄糖+1.25g磷酸氢二钾+250ml水，加热溶解，调pH至7.6，分装40根短试管高压（3指半高，约5-8ml）第六组（其余）蛋白胨水：1.25g蛋白胨+0.625gNaCl+125ml水，调pH至7.6，分装40根短试管，捆扎，高压，12115分钟（2指高，约2-4ml）第二天、 分离培养1、在麦康凯平板和SS平板上接种待检材料（大、沙混合菌液;产气、变形混合菌液）2、置37恒温培养箱内培养24小时3、比较单个菌落的形态：染色镜检菌种菌落形态麦糠凯S.S大肠杆菌红红变形杆菌黄灰白，中心黑产气杆菌红红兔沙门氏菌黄灰白，中心黑第三天 观察结果 接种三糖铁1、观察麦康凯、S.S平板上细菌生长情况可看到几种菌落，是否圆形光滑凸起透明的菌落2、挑取单个的细小透明菌落或者红色菌落的一半作革兰氏染色，镜检，另一半菌落接种三糖铁培养基（接种时，先涂布斜面，后穿刺底层）、接种蛋白胨水、葡萄糖蛋白胨水3、37恒温培养24-48h。第四天 观察结果 做生化试验1、 观察细菌在三糖铁斜面/底部的生长情况：是否产酸产气，培养基是否变红。2、挑取三糖铁斜面上的细菌分别接种半固体、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、卫矛醇、尿素、H2S枸橼酸盐培养基，37培养24h，观察结果，记录。第五天 生化结果判定1靛基质试验（吲哚试验）取出试管（蛋白胨水）乙醚1ml，振荡，静置，待分层后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛2-3滴，在分界处出现红色玫瑰吲哚为阳性。2葡萄糖蛋白胨水一分为二（1）甲基红（MR）试验：取出试管加入甲基红3-5滴，摇匀，培养基变红色为阳性，不变色为阴性（2）VP试验：取出试管VP甲液0.6ml，摇匀再加VP乙液0.2ml，15min后看结果，变红为阳性，不变为阴性，橙色为结果不可信，需重做。第六天 作业思考：大肠杆菌与沙门氏菌在三糖铁琼脂斜面与底部生长表现有何不同？简述原理。答：大肠杆菌：斜面呈黄色，底部黄色，产气，有断层出现；沙门氏菌：斜面呈红色，底部变黄，有黑色，产气。原理：三糖铁培养基中含有乳糖、蔗糖和葡萄糖。大肠杆菌能发酵乳糖，产生大量酸和气体，使整个培养基呈现黄色，出现断层。沙门氏菌接种后产生黑色沉淀，是因为沙门氏菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基重的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀；沙门氏菌只能利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧条件下酸类不被氧化，所以仍保持黄色。 细菌生化反应结果表三糖铁糖发酵MRVP吲哚H2S尿枸运动性斜面底层H2S葡乳麦甘蔗卫大黄黄-+-+-兔沙红黄+-+-+-产黄 黄-+-+-+变红黄-+-+学生自我鉴定：通过几天的实习，了解了大肠杆菌、沙门氏菌、变形杆菌和产气杆菌的形态与染色特性和主要培养特性以及常规微生物学诊断法；并掌握了这四种细菌的生化试验的方法和原理； 进一步熟悉并掌握了微生物实验的操作要领和流程以及注意事项； 在小组中实习，从同学哪里可以得到一些帮助，并懂得了团队合作的重要性。我会将这几天学到的东西
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