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动物病理生理学 动物 病理 生理学 本科 教学 PPT 课件

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一、发热对小白鼠缺氧耐受性的影响（一）实验原理 小鼠发热初期，中枢神经系统兴奋性增强，代谢加强，耗氧量增加。（体温每升高1C，基础代谢率升高13%）。（二）实验动物 体重相仿的小白鼠两只。（三）实验药品与器材 内毒素、凡士林； 测定耗氧装置一套，注射器一支，镊子，天平，等。（四）实验方法一只小白鼠称重后，静脉注射一定量的内毒素一段时间后，将小鼠放入缺氧装置，记录水柱上升到10cm的时间，并观察小鼠状态取第二只小鼠称重后，同法进行耗氧时间的测定将两只小鼠放入同一个装有钠石灰的广口瓶中，密封，观察小鼠状态并记录各个小鼠的死亡时间（五）实验记录处理方式体重(g)上升10cm水柱时间耗氧速度（cm/分/10g）死亡时间注射内毒素正常小鼠二、饥饿对缺氧耐受性的影响（一）实验原理 动物处于饥饿状态时，为了维持体内一定限度的血糖浓度，会减少能量消耗，基础代谢降低，耗氧量减少，缺氧耐受性增强。（二）实验动物 体重相仿的小白鼠两只（三）实验药品与器材 凡士林，测定耗氧装置一套，天平，等。（四）实验方法一只小鼠称重后，饲养36小时，期间除了给其足量的饮水外不供给任何饲料第二天，将小鼠放入缺氧装置，记录水柱上升到10cm的时间，并观察小鼠状态取另一只正常饲养的小鼠称重后，同法进行耗氧时间的测定将两只小鼠放入同一个装有钠石灰的广口瓶中，密封，观察小鼠状态并记录各个小鼠的死亡时间（五）实验记录处理方式体重(g)上升10cm水柱时间耗氧速度（cm/分/10g）死亡时间饥饿处理小鼠正常小鼠三、肺水肿对缺氧耐受性的影响（一）实验原理腹腔注射肾上腺素能导致小鼠肺水肿，肺水肿一方面能使中枢神经系统兴奋，代谢增强，耗氧量增加；另一方面，肺水肿能导致小鼠呼吸肌麻痹，CO2排出障碍，导致酸中毒，此时中枢神经系统功能障碍，代谢减弱，耗氧量减少，缺氧耐受性增强。通过实验探讨两种作用的强弱以及是否有抵消作用。（二）实验动物 两只体重相仿的小白鼠（三）实验药品与器材 肾上腺素、凡士林； 测定耗氧装置一套，注射器一支，镊子，天平，等。（四）实验方法一只小白鼠称重后，静脉注射一定量的肾上腺素一段时间后，将小鼠放入缺氧装置，记录水柱上升到10cm的时间，并观察小鼠状态取第二只小鼠称重后，同法进行耗氧时间的测定将两只小鼠放入同一个装有钠石灰的广口瓶中，密封，观察小鼠状态并记录各个小鼠的死亡时间（五）实验记录处理方式体重(g)上升10cm水柱时间耗氧速度（cm/分/10g）死亡时间注射内毒素正常小鼠绪 论一、概 述兽医病理生理学是兽医学的基础理论学科，是研究疾病发生、发展和转归规律的科学。为了深入揭示疾病发生、发展的机理，必须人为地严格控制实验条件，在实验动物身上复制动物疾病的模型，并通过对动物的详细观察、记录和分析，从中引出疾病发生、发展的规律。兽医病理生理学实验就是用人工复制动物疾病的方法，通过有关指标的观察和测定，掌握疾病发生、发展的普遍规律。兽医病理生理学动物实验有急性和慢性实验：1. 急性实验：于短时间内在动物身上复制疾病模型，观察各种机能和代谢变化。这种方法适用于某些病程较短的疾病或用于观察疾病过程中某一阶段的改变。2. 慢性实验：对动物造病后，在接近自然生活条件下，对疾病过程中的机能、代谢等变化进行长期的观察。（一） 兽医病理生理学教学实验的目的和任务兽医病理生理学教学实验的目的，除了验证课堂讲授的部分理论，加深理解外， 更主要的是培养同学初步具有实验性研究疾病的技能，提高分析问题和解决问题的能力，为今后临床医学研究打下基础。因此通过实验要求达到：1、 使同学初步掌握复制疾病模型的基本方法，观察、记录、分析实验结果，书写实验报告；2 、训练同学初步掌握动物实验设计的技能；3、 培养同学严谨的科学态度，正规的操作方法。（二） 兽医病理生理学实验课的要求1、实验前（1）认真预习实验指导，了解实验的目的、方法和操作步骤； （2）复习与实验有关的理论；（3）检查实验器材和药品是否齐全；（4）小组成员既要有明确分工，也要密切配合，使每人都能得到应有的技能训练。2、实验时（1）每人应确立严谨、实事求是的科学态度，正规和准确的操作技能；耐心、细致地观察实验中出现的每个现象，准确、及时、客观地记录。（2）必须伴随整个实验过程进行科学思维，力求了解每个实验步骤和每个现象的意义。（3）要注意尽量减少对实验动物的不必要损伤。（4）爱护实验器材，使用药品应注意节约。3、实验后（1）清理仪器、药品，清洗用过的器材，每个实验组应保持自己桌面的清洁，每次下课后，打扫、整理好实验室。（2）认真整理和分析实验结果，按时完成实验报告。（三） 实验报告的书写方法1、 实验名称； 2、 实验目的；3、 实验原理；4、 实验方法：简要写出主要操作步骤，若实验操作改动较大时，应详细叙述；5、 实验结果。根据实验目的将原始记录系统化，条理化。其表达方式一般有三种：（1）叙述式：用文字将观察到的有关现象客观地加以描述，描述时需要有时间概念与顺序。（2）表格式：能够较为清楚地反映观察内容，有利于相互对比，条理化。每一表格应说明一定的中心问题，表内应注明项目及计量单位。（3）曲线式：为便于说明 , 有时可采取曲线图的形式表达实验的结果 , 但必须标明项目，使人一目了然。6、 实验结果分析或讨论实验指导中的每一个实验都经过反复试做，实验结果应该是可靠的。同学所作实验结果可作为分析的依据。分析或讨论应包括：（1）运用所学理论，讨论和解释实验结果，论证实验目的； （2）对每一实验中的讨论题，应详细加以说明；（3）实验结果提示了哪些新问题；如果出现异常现象，应加以分析。二、疾病实验性研究中实验设计的若干问题关于病理生理学所常用的动物（兔、豚鼠、大鼠、小鼠、猫、猴、狗、羊等），其基本知识和实验基本操作（包括动物的捉拿和固定方法，动物被毛的去除方法，动物给药途径和方法，动物的麻醉方法，动物的取血方法，急性动物实验中常用的手术方法，常用测量指标及测量方法以及实验动物的处死方法等等）都能在动物生理学实验书籍中查阅到，本实习指导只加以简单的叙述。但是对于疾病实验性研究中实验设计存在的问题则须详细讨论。根据高等农业院校培养学生的目标和要求，应培养学生初步具有疾病实验性研究的能力。因此，可通过每一个实验或通过学生自行设计实验逐步培养学生初步懂得疾病实验性研究中实验设计的若干问题。这对于提高教学质量来说，是十分必要的。实验设计是根据科学研究中选题、假说和误差控制等基本问题的要求，对科学实验作出合理的安排，从而有效地引出结果和结论。设计是否严谨直接关系到实验结果的准确性和结论的可靠性。不重视实验设计或设计不周密都会造成实验损失或导致实验失败。新课题的科学实验或初做科学实验，很难一开始就做出周密的设计。因此常要求进行预备试验。预备试验是根据研究者的“原始假说”作初步探索，也是对“原始假说”作非正式的验证。同时也是对初步确定采用的实验方法和操作步骤进行演习。根据预备试验结果（包括经验教训），对原始假说、实验方法和技术操作作必要的修正，为正式实验设计铺平道路。经预备试验后就应该进行正式的实验设计。实验设计涉及各方面，力求全面、周密和严谨。现择几个基本问题分述如下。（一）实验对象的选择在疾病实验性研究中，实验对象主要是实验动物。实验动物选择合适与否，与实验成败及误差大小有很大关系。其选择要点是：（1）选择经济价值较低的动物种类；（2）根据实验要求选择动物品种和纯度，最好用纯系动物；（3）动物必须是健康的、营养状况良好的；（4）最好选用年龄一致或接近的并体重一致或相近的动物，一般选择发育成熟的年轻动物；（5）动物的性别最好相同，如对性别要求不高的实验可雌雄动物混用，分组时应雌雄搭配开，与性别直接有关者，只能用某种性别的动物。（二）对照和分组一般来说，实验都应当有实验组和对照组，对照组与实验组具有同等重要意义。任何摒弃、轻视对照组的观点和做法都是十分有害的。因为在实验中很难避免非实验因素的干扰而造成的误差，用对照组的方法就可有效地消除各种非实验因素的干扰所造成的误差。对照可分为：（1）同体对照，即同一动物实验前后实验结果及数据的对照；（2）异体对照，即设立对照组；（3）不完全对照，即以文献资料或历史的、他地的、他人的资料作对照，但由于时间、地点和条件不同，差异是相当大的，动物实验一般不采用。实验组与对照组应遵守一致性原则，两组只允许在被研究动因方面不同，在实验对象、实验者、实验条件、环境、时间及仪器、药品等其他方面应力求一致。只有这样，才能消除实验误差。两组的例数应相等或相近似（计数指标，每组不应少于30 例；测量指标每组不能少于5 例，10-20 例较好），切忌随意减少对照组的例数。分组时为避免主观性因素，可采用随机抽样的方法。（三）观察的指标指标是在实验观察中用来指示（反映）研究对象中某些特征（如药物的效应）可被研究者或仪器测知的一种现象标志。也就是说，动物医学实验指标，是反映试验对象所发生的生理现象或病理现象的标志。指标可分为计数指标和测量指标，或主观指标和客观指标，等等。所选定的指标，至少要合乎下述基本条件。1、特异性指标应特异地反映所观察的事物（现象）的本质，即指标能特异地反映某一特定的现象，不致于与其他现象相混淆。如氨中毒时血液中氨浓度显著升高可作为氨中毒病的特异指标。2、客观性最好选择可用具体数值或图形表达的指标（如脑电图、心电图、血压和呼吸描记、化验检查等）。因为主观指标（如肝脾触诊、目力比色等）易受主观性因素的影响而造成较大的误差。3、重现性一般来说，客观性指标在相同条件下可以重现。重现高的指标一般意味着无偏性或偏性小，误差小，从而较正确地反映实际情况。重现性的大小可能与仪器稳定性、操作误差、 受试动物的机能状态和实验环境条件影响有关。如受这些因素影响而重现性小者，此指标不宜采用。4、灵敏性指标测量的技术方法或仪器灵敏度是极其重要的。所采用的技术方法不灵敏，该测出的变化测不出来，就会得出“假阴性结果”；仪器不精密，所得阴性数值则不真实。目前常用的分光光度法、放射免疫以及酶标法等，因为灵敏度较高常被采用。5、技术和设备的可能性尽量选用既灵敏客观，又切合本单位和研究者技术和设备实际的指标。6、指标选定必须有依据现成（定型）指标，必须有文献依据，自己创立的指标必须经过专门的实验鉴定。（四）结果观察和记录观察和记录在科学实验活动中占有十分重要的地位。为了正确地观察和记录，实验者在技术上应明确实验目的要求，熟悉所使用的技术或仪器设备；观察记录时要严谨、细致，实事求是，力戒主观片面性。 要重视原始记录，在实验设计中应预先规定或设计好原始记录方式。原始记录方式有 ：文字、数字（手写或打印）、表格、图形、照片、影片和录像带等。原始记录要及时、完整、精确和整洁，严禁撕页或涂改。并要保持原始性，切不可用整理后的记录代替原始记录。原始记录不管是什么记录方式，都一定要写明：实验题目、实验对象、实验方法、实验条件、实验者、实验日期，记录好观察测量的结果和数据。规定填好的项目一定要及时、完整、正确地填写。图形、图片一定要整理保存。（五）实验结果的数据处理、分析和判断研究者不应局限于取得原始资料或数据，而且要应用数理统计学的原理和方法来处理数据和对数据进行分析判断。首先必须把原始数据或资料系统化，计算出各组数据的均值或百分数。如是计数指标，一般用百分数表示，若为测量指标，则计算出均值，最好标明均数和标准差，进而标明均数的标准误。其次进行统计学的显著性检验。如需作显著性检验时，请参看统计学原理。分析和判断实验结果时，不能按照研究者的偏见去抽样比较，或者在计算百分数或均数时任意舍取。研究者必须实事求是，不能强求实验结果服从自己的假说，而应根据实验结果去修正假说，使假说上升为结论或理论。三、常用实验动物的正常生理生化数值和常用非挥发性麻醉剂的用法及剂量为了学生查阅方便，本实验指导介绍下列常用实验动物的正常生理生化数值和常用非挥发性麻醉剂的用法及剂量，分别列于表 1 和表 2 。表 1 常用实验动物的正常生理生化数值动物兔大鼠小鼠狗山羊寿命(年)4-92-32-310-2017性成熟期(日)120-24060-7535-60180-300180-300成年体重1.5kg以上雌150g 以上雄250g20g以上8-20kg30-50kg体温（直肠）38.5-4037.5-3936.5-3937-3938.5-39.7心率（次/分）120-150200-360520-78080-13070-80呼吸（次/分）38-8066-15084-23020-3010-20血压（mmHg*）90-13070-18493-138108-18950-130血色素(g%)7.1-15.512.0-17.810-1910.5-207-14红细胞（百万/mm3）4.0-6.47.2-9.67.7-12.55.5-8.515.0-19.0白细胞(千/ mm3)5.2-125.0-25.04.0-12.06-179.6 血小板(万/ mm3)12-2510-13815.7-1522.0-303.4-6.0 血液pH7.327.357.407.31一7.427.25-7.35 PaCO2（mmHg*）4042403850 总血量（占体重%）5.465.76-6.947.788-96-7 血非蛋白氮（mg%）28-5120-4436-11720-4430-44血清钾（mmol/L）2.7-5.13.8-5.43.7-5.02.45-411 血清钠（mmol/L)155-165126-155129-149141-157 血清钙（mEq/L）5.6-8.03.1-5.33.8-6.44.5-6 血清氯 (mmol/L)92-11294-110104-117100-125 血清胆红素(mg%)0.10.1-0.30.1-0.30.10尿比重1.010-1.0501.020-1.0501.025-1.070 重要脏器重量（占体重%）脑0.401.220.590.26心0.350.760.500.850.4-0.55肺0.531.340.940.91肾0.700.320.880.30肝3.191.655.182.941.8-2脾0.940.150.38甲状腺0.0220.0160.020.08肾上腺0.020.050.010.02* 1mmHg=133.322Pa表2 常用非挥发性麻醉剂的用法及用量 药物动物给药途径剂量（mg/kg）作用时间戊巴比妥钠（Sodium Pentobarbital） 狗、兔静脉3024小时,中途加1/5量可维持1小时以上,麻醉力强,易抑制呼吸腹腔4050大、小白鼠腹腔4050硫喷妥钠 Sodium Pentothal狗、兔静脉15201530分钟,麻醉力强,宜缓慢注射大白鼠腹腔40小白鼠腹腔1520 氯醛糖 (chloralose)兔静脉8010034小时,诱导期不明显大白鼠腹腔50 乌拉坦 (Urethane) 兔静脉750100024小时,毒性小,主要适用小动物麻醉大、小白鼠皮下或肌肉8001000蛙淋巴囊注射2025% ,0.1ml/100mg蟾蜍淋巴囊注射10% 1ml/100mg四、动物的捉拿和固定方法动物的捉拿和固定是进行动物实验的基本操作之一，实验者应当掌握娴熟。首先应对动物的一般习性有所了解，然后依其习性的不同，采用相应温顺的方法，迅速将其固定便于实验操作和观察记录的体位。下面介绍几种常用动物的捉拿和固定方法。（一）家兔的捉拿和固定家兔习性温顺，除脚爪锐利应当避免被其抓伤外，较易捕捉。捉拿时切忌以手拿兔耳，拖拉四肢或捉拿腰背部。正确方法是用右手抓住其项背部皮毛，轻提动物，再以左手托住其臀部，使兔的体重主要落在左掌心（图1）。图1 家兔的正确捉拿法 家兔的固定最常用的方法是兔台固定：兔台固定：在需要观察血压、呼吸和进行颈、胸、腹部手术时，应将家兔以仰卧位固定于兔手术台上。固定方法是，先以四条1cm宽的布带做成活的圈套（图2），分别套在家兔的四肢腕或踝关节上方，抽紧布带的长头，将兔仰卧位放在兔台上，再将头部用兔头固定器固定（图3），然后将两前肢放平直，将两前肢的系带从背部交叉穿过，使对侧的布带压住本侧的前肢，将四肢分别系在兔台的木桩上（图4）。图2 捆绑动物四肢的布带结扣图3 兔头固定器图4 兔手术台固定法（二）狗的捉拿和固定狗性凶恶，能咬人，因此进行实验时第一个步骤就是要绑住狗嘴。驯服的狗绑嘴时可从侧面靠近轻轻抚摸其项背部皮毛，然后迅速用布带缚住其嘴。方法是用布带迅速兜住狗的下颌，绕到上颌打个结，再绕回下颌打第二个结，然后将布带引至头后颈项部打第三个结，并多系一个活结（以备麻醉后解脱）。注意捆绑松紧度要适宜（图5）。倘若此举不成应用狗头钳（图6），夹住其颈部，将狗按倒在地，再绑其嘴。如实验需要静脉麻醉时，可使动物麻醉后再移去狗头钳，解去绑嘴带，把动物放在实验台上，然后先固定头部，再固定四肢。图5 狗嘴捆绑法图6 狗头钳头部固定：固定狗头需用一特制的狗头固定器（图7），狗头固定器为一圆铁圈，圈的中央有一个弓形铁，与棒螺丝相连，下面有一根平直铁 。操作时先将狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的铁圈内，再用平直铁 横贯于犬齿后部的上下颌之间，然后向下旋转棒螺丝，使弓行铁逐渐下压在动物的下颌骨上，把铁柄固定在实验台的铁柱上即可。图7 狗头固定器四肢固定：如采取仰卧位，四肢固定方法与家兔相同。（三）大白鼠的捉拿和固定 大白鼠牙齿锋利，要提防被其咬伤。从鼠笼内捉拿时右手最好戴手套，捉住其尾巴，提出置于实验台上，以左手拇指和食指、中指抓住两耳后项背皮肤，将鼠固定在左手掌中（图8（1），右手进行操作。也可伸开左手之虎口，敏捷地从背部插向腋下，使食指位于左前肢前，拇指、中指位于左前肢之后，一把抓住（图8（2），右手进行操作。如操作时间较长，可参照家兔固定方法将其固定在大白鼠固定板上。（四） 小白鼠的捕捉和固定小白鼠较大白鼠温和，虽也要提防被其咬伤手指，但毋需戴手套捕捉。可先用右手抓住鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上，用左手的拇指或食指抓住小鼠两耳后项背皮肤（图9），将鼠体置于左手心中，拉直后肢，以无名指及小指按住鼠尾部即可（图10）。有经验者可直接用左手小指钩住鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后项背部皮肤亦可。如果操作时间较长，也可固定于小白鼠固定板上。图8 （2）大白鼠捉拿法图8 （1）大白鼠捉拿法（四） 小白鼠的捕捉和固定小白鼠较大白鼠温和，虽也要提防被其咬伤手指，但毋需戴手套捕捉。可先用右手抓住鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上，用左手的拇指或食指抓住小鼠两耳后项背皮肤（图9），将鼠体置于左手心中，拉直后肢，以无名指及小指按住鼠尾部即可（图10）。有经验者可直接用左手小指钩住鼠尾，迅速以拇指和食指、中指捏住其耳后项背部皮肤亦可。如果操作时间较长，也可固定于小白鼠固定板上。图9小白鼠捉拿法 图10小白鼠捉拿法五、动物被毛的去除方法 动物的被毛常能影响实验操作和结果的观察，因此实验中常需去除或剪短动物的被毛。除毛的方法有剪毛、拔毛和脱毛三种。（一）剪毛固定动物后，用粗剪刀剪去所需部位的被毛。剪毛时注意以下几点：（1）把剪刀紧贴皮肤剪，不可用手提起被毛，以免剪破皮肤；（2）依次剪毛，不要乱剪；（3）剪下的毛集中放在一个容器内，勿遗留在手术野和兔台周围，以保证术野的清洁和防止注射器等夹毛。（二）拔毛兔耳缘静脉注射或取血时以及给大、小白鼠作尾静脉注射时，需用拇指、食指将局部被毛拔去，以利操作。（三）脱毛脱毛系指用化学药品脱去动物的被毛，适合于无菌手术野的准备以及观察动物局部皮肤血液循环和病理变化。常用脱毛剂的配方：1 硫化钠3克、肥皂粉1克、淀粉7克，加适量水调成糊状。2 硫化钠8克、淀粉7克、糖4克、甘油5克、硼砂1克，加水75ml 。3 硫化钠8克，溶于100ml水中。以上脱毛剂配方适用于家兔、大白鼠、小白鼠等小动物的脱毛。4 硫化钠10克、生石灰15克，溶于100ml水内，此配方适用于狗等大动物的脱毛。使用以上各种脱毛剂，都应事先剪短被毛，以节省脱毛剂，并减少对皮肤的刺激反应。应用时用棉球蘸上脱毛剂，在所需局部涂一薄层，23分钟后，用温水洗去脱落的被毛，以纱布擦干局部，涂一层油脂即可。六、动物给药途径和方法 病理生理实验中，常要把药物投入到动物体内以观察其对机体机能、代谢和形态的影响。动物的给药途径和方法多种多样，现择其常用者简介如下：（一） 注射给药1. 皮下注射 注射时以左手拇指和食指提起皮肤，将连有512号针头的注射器刺入皮下。2. 皮内注射 皮内注射时需将注射的局部脱毛，消毒后，用左手拇指和食指按住皮肤并使之绷紧，在两指之间，用结核菌素注射器连412细针头，将针头先刺入皮内，然后使针头向上挑起并再稍刺入，即可注射药液，此时可见皮肤表面鼓起一白色小皮丘。图11 小白鼠腹腔注射方法3. 肌肉注射 肌肉注射应选在肌肉发达的部位，一般多选臀部。注射时一次迅速刺入肌肉，回抽针栓如无回血，即可进行注射。4. 腹腔注射 用大、小白鼠做实验时，以左手抓住动物，使腹部朝上，右手将注射针头于左（或右）下腹部刺入皮肤，并以45度角穿过腹肌，固定针头，缓缓注入药液（图11），为避免伤及内脏，可使动物处于头低位，使内脏移向上腹。若实验动物为家兔，进针部位为下腹部的腹白线旁1cm处。5. 静脉注射(1)兔：兔耳部血管分布见图12。兔耳中央为动脉，内外缘为静脉。内缘静脉深不易固定，故不用。外缘静脉表浅易固定，常用。先拔去注射部位的被毛，用手指弹动或轻柔兔耳，使静脉充盈，左手食指和中指夹住静脉的近端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器连6号针头尽量从静脉的远端刺入，移动拇指于针头上以固定针头，放开食指和中指，将药液注入（图13），然后拔出针头，右手指压迫针眼片刻。(2)小白鼠和大白鼠：一般采用尾静脉注射（图14），鼠尾静脉有三根，左右两侧及背侧各一根（图15），左右两侧尾静脉比较容易固定，多采用，背侧一根也可采用，但位置容易移动。操作时先将动物固定在鼠筒内或扣在烧杯中，使尾部漏出，尾部用4550的温水浸润半分钟或用酒精擦拭使血管扩张，并可使表皮角质软化。以左手拇指和食指捏住鼠尾两侧，使静脉充盈，用中指托起尾巴，以无名指和小指夹住尾巴的末梢，右手持注射器连412号针头，使针头与静脉平行（小于30度），从尾下14（约距尾尖23cm）处进针，此处皮薄易于刺入，先缓注少量药液，如无阻力，表示针头已进入静脉，可继续注入。注射完毕后把尾部向注射侧弯曲以止血。如须反复注射，应尽可能从末端开始，以后向尾根部方向移动注射。图12 兔耳部血管分布 图13 兔耳静脉注射方法图14 小白鼠尾静脉注射方法 图15 鼠尾的横断面（3）狗：狗静脉注射多选前肢内侧皮下头静脉（图16）或后肢小隐静脉（图17）注射。注射前由助手将动物侧卧，剪去注射部位的被毛，用胶皮带扎紧（或用手抓紧）静脉近端，使血管充盈，从静脉的远端将注射针头平行刺入血管，待有回血后，松开绑带（或两手），缓缓注入药液。图16 狗前肢头静脉注射方法图17 狗后肢小隐静脉注射方法（二） 经口给药 在急性实验中，经口给药多用灌胃法，此法剂量准确，适用于大白鼠、小白鼠，家兔等动物。1 兔 兔灌胃器系用导尿管配以一个木制开口器（图18）。灌胃时须两人协作进行，一人取坐位，将兔体夹于两腿之间，左手紧握双耳，固定头部，右手抓住前肢。另一个人将张口器横贯于兔口中，并使兔舌压在张口器之下，再把导尿管往张口器中部之小孔慢慢沿上颚插入食道1620cm。导尿管插好后，将其外口放入含清水的烧杯内，如有气泡出现，表明导尿管插入了气管，应拔出重插，如无气泡出现表明导尿管在胃内，即可将药液注入胃内，并再注入少量空气，使管内的药液充分进入胃内，然后拔出导尿管，取下张口器。一次最大投药量为3ml 。图18 兔灌胃的方法2 小白鼠按前述捉拿法以左手捏住动物，使腹部朝上，右手持灌胃器（由2ml注射器连接钝化的直径为1mm的注射器针头构成），先从右口角处插入口腔，以灌胃器轻压其头部，使口腔和食道成一条直线后再把灌胃器沿上颚徐徐送入食道，在稍有抵抗感觉（相当于食道的膈部）时，即可注入药液（图19）。如注射顺利则表示针头已进入胃内，如动物有呕吐或强烈挣扎，表示针头未进入胃内，必须拔出重插，否则如将药液误注入肺脏，会造成动物死亡。注完后轻轻抽出灌胃器。一次最大投药量为1ml 。图19 小白鼠灌胃方法 图20 大白鼠灌胃方法3 大白鼠大白鼠的灌胃操作基本上与小白鼠相同（图20），但有几点区别，（1）灌胃器由510ml注射器连接钝化的直径为1.2mm的注射器针头构成；（2）大白鼠灌胃时有时须两人配合操作；（3）一次最大投药量为2ml 。六、动物的取血方法（一）家兔1 心脏取血将加兔仰卧固定，在第三肋间胸骨左缘3mm处把注射针垂直刺入心脏，血液随即进入血管。注意事项有：（1）动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固；（2）如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点；（3）在胸腔内针头不应左右摆动，以防伤及心、肺。一次可取血2025ml 。2 耳缘静脉取血操作同兔耳缘静脉注射法，待耳缘静脉充血后，用连有512号针头的注射器在耳缘静脉末稍端刺破血管待血液漏出取血或针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血。3 股静脉、颈静脉取血取血先作股静脉和颈静脉暴露分离手术，将连有6号针头的注射器，作股静脉取血时，从股静脉下端向心方向刺入血管，作颈外静脉取血时，从颈外静脉近心端（距颈静脉分支23cm处）向头侧端刺入血管，徐徐抽动针栓即可，取血完毕用棉球压迫止血。一次可取10ml以上。（二）小白鼠和大白鼠1 尾尖取血多在不麻醉状态下进行。将鼠装入固定盒内，漏出尾部，用4550温水浸泡或用二甲苯擦拭鼠尾使血管扩张，然后剪去尾尖（因尾尖部有静脉丛，故不可剪去太多），血液即自行流出，必要时用手轻轻从尾根部向尾尖部挤几下取血。如须反复取血，每次剪去很小一段鼠尾巴，取血后用棉球压迫止血，并用6液体火棉胶涂于伤口外，保护伤口。也可采用交替切割静脉取血，每次以锋利刀片切破一根静脉。2 球后静脉丛取血此法适用于小动物采血，穿刺的部位是眼球和眼眶后界之间的球后静脉丛，用一根长约15cm的细玻璃管一端烧制拉成11.5mm的毛细管，用前将毛细吸管浸入1肝素溶液，取出干燥后待用。左手捏住动物两耳间的头皮轻轻向下压迫颈部两侧，以阻断静脉回流，使眼球外突。右手持毛细吸管，从内眦部插入，使毛细吸管与框壁平行地向喉头方向推进，深约45mm,即到达球后静脉丛（图21，22），血液自行流入管内。小白鼠一次可采血0.2毫升，大白鼠一次可采血0.5毫升，需要时可连续采血多次。图21 小白鼠球后静脉丛取血方法 图 22 大白鼠球后静脉丛取血方法（三）狗狗的取血多用静脉穿刺法。（四）鸡 鸡的取血多用翅静脉穿刺法。 附录 常用体外抗凝剂的配方1肝素溶液市售肝素钠溶液的浓度为12 500 I.U./ml，相当于100mg（即1mg相当于125 I.U.）。体外抗凝:取1.0肝素溶液0.1ml于试管内100下烘干，每管可使510ml血液不凝。体内抗凝：静脉注射5001000I.U/kg2草酸盐溶液取草酸铵1.2g、草酸钾0.8g，加4甲醛液1.0ml，再加蒸馏水至100ml，0.5ml草酸盐溶液可使5ml血液不凝。本溶液供测定红细胞容积用。3枸橼酸钠溶液一般配制成3.8%的水溶液，0.1ml可使1ml血液不凝。急性直接测定血压实验抗凝用，兔为4%5，狗为6%7的水溶液。4草酸钾溶液配制成2的水溶液，0.1ml可使12ml血液不凝。实验一 内外因素在病理发生中的作用一、 中枢神经系统机能状态对动物耗氧量及缺氧耐受性的影响（一） 实验目的通过本实验了解中枢神经系统机能状态不同在发病学中的意义。（二） 实验原理 中枢神经系统机能状态对耗氧量影响很大，兴奋时代谢加强，耗氧量增加；当处于抑制状态时，代谢降低，耗氧减少。（三） 实验动物 体重相仿的小鼠3只。（四） 实验器材与药品1 测定耗氧量装置一套（图1-1），1ml注射器2个，镊子，天平。2 0.1%苯甲酸钠咖啡因，0.1%氯丙嗪，0.1%异丙嗪溶液，凡士林。 图1-1 测定耗氧量的装置（五） 实验方法1 一只小鼠称重后，按0.1ml/10g的剂量，腹腔注射氯丙嗪、异丙嗪溶液，30分钟后进行耗氧时间的测定。 2 将小鼠放在耗氧测定装置的瓶中，塞紧橡皮塞。将另一端玻璃管插入水中，并同时准确记录水柱升到刻度（约20cm）所需的时间，观察小鼠状态。3 取第二只小鼠称重，按0.1ml/10g的剂量，腹腔注射0.1%的苯甲酸钠咖啡因，10分钟后，按上法进行耗氧时间的测定。4 取第三只小鼠称重，同法进行耗氧时间的测定。5 将上述三只小鼠放入同一只装有少许钠石灰的500ml的广口瓶中，塞紧瓶塞，注意观察各只小鼠的表现，记录每只小鼠死亡的时间。6 结果记录处理方式体重(g)上升20cm水柱时间耗氧速度（cm/分/10g）机能状态死亡时间注氯丙嗪、异丙嗪的小鼠注苯甲酸钠咖啡因的小鼠正常小鼠（六） 实验注意事项1. 实验时要待小鼠对药物的反应完全表现出来后方能测定其耗氧量。2. 在耗氧量及测各只小鼠死亡时间时，一定要塞紧瓶塞，严防漏气。（七） 讨论1. 注射不同药物小鼠单位时间的耗氧量有何不同？为什么？2. 注射不同药物小鼠在同一缺氧环境中死亡时间有何不同？为什么？ 二、 环境温度对缺氧耐受性的影响（一） 实验目的 观察实验动物在不同的环境温度中对缺氧耐受性的变化，了解环境因素在机体缺氧发生发展过程中的作用和临床利用低温保护的理论依据。（二） 实验原理 不同的环境温度对动物机体的代谢率影响不一样，从而使机体对氧的需要及消耗率也不一致，因此对缺氧的耐受性也就不相同，即氧耗率高的动物对缺氧的耐受性降低。本实验对比观察个体条件相似的小白鼠，在不同的温度环境中，耐受缺氧的时间，最后计算各鼠的氧耗率来分析其耐受性不同的机理。（三） 实验动物体重相似的小白鼠3只。（四） 实验器材与药品 小白鼠缺氧瓶（图1-1），测耗氧量装置（图1-2），如有测氧仪可按说明书操作测缺氧实验后瓶内余氧浓度计算氧耗量。恒温水浴、天平、500ml烧杯、冰块。图1-2 测耗氧量装置（五） 实验方法1 取三只有双出气口的小白鼠缺氧瓶，瓶上分别粘上温度及小白鼠体重的标签。然后各放入钠石灰少许（约5g）。2 取一只500ml烧杯，加入碎冰块和冷水（一般为04）。将恒温水浴箱调至4042。3 称取三只体重相近的小白鼠，分别装入缺氧瓶内，将体重填写在瓶子的标签上，各瓶分别标明高温、低温和室温。盖紧瓶盖（注意千万不能漏气），将标有低温、高温的缺氧瓶分别置于盛有冰水的烧杯和42水浴内；另一只置室温中，开始记时。4 观察各鼠在瓶中的活动情况，待小鼠死亡后，计算存活时间（t），处于低温高温条件下的缺氧瓶，待动物死亡后，必须在室温放置1520分钟以使瓶内温度与室温平衡。注意切勿打开缺氧瓶！5 用测耗氧量装置测小白鼠总耗氧量，或用测氧仪测缺氧瓶内余氧浓度（略）。最后计算小白鼠耗氧率（R）： 6. 用测耗氧量装置测定小白鼠总耗氧量的方法：（1）向量筒内充水至刻度，然后将玻璃管接头与缺氧瓶上的一个橡皮管出气口相连。（2）由于缺氧瓶内负压，打开上述橡皮管上的螺旋夹后，装置中移液管内水平面上升，甚至进入缺氧瓶，而量筒内液面下降，当液面下降稳定后的刻度读数即为小白鼠的总耗氧量（A）。（六） 实验注意事项1 各实验小白鼠个体状态选择尽量相同。2 缺氧瓶必须仔细检查保持严密不漏气直至测完耗氧量为止。（七） 讨论 不同温度条件下的缺氧瓶内小白鼠哪个存活时间最长，为什么？他们在缺氧瓶内的活动状况有何不同？三、 年龄因素对缺氧耐受性的影响（一） 实验目的 通过本实验了解机体的内在因素对疾病发生的影响。（二） 实验原理 许多疾病的发生发展与机体的内部因素有重要的关系。本实验通过降低大气中的氧分压，观察不同年龄的同种动物的不同反应，说明机体的内在因素对疾病发生的影响。（三）实验动物 成年小鼠1只，12日龄小鼠1只。（四）实验器材与药品 250ml广口瓶1只（并带有瓶塞），链霉素小瓶1只，凡士林1瓶。（五）实验方法1取新生小鼠1只放入链霉素小瓶内，然后再取1只成年小鼠，连同幼鼠一起放入250ml广口瓶内，观察两只小鼠之状态。2密闭瓶塞，并同时记录时间，分别观察记录两只小鼠的状态。3 准确记录两只小鼠死亡所需的时间。4 结果记录 鼠 别死亡所需时间机 能 状 态备 注成年鼠幼 鼠（六）实验注意事项实验时，装有实验动物的广口瓶严防漏气。（七） 讨论 幼鼠和成年鼠对缺氧的耐受性有何不同？为什么？实验二 动物遗传病系谱分析（一） 实验目的 对动物进行家系调查和系谱的绘制分析，不仅可以作为确定某些家畜的疾病是否属于遗传病，而且对确定以何种方式遗传具有重要意义。本实验通过对三个实例的练习，以求初步掌握系谱图的绘制和分析方法。（二） 实验原理 动物遗传性疾病是由于某些遗传物质的改变而引起的，并且按一定的遗传方式从上代垂直传递到下代。家畜的单基因遗传病，可以通过对动物进行系谱调查，弄清病畜在家系中的分布情况，用孟德尔遗传的基本规律进行分析，从而确定遗传性疾病的遗传方式。（三） 练习例一， 某奶牛场于1974年发现1头黑白花奶牛公病犊，出生后全身出汗不止，被毛卷曲，易脱落，第二天屠宰淘汰；1975年和1976年，该场又相继发现4头母病犊，症状类似，经治疗无效，均于出生后不久死亡。以上5头病犊均是刚出生时就发病，其母牛在怀孕期间没有发生疾病，按下列资料，试绘制所有病犊总的系谱图并分析属何种类型的遗传病。例二， 新疆某牧场曾发生羔羊遗传性小脑运动失调症，经初步调查，发现病羔系高加索（K）种公羊5135的后代，进一步追踪调查后，绘制出下列系谱图，试分析是何种类型的遗传性疾病并找出携带者种公羊。例三， 四川省某县曾先后发生猪阉割时出血不止的症状，甚至死亡，病猪均为雄性，同窝仔猪中，雄性发病而雌性无异常变化，该病具有家族史，初步诊断为猪血友病，现将病猪的系谱绘制如下，试分析该系谱，说明是何种类型的遗传病，为什么？实验三 应激对耗氧量及缺氧耐受性的影响（一） 实验目的 通过对应激前后耗氧量的测定及应激对缺氧耐受性的影响，分析应激时神经、内分泌系统的变化，了解应激的生物学意义。（二） 实验原理 应激是应激原作用于机体所引起的一种全身性的非特异性反应。本实验以冷水游泳作为应激原，测定小白鼠应激前后耗氧量的变化，观察应激与未经应激小鼠对缺氧的耐受性，说明应激对机体的影响。（三） 实验动物 健康小白鼠2只。（四） 实验器材与药品 凡士林1瓶，钠石灰1瓶，耗氧量测定装置1套（图1-1），天平1台，秒表1只，水槽一只，广口瓶1只，干纱布和棉花若干。（五） 实验方法1. 取一只小鼠，放入耗氧量测定装置中，测其耗氧时间（上升10cm水柱的时间），连续3次，并记录。2. 将小鼠称重后放入冷水中（最好是冰水），迫使其不停地游泳5分钟左右（游泳时间视其机能状况而定）。3. 取出小鼠，擦干被毛上的水，用同样的方法测其耗氧时间，连续3次，并记录。4. 将应激后的小鼠和另一只未进行应激的小鼠一起放入盛有少量钠石灰的广口瓶中，隔绝空气，观察其活动情况，分别记录两只小鼠的死亡时间。5. 结果记录项目上升10cm水柱的时间小鼠死亡时间123平均应激前应激后（六） 实验注意事项1 测定耗氧时间，先要用凡士林封住瓶口，防止漏气。2 实验中，捉拿小鼠动作要轻，切忌粗暴。（七） 讨论1 试比较小鼠应激前后的耗氧时间，分析其原因？2 比较应激与未经应激小鼠的死亡时间，解释其机理？实验四 水 中 毒（一） 试验目的 复制水中毒动物模型。了解在水中毒情况下，动物体内环境的变化以及水中毒对机体的影响。（二） 实验原理 动物摄入过多的水分时，机体可以通过一系列调节加速水的排出，不致使水份在体内积聚。但当水的排除发生障碍时，再摄入大量水分，水就在体内潴留而发生水中毒。本实验通过给家兔注入一定量的蒸馏水和抗利尿素，造成家兔的水中毒。观察在水中毒情况下动物的表现及血液学值的某些变化，了解水中毒形成的机理和对机体的影响。（三） 实验动物 家兔1只。（四） 实验器材与药品 消毒蒸馏水，垂体后叶素，1肝素，生理盐水，1盐酸。婴儿秤，2ml注射器，100ml注射器，比容管，红细胞计数板，手撳计数器，沙里氏比色管，离心机，骨钳，显微镜。（五） 实验方法1. 取家兔1只，称重。耳缘静脉采血（肝素抗凝）12ml，作红细胞比容，红细胞计数和血红蛋白的测定，并计算红细胞平均容积（mean corpuscular volume,MCV）和红细胞平均血红蛋白浓度（mean corpuscular hemoglobin concentration,MCHC）。计算方法附后。2. 腹腔注射消毒蒸馏水，注射量按体重的10计算，同时注射垂体后叶素34个单位。注后放回笼内，给水和饲料，注意观察家兔的状态。3. 第一次注水后23小时，再用上述剂量从腹腔注射蒸馏水和垂体后叶素。注后放回笼内，给水和饲料，注意观察家兔的状态。4. 当兔出现抑制、抽搐、痉挛等神经症状时，称其体重，从耳缘静脉采血12ml，肝素抗凝，作红细胞比容，红细胞计数和血红蛋白的测定。并计算MCV和MCHC之值。5. 继续观察家兔的症状至死亡。死后，将兔脑完整地取出，称重，计算脑重体重之比。观察脑的肉眼变化，并将兔脑固定于10中性福尔马林中。制成兔脑切片，在镜下观察其病理变化。6. 将一正常家兔称重后，气栓致死。按5的方法取脑，称重，计算脑重体重比。与上述兔脑结果进行对比。7. 结果记录 观察指标实验项目体重（Kg）红细胞比容（%）Hb（g%）MCV（m3）MCHC(%)状态注水前注水后（六） 试验注意事项第二次注射蒸馏水后，症状出现后不要立即采血，应在仔细观察了各种症状后，再采血。（七） 讨论家兔在第二次注射蒸馏水后的各项测定指标及表现与未注射蒸馏水时有何变化？为什么？ 附录： MCV和MCHC的计算方法： 家兔的正常参考值：MCV:雄兔62.52.00(m3)，雌兔63.11.92(m3)；MCHC: 雄兔33.51.85(%)，雌兔32.21.74(%) 细胞内液的变化除了可以表现为嗜睡及精神紊乱等脑症状外，还可以通过测定MCV和MCHC大致上推测出细胞内液容量的变化。当细胞外液渗透浓度降低（如低渗性脱水或低渗性水分过多）时，水自细胞外液转移至细胞内，细胞内液及MCV则增大，MCHC则降低；反之，当细胞外液渗透浓度增高时，水自细胞内转移至细胞外，细胞内液及MCV则减少，MCHC则增高。由此可见，MCV和MCHC的变化方向是相反的。实验五 兔 耳 水 肿（一） 实验目的 通过试验了解水肿的发生机理以及组织内压与水肿之间的关系。（二） 实验原理正常的组织内压是负值（约839.9Pa左右），这种负压是不致有过多的液体在组织间隙中积聚的保证。一旦组织内压从负压变为正压，则会导致水肿的发生。常见的原因有：微血管壁通透性增高，毛细血管流体静压增高，血浆胶体渗透压下降，淋巴回流减少等，这些因素中的一个或几个发生变化都能使组织内压变为正值，从而发生水肿。（三） 实验动物 家兔1只。（四） 实验器材与药品带槽软木塞，橡皮筋，组织内压测定装置（如图5-1），半导体温度计，卡尺。（五） 实验方法1. 实验前一天，用带槽软木塞放在一侧兔耳的内侧面，使软木塞的槽正好对准兔耳中央动脉，并用橡皮筋扎紧。2. 实验时，观察结扎后兔耳的颜色，用卡尺测其厚度，并用半导体温度计测其皮温。对侧兔耳的相同部位也作同样的观察和测定。3. 将组织内压测定装置的针头插入结扎兔耳肿胀部皮下，待U形玻璃管（内径3mm）中的液面稳定后，读取数值。对侧兔耳也在相同部位测定组织内压。图5-1 组织内压测定装置4. 结果记录 观察指标实验项目颜色厚度（mm）温度（）组织内压（Pa）其他结扎兔耳未结扎兔耳（六） 注意事项1. 捆兔耳的橡皮筋需扎紧。2. 测定组织内压时，要待玻璃管中的水面稳定后再读数。（七） 讨论 比较两侧兔耳（结扎和未结扎的）的颜色、厚度、温度及组织内压有何不同？为什么？实验六 肺 水 肿（一） 实验目的 通过实验了解肺血容量急剧增加在肺水肿发生中的作用。（二） 实验原理肺组织液的生成和回流有其特点。肺毛细血管流体静压增高、肺血容量急剧增加、淋巴回流障碍、毛细血管通透性增加等原因均可导致肺水肿的形成。（三） 实验动物体重相仿的小鼠2只。（四） 实验器材与药品1：1000肾上腺素，天平，1ml注射器，7号针头，剪刀，镊子，细丝线，滤纸，显微镜。（五） 实验方法1. 取2只小鼠称重，并观察其呼吸等状态。2. 将其中一只按每10g体重0.080.1ml的剂量，腹腔注射1：1000肾上腺素。注射后即注意观察小鼠呼吸等状态。3. 小鼠死后，打开胸腔，用线在气管分叉处结扎，在结扎处上方切断气管，小心地把心脏及其周围血管除去，将肺完整地取出，用滤纸吸去肺表面的水份后，称取肺重，计算肺系数（肺系数=肺重（mg）/体重（g）。然后肉眼观察肺的大体变化。切开肺脏，观察切面的变化，注意有无泡沫状液体流出。4. 另一只小鼠，按同样剂量腹腔注射生理盐水，观察其呼吸等状态。半小时后处死动物。然后按上法取出肺，并称重和计算肺系数。、5. 将水肿肺和正常肺固定在10%中性福尔马林液中，制成组织病理学切片。6. 镜下观察水肿肺和正常肺组织的切片。（六） 试验注意事项 取出肺时，注意勿损伤肺表面和挤压肺组织，以防止水肿液流出，影响肺系数值。（七） 讨论 实验鼠肺和对照鼠肺有何不同？为什么？实验七 实验性酸碱平衡障碍（一） 实验目的本实验通过复制实验性酸碱平衡障碍，测定和观察动物血液的PO2、pH、PCO2，尿液pH以及呼吸的变化，分析其发生机理及其对机体的影响，并对已造成的酸碱平衡紊乱进行纠正，初步了解临床治疗的原则。（二） 实验原理机体的体液环境必须具有适宜的酸碱度才能维持正常的代谢和生理功能。在生理条件下，机体主要通过血液缓冲系统、肺脏、肾脏以及细胞内外离子交换的调节作用，使血液酸碱度保持相对稳定。如果机体摄入、自身生成或丧失过多酸性或碱性物质，破坏了酸碱的自稳状态，就可能引起酸碱平衡紊乱。本实验通过复制酸碱平衡紊乱，直接测定血液PO2、pH和PCO2，并计算出HCO3等指标，对酸碱平衡紊乱变化规律进行分析和研究。（三） 实验动物2Kg左右家兔1只。(四) 实验器材与药品兔固定台1张，手术器械1套，呼吸描记装置1套，输液装置1套，体温表1支，球胆1只，细塑料插管3根，10ml注射器2付，2ml注射器6付，7号针头6只，橡皮头6只，血气酸碱分析仪1台。 0.5普鲁卡因，1和0.2肝素，5碳酸氢钠，0.1N盐酸，生理盐水，精密pH试纸。（五）实验方法 1.将家兔称重，测肛温后，仰卧保定在兔台上。 2.实验前手术（1）输尿管插管 下腹部剪毛，消毒，麻醉，手术切开，暴露出膀胱，找到一侧输尿管，向肾方向分离一段，在输尿管下方穿一细线，用眼科剪剪一斜口，向肾方向插入塑料插管，用线固定，将塑料插管的另一端引出腹腔，关闭腹腔后，盖上生理盐水纱布。（2）股动脉插管 手术找到股动脉，在其下方穿一细线，在向心端夹上动脉夹，用眼科剪在动脉夹下方较远处股动脉上剪一斜口，插入已充满1%肝素、末端用大头针插紧的细塑料插管，用线固定，切口盖上生理盐水纱布。（3）气管插管 手术找出气管，分离一段，在气管下方穿一细线，用眼科剪作“T”形切口，向肺方向插入气管导管，用线固定，气管导管的一端连接到呼吸描记装置。（4）颈静脉插管 手术找出颈静脉，在颈静脉下方穿两根细线，离心端用线结扎，在结扎下方用眼科剪剪一斜口，向心方向插入充满1肝素的细塑料插管，用线固定，接上输液装置，并以3540滴分的速度缓慢滴注生理盐水。3测定实验前各项指标 手术完毕后，描记一段正常呼吸曲线，用精密pH试纸测定尿液PH值，用预先抽吸过1肝素的2ml注射器从股动脉采血1ml，立即用橡皮塞堵住针头，避免血样与空气接触。然后进行股动脉血PO2、pH和PCO2的测定。4复制呼吸性酸中毒 在气管插管的一端接上充有少量氧气的球胆，可见家兔呼吸逐渐加深加快，至呼吸明显加深加快时，立即从股动脉采血1ml进行血液PO2、pH和PCO2测定，同时测定尿液pH值。 采血完毕后，立即去掉球胆，待家兔呼吸基本正常时，再测一次上述指标。5复制代谢性酸中毒 将5乳酸缓慢滴注入颈静脉（30滴分），剂量为10ml/kg。滴注完毕后立即从股动脉采血1ml，进行血液PO2、pH和PCO2，并测定尿液pH值，描记呼吸曲线。 将5NaHCO3缓慢滴注入颈静脉（30滴分），剂量为8mlkg ，以纠正代谢性酸中毒。滴注完毕后立即复测一次上述指标。6复制代谢性碱中毒 将5NaHCO3缓慢地注入颈静脉（30滴分），剂量为8mlkg，注意观察动物有无抽搐等症状以及呼吸曲线的变化。滴注完毕后立即复测一次上述指标。 一般代谢性碱中毒可静脉注射生理盐水扩容并补充CL以促进肾脏排泄HCO3。本实验用0.1MHCL滴注入颈静脉（10滴分），剂量为3mlkg。滴注完毕后立即复测一次上述指标。7复制混合性酸中毒 用止血钳将气管插管另一端夹住，直至动物临近死亡时，立即复测各项指标。8动物死亡后，进行尸检，重点观察肺脏的病理变化。9结果记录 兔号： 体重（kg）： 性别： 毛色： 肛温：实验项目血气分析尿液pH呼吸变化其他PO2pHPCO2HCO3（六）实验注意事项 在进行上述试验项目时，要密切观察动物的各种症状，滴注要缓慢，剂量要控制，以防过早死亡，使实验中断。（七）讨论在复制呼吸性酸中毒、代谢性酸中毒、代谢性碱中毒以及混合性酸中毒时，动物的血气、尿液pH值和呼吸等有何变化，试说明其原因。实验八 实验性山羊瘤胃酸中毒（一）实验目的 通过复制山羊瘤胃酸中毒，并进行血气分析和临床症状观察，初步了解反刍动物瘤胃酸中毒的发病机理。（二）实验原理 反刍动物在摄入少量易发酵的饲料（如谷物、糖类）后，首先引起瘤胃内链球菌的异常发酵，接着乳酸杆菌大量繁殖，迅速产生大量乳酸，过量的乳酸通过瘤胃壁吸收入血而引起急性代谢性酸中毒（瘤胃酸中毒），同时，由于胃肠道内容物渗透压增高，使体内水分被动转移，产生脱水等变化。本试验通过灌服蔗糖，复制山羊瘤胃酸中毒，分析其血气变化，观察各种临症表现。（三）实验动物 成年山羊1只。（四）实验器材与药品 蔗糖，1肝素，1盐酸，山羊开口器1只，胃导管1根，漏斗1只，天平1台，毛剪1把，听诊器1付，体温表1支，血红蛋白比色计1付，红细胞比容管10支，2ml注射器20付，6号针头20只，血气酸碱分析仪1台，离心机1台，碘酊棉球、酒精棉球若干。（五）实验方法1. 实验前3天，每天定时观察山羊的体温（T）、心率（P）、呼吸（R）、瘤胃蠕动、食欲、粪便等一次，并从颈静脉采血2ml（采血方法见附录），用血气酸碱分析仪测定血气（PO2，pH，PCO2），同时测定血红蛋白（Hb）和红细胞比容（PCV），并计算血样中碳酸氢盐（HCO3）的浓度（公式见附录）。2. 给山羊称重，以每公斤体重15g蔗糖的剂量，用常水配成溶液，用胃导管一次性灌服。3. 从灌服后起（即当天），每隔4小时，分别观察和测定上述各项指标一次。4. 灌服后第二天起，每隔8小时，分别观察和测定上述各项指标一次，一般持续46天。（六）试验注意事项 采血时，尽量减少对实验动物的刺激，切忌用力抽吸注射器，防止血样中混有气泡。采血后，立即将针头刺入橡皮塞，避免血样与空气接触。（七）讨论以PO2、pH、PCO2和HCO3为纵坐标，以实验时间（小时）为横坐标，分别作出实验前后山羊颈静脉血血气变化曲线，比较和分析其主要变化，并结合临症表现说明原因。附录：1. 颈静脉采血方法 颈静脉处剪毛，用碘酊、酒精棉球二次消毒后，将预先抽吸过1肝素液的2ml注射器（注射器内应无空气）刺入颈静脉采血2ml，采血后，立即将针头刺入橡皮塞，并轻轻搓揉注射器，放入冰瓶内（本实验也可采用颈动脉血，实验前要做颈动脉“皮桥”手术）。2. 血样中碳酸氢盐浓度的计算方法 用血气酸碱分析仪测得血样中PO2、pH、PCO2数值，经温度校正处理后，按下列公式计算：HCO3（mmol/l）=0.03PCO2（mmHg）10pH-6.13山羊瘤胃酸中毒血气分析实验记录表 山羊编号： 体重（kg）： 性别： 年龄： 毛色： 其他特征：日期时间TPR血液学变化临症表现PO2pHPCO2HCO3HbPCV采食瘤胃蠕动粪便其他4颈动脉“皮桥”手术 （1）器械 常用手术器械一套 （2）麻醉 局部浸润麻醉 （3）保定 侧卧保定，固定头部 （4）术式 在左侧或右侧颈部上13和中13交界处，沿颈动脉平行方向作切口，长约35cm，切开浅筋膜及颈皮肌，用创钩扩张创口，钝性分离，在颈静脉内侧找到颈动脉，注意不要损伤颈静脉和神经，尽量分离动脉周围的结缔组织，将颈动脉引出（图8-1），在其下方缝合肌肉组织，使颈动脉暴露在皮肤下方最后施行圆枕缝合，皮肤切口进行假缝和，并盖上纱布。5.注意事项 手术要严格消毒，术后要加强护理，防止术部感染。图8-1 暴露颈动脉实验九 缺 氧（一） 试验目的1. 掌握复制乏氧性、血液性、组织中毒性缺氧动物模型的方法，并了解不同类型缺氧的发生发展过程。2. 观察不同类型缺氧时，动物呼吸，皮肤及血液色泽等变化特点。（二） 实验原理 环境缺氧，血红蛋白变性或组织细胞氧化酶受到抑制，可使机体因氧吸入不足、氧运输障碍或利用障碍而发生缺氧。由于各型缺氧的发病环节不同，机体所表现出的缺氧症状也不一致。（三） 实验动物 体重20g以上的小白鼠4只。（四） 实验器材与药品 钠石灰（NaOH.CaO）或20NaOH溶液，甲酸（HCOOH），浓硫酸，3亚硝酸钠，1美蓝，0.1氰化钾（或氰化钠），0.9NaCL溶液。 小鼠缺氧瓶1只（100250ml带塞的锥形瓶或广口瓶（图9-1），瓶内最好放一个架空的尼龙网，以防止小鼠接触NaOH），带塞广口瓶1只，500ml烧杯2只，CO发生装置（图9-2），5ml吸管2支，1ml注射器4付，酒精灯1个，剪刀，镊子。图9-1 小白鼠缺氧瓶 图9-2 CO 发生装置（五）实验方法1.乏氧性缺氧（1）将小白鼠称重后放入盛有钠石灰（5g左右，用单层纱布包好）或20NaOH（15ml）的缺氧瓶内，确保小白鼠在尼龙网上，不受NaOH浸蚀。瓶内钠石灰或NaOH吸收小白鼠呼出的CO2和水蒸气，以保证缺氧瓶内空气的氧分压逐渐降低，而又不伴有CO2浓度升高，从而复制出空气稀薄型乏氧性缺氧。NaOHCaOH2OCO2NaH CO3Ca(OH)2（2）观察小白鼠的呼吸频率（次10秒）、幅度、形式；活动状态；唇、爪、尾的皮肤颜色，然后将瓶盖塞紧，防止一切漏气的可能，记录时间，注意观察并记录小白鼠上述各项指标的变化，直至死亡，如出现其他变化亦随时记录，计算小白鼠存活时间。注意勿打开缺氧瓶。（3）参照实验一，立即测定小白鼠的总耗氧量。（4）小白鼠尸体留待血液性缺氧、组织中毒性缺氧实验结束后，一同剖检比较。2.血液性缺氧以一氧化碳（CO）中毒及亚硝酸钠中毒，致血红蛋白（Hb）携氧能力降低，复制血液性缺氧。A、 一氧化碳中毒性缺氧CO与Hb结合形成碳氧血红蛋白（HbCO），使Hb失去结合氧的能力。（1）参照图9-2装好CO发生装置。（2）将小白鼠放入广口瓶内，观察小白鼠各项指标（同乏氧性缺氧），盖上连接CO发生装置的瓶塞，打开瓶盖上一侧胶管开口，以防瓶内小白鼠发生乏氧性缺氧。（3）取3ml甲酸放入试管内，再沿管壁缓慢加入2ml浓硫酸，立即盖紧试管胶塞，并打开通向装小白鼠广口瓶的胶管夹子，使试管内产生的CO进入广口瓶。为使CO顺利进入广口瓶，可在瓶盖另一胶管开口处接一个注射器，缓慢抽出广口瓶中空气。 H2SO4HCOOH H2O + CO 如果CO产生太慢，可用酒精灯稍加热，但不可过热甚至使管内液体沸腾，因CO产生过多过快 ，可使小白鼠突然死亡而不出现典型的CO中毒性缺氧症状，还可致试管炸裂浓酸溅出灼伤实验人员，所以务必注意。（4）通CO后，注意观察并记录小白鼠各项指标（同前），直至小白鼠死亡。（5）小白鼠死亡之后，将广口瓶盖上两胶管夹紧，取下产CO的试管移至室外或浸入大水盆中，将广口瓶移至室外，打开瓶盖使瓶内CO散去，小白鼠尸体留待剖检。 B、亚硝酸钠中毒性缺氧亚硝酸钠（NaNO2）使亚铁血红蛋白（Hb-Fe2+）氧化成高铁血红蛋白（Hb-Fe3+）而失去携氧能力。（1）分别取两只体重相近的小白鼠（20g以上），放在500ml的烧杯内，观察各项指标（同前）。（2）别给两鼠腹腔注入3亚硝酸钠0.3ml，然后立即给其中一只腹腔注入1美蓝溶液0.3ml，给另一只腹腔注入生理盐水0.3ml。（3）注意观察两只小白鼠的各项指标（同前）。比较两鼠的表现及死亡时间。留下注生理盐水的小白鼠尸体最后剖检。此实验中美蓝的还原作用是由于氧化型美蓝在还原型辅酶（NADPH）脱氢酶作用下，接受2H+ 转变成还原型美蓝的结果：美蓝起递氢体作用，故如果注入美蓝过多，可因NADPH产生不足，而氧化型美蓝又将Hb-Fe2+上的电子夺走，使其形成Hb-Fe3+，从而加重NaNO2的毒性作用，因此实验中应注意美蓝的用量。3. 组织中毒性缺氧氰化物进入体内释出CN，易与细胞内氧化型细胞色素氧化酶中的Fe3+结合，形成氰化高铁细胞色素氧化酶，从而失去传递电子的功能，呼吸链中断，引起细胞内窒息，造成组织中毒性缺氧。（1）取一只小白鼠置于500ml烧杯内，观察其各项指标（同前）。（2）给该小白鼠腹腔注入0.1氰化钾（或氰化钠）0.2ml。（3）观察各项指标（同前），直至小白鼠死亡。4. 剖检对比 将以上乏氧性缺氧，血液性缺氧及组织中毒性缺氧致死的小白鼠，依次放在小盘内，对比它们的嘴、爪、眼球、尾的色泽；然后沿腹正中线剪开各鼠的腹、胸腔，对比肌肉、血液、肝、脾、心脏色泽。（六） 实验注意事项 1缺氧瓶要严密不漏气，如室温过低，最好将缺氧瓶置于22水浴内，因为漏气或温度过低都会使小鼠死亡时间延长，影响实验时间。 2氰化钾（钠）有剧毒，勿沾染皮肤、粘膜，特别是有破损处，试验后一定要将器具洗涤干净。 3小鼠腹腔注射时，应稍靠左下腹，勿损伤肝脏，但也要避免将药液注入肠腔或膀胱。 （七） 讨论 不同类型缺氧致死的小白鼠所观察的各项指标变化有何不同？为什么？实验十 发热与过热（一）实验目的 通过复制发热与过热的动物模型，观察发热和过热时体温、皮温的变化规律，搞清发热和过热的概念及其区别。（二）实验原理 体温升高可以是发热，也可以是产热和散热之间的不平衡所致，两者在理论上和表现上是有区别的。本实验通过注射内生性致热原引起的发热和散热障碍引起的过热，观察两者体温和皮温变化规律及其关系，比较其异同，探讨其机理。（三）实验动物 成年家兔2只。（四）实验器材与药品 内生性致热原生理盐水溶液，凡士林，半导体温度计，体温表，婴儿秤，小棉垫，灭菌除污染的10ml注射器及7号针头，坐标纸。（五）实验方法 1取体重相近的家兔2只，分别称重。 2分别用体温表测直肠温度，用半导体温度计测两耳皮温，每15分钟一次，共3次。 3将一只家兔从耳缘静脉注入内生性致热原生理盐水溶液，剂量：5mlkg。注射后，每隔15分钟测直肠温度、耳皮温一次，并观察两耳血管状态、呼吸等，持续2小时。 4将另一只家兔固定在40的恒温兔台上，盖上棉垫（将头露出）。每隔15分钟测直肠及耳皮温一次，并观察耳血管、呼吸等状态，持续1.5小时。 5揭去棉垫，停止加热，并将兔放开，再每隔15分钟测直肠及耳皮温一次，观察耳血管、呼吸等变化，持续30分钟。 6实验结果观察指标实验项目体重（Kg）注射量（ml）温度部位实验前处理后12312345678注射内生性致热原的兔左耳右耳直肠加温兔左耳右耳直肠（六）实验注意事项 1测直肠温度时，体温表头上应涂少许凡士林。每次插入直肠内的深度应一致，一般以5cm为宜。 2测耳皮温的位置应固定。 3注射内生性致热原的兔切忌捆绑。（七）讨论 以时间为横坐标，温度为纵坐标，画出两兔耳皮温和直肠温度的变化曲线，比较两者有何区别？为什么？ 附录：内生性致热原生理盐水溶液的制备方法1. 取体重2kg以上的家兔1只，仰卧固定于兔台上，于下腹部剃毛消毒。在下腹正中避开膀胱处。向腹腔滴注（每分钟约2ml）无污染生理盐水，每公斤体重100ml。为防止感染，每毫升生理盐水中加入青霉素60单位，链霉素0.8mg。2. 滴注完毕，兔继续固定4小时，然后将腹腔液吸入经热原处理的瓶内，储存于冰箱中（4）备用。实验十一 组织胺在急性炎症中的作用（一）实验目的 给大鼠局部直接注射组织按，观察注射部位血管通透性的变化，了解炎症介质在急性炎症发生中的作用。（二）实验原理 各种不同的致炎因子作用于机体局部时，可引起基本上一致的炎症反应。这是因为，致炎因子是通过一系列化学介质的中介而引起炎症各个阶段的各种现象。组织胺是急性炎症血管通透性升高第一相的主要化学介质，其作用迅速成一过性经过。组织胺能使小静脉收缩，造成微静脉内皮细胞之间形成裂隙，从而使小静脉的通透性升高。血管直接受到损伤（如热烫），则从微动脉到微静脉均可出现血管通透性升高的反应，持续时间较长，此为速发延续性血管通透性反应。（三）实验动物 成年雄性大白鼠2只。（四）实验器材与药品 乙醚，0.1组织胺生理盐水，0.85NaCL，10%中性福尔马林，酒精，甘油，D、P、X封固剂，剪毛剪1把，手术刀1把，眼科镊2把，动脉夹4只，1ml注射器4付，蜡盘2个，显微镜，恒温水浴箱。（五）实验方法 1取雄性大白鼠1只，乙醚麻醉。二侧睾丸部位剃毛，消毒。 2大鼠尾静脉内注射印度墨汁0.1ml，2分钟后，左侧睾丸注射0.04ml组织胺溶液；对侧睾丸注射同量0.85NaCL。 330分钟后将大鼠扑杀并用提睾肌制成标本，在显微镜下观察血管的变化。 4另取1只雄性大白鼠，乙醚麻醉。二侧睾丸部位剃毛，消毒。 5用加热的金属片（54）在左侧睾丸表面造成一个小的烫伤。烫伤后立即尾静脉注射印度墨汁0.1ml。30分钟后，用提睾肌制成标本，显微镜下观察血管的变化。（六）实验注意事项 1整个实验过程，应使大白鼠一直处于麻醉状态。 2用54金属片烫伤睾丸时，要使金属片烫睾丸约30秒钟。（七）讨论 1显微镜下，注射组织按和注射0.85NaCL睾丸提睾肌标本血管通透性有无变化（主要看血管周围有无墨汁颗粒出现）？为什么？2显微镜下，直接烫伤和未烫睾丸提睾肌标本的血管通透性变化如何？为什么？3. 显微镜下，仔细观察注射组织胺和直接烫伤睾丸提睾肌标本，主要是哪一种血管通透性有变化（动脉、静脉或毛细血管）？为什么？附提睾肌标本的制备方法 1迅速去除阴囊皮肤，用动脉夹夹住阴囊根部，在动脉夹以上切除睾丸。连同动脉夹、睾丸一起固定于10中性福尔马林中46小时。 2将提睾肌分离出来，用眼科镊剔除结缔组织，修整成2平方厘米大小的膜状提睾肌，并铺在蜡盘上，周围用大头针固定。在福尔马林中固定24小时。 3. 用70、90、95和100%酒精逐级脱水，甘油透明，D、P、X封固作镜检。实验十二 兔的急性DIC（一）实验目的 通过DIC动物模型的复制，观察急性DIC各期血液凝固性的变化，并讨论这些变化的原因，初步了解DIC的有关实验室检查。（二）实验原理 在凝血活酶、钙等因子的作用下，凝血酶原转变成凝血酶。当凝血活酶大量生成时，血液便处于高凝状态，出现弥漫性血管内凝血（DIC）。由于大量的凝血酶原被消耗，血液又处于低凝状态，并产生继发性纤溶，从而出现弥漫性出血。这即是DIC从高凝低凝出血的不同发展阶段。本实验用组织凝血活酶代替血液凝血活酶，观察DIC不同时期的血液凝固性变化。（三）实验动物 体重2kg以上的健康家兔。（四）实验器材与药品显微镜，离心机，光电比色计，恒温水浴箱，秒表，血细胞计数板，50ul微量加样器，动脉夹，注射器，血红蛋白吸管，试管，试管架，1普鲁卡因，3.8枸橼酸钠溶液，血小板稀释液，1硫酸鱼精蛋白，P试液，肝素，兔脑凝血活酶浸液。（五）实验方法1 取肝素抗凝管和3.8枸橼酸钠抗凝管各4支，分别编号。2 将实验家兔称好体重后，固定于兔台，颈部剪毛消毒。3 用1普鲁卡因局部麻醉，作颈部手术。分离颈总动脉及颈外静脉，分别在颈总动脉及颈外静脉插管，用线固定塑料插管。颈总动脉插管用以采血样本，颈外静脉插管用以滴注兔脑凝血活酶浸液。4 从颈动脉插管放血，分别在肝素抗凝管内放入1.5ml，在枸橼酸钠抗凝管内放入3ml，然后将2支试管上下颠倒混匀，注意不要震荡。以3000转分的速度离心10分钟，分离血浆，并将血浆分别吸到已编好号的另一试管内。肝素抗凝管内血浆用以测定纤维蛋白原，枸橼酸钠抗凝血浆用以测定凝血酶原时间（PT），凝血酶时间（TT），血浆鱼精蛋白副凝试验（3P实验）。在上述取血的同时，取兔血一大滴，用作血小板计数。5 将已在37水浴中温热过的兔脑凝血活酶浸液，按每公斤体重810ml的剂量（浓度20mgml），从颈外静脉插管内缓慢滴入，要求在1小时内滴完，前半小时较均匀地滴注总量的25，后半小时滴注总量的35。6 分别在滴注兔脑凝血活酶浸液开始后30分钟、60分钟和120分钟时采血样，方法均同4。7 按附录方法，进行血小板计数、凝血酶原时间、凝血酶时间、纤维蛋白原含量及血浆鱼精蛋白副凝固试验的测定。8 实验完后，将动物处死，解剖。观察：血液凝固性的变化，血液是否不易凝固？有无出血？并将内脏做成病理切片，而后在镜下观察病理组织学变化。9 结果记录兔体重： kg测定项目BPC（个/mm3）PT（秒）TT（秒）3P试验纤维蛋白原（mg%）注凝血活酶前注凝血活酶后30分60分120分（六）实验注意事项 1在作颈动脉和颈外静脉插管时，应先用生理盐水充满塑料管后再插入，以避免空气进入动物体内。 2每次采血样前，应先放掉塑料管中的生理盐水和最初的12滴血。采血样后，也要用生理盐水冲洗塑料管，以防管内凝血，但应注意不要使用抗凝剂，以免影响测试数据。 3兔脑浸出液滴注速度与实验成败关系极大。原则是“先慢后快”，切忌过快。 4实验用分离的血浆如暂不使用，可置4冰箱保存，时间不宜过长，一般不长于4小时。（七）讨论 将实验中不同时期所采血样的测试指标加以比较，并分析其变化的原因。附录：一、 血小板计数（BPC） 1材料 小试管（0.68cm），血红蛋白吸管，血小板稀释液（草酸铵稀释液）。 草酸铵稀释液配方： 草酸铵 1.0g 蒸馏水 加至100ml 再加EDTA 14mg 40甲醛 0.1ml 以上溶液过滤即可。2.方法(1)试管中加0.38ml血小板稀释液。（2）取血20mm3，轻轻吹入上述试管底部，混匀。（3）静置35分钟，待红细胞溶解后再摇匀，然后滴入计数室中。（4）将计数盘置于湿润的平皿内（以免蒸发干燥）15分钟左右，待血小板沉下后进行计数。（5）计数5个中方格（共80个小方格）内的血小板数。一般取四角及中间的中方格。计数应按小方格顺序进行。将结果乘以1 000，即得每mm3血中血小板数。3注意事项（1）所有器皿必须干净。摇动试管要轻，以减少血小板的破坏。（2）计数时将显微镜的聚光镜光圈缩小，使视野略暗，以便看清血小板的折光。 二、凝血酶原时间（PT）1材料 小试管（0.68cm），刻度吸管，秒表，恒温水浴箱，P试液（200mg兔脑粉，加入5ml生理盐水，充分混匀后放入37）恒温水浴箱内孵育15分钟，再加入等量的0.025M氯化钙溶液，用前摇匀）。2.方法 （1）取备检血浆0.1ml，置于小试管内，放入37水浴中。（2）吸入P试液0.2ml,同时开动秒表，5秒钟后，从水浴中取出，轻轻地侧动，直至液体停止流动或出现细颗粒时，即为凝固终点。记录凝固时间 被检血浆+P试液 开动秒表 0.1ml 0.2ml （3）重复三次，取平均值。三、凝血酶时间（TT）1材料 凝血酶悬液，秒表，恒温水浴箱，刻度吸管，小试管。2方法（1）取被检血浆0.2ml ，放置小试管内，放入37水浴中。（2）吹入粗制凝血酶悬液0.2ml，同时开动秒表，记录凝固时间。记录凝固时间 被检血浆+凝血酶悬液 开动秒表 0.2ml 0.2ml （3）重复3次，取平均值。四、血浆鱼精蛋白副凝固试验（3P试验）1材料 恒温水浴箱，0.1ml及1ml 吸管，1%鱼精蛋白。2方法（1）取血浆0.5ml放入小试管内，37温育3分钟后，加入1%鱼精蛋白液0.05ml，充分混匀，再于37温育15分钟（2）取出试管，轻轻倾斜，在强度适宜的光照下，观察有无不溶物质。（3）结果判断强阳性（+）出现纤维蛋白丝，纤维蛋白网或有胶冻物形成。阳性（+）出现粗的颗粒状沉淀。可疑阳性（）出现细的颗粒状沉淀。阴性（-）无不溶物质，标本清亮。五、 纤维蛋白原定量测定（一）饱和氯化钠法1材料 分光光度计，恒温水浴箱，12100mm试管，刻度吸管，饱和氯化钠，生理盐水。2方法（1）取血浆0.5ml,置12100mm的试管中，加入饱和氯化钠溶液4.5ml，充分混匀，置37水浴中3分钟，取出后再次混匀。（2）以生理盐水代替饱和氯化钠溶液，进行同样操作，作对照。（3）在520nm，以对照管调零点，测定光密度。（4）计算纤维蛋白原含量mg% =测定管光密度0.51 000 （二）双缩脲法1材料 15ml试管，刻度吸管，分光光度计。12.5%亚硫酸钠溶液：取无水亚硫酸钠12.5g，溶解于蒸馏水中，并稀释成100ml,必要时过滤。双缩脲试剂：以适量蒸馏水分别溶解硫酸铜1.5g及酒石酸钾钠6g，过滤后倾入1 000ml容量瓶内混合，加入无碳酸盐的10%氢氧化钠溶液300ml，以蒸馏水稀释至1 000ml。此试剂可长期保存，如出现暗红色沉淀物，应弃之。标准血清。2. 方法（1） 测定管 在离心管内，准确加入血浆0.5ml，12.5%亚硫酸钠溶液9.5ml，混匀后置于37水浴内10分钟，取出，以每分钟3000转离心10分钟，弃去上清液，保留沉淀。再加入12.5%亚硫酸钠溶液约10ml，用玻棒将沉淀块搅和分散。再离心沉淀，弃去上清液，将离心管置于滤纸上，流尽管内液体，然后加入生理盐水1ml，充分混合，再加双缩脲试剂4ml混合，置37水浴中15分钟，与标准管比色。（2） 标准管 标准血清（已知含量）0.05ml，加生理盐水1ml，混匀，再加双缩脲试剂4ml，混匀后于37水浴中15分钟。（3） 空白管 生理盐水 1ml，双缩脲试剂 4ml，混匀后于 37水浴中15分钟。（4） 用540nm比色，以空白管调零点，记录各管读数。（5） 计算 测定管光密度标准管光密度标准管蛋白质浓度10=血浆纤维蛋白原（g/100ml） 实验十三 黄 疸（一）实验目的 复制黄疸病理模型，观察黄疸的表现及胆色素代谢的变化。（二）实验原理 正常情况下，体内的胆色素在生成、结合和排泄三个主要环节上保持着动态平衡，但当其中任何一个环节发生障碍（如生成太多、结合障碍或排泄受阻）时，都会引起胆色素代谢障碍，从而出现黄疸。（三）实验动物 白色家兔 3 只。（四）实验器材与药品兔固定台，一般手术器材，5ml 及 2Oml 注射器，2ml 试管，1Oml 离心管，试管架，移液管，离心机，导尿管，生理盐水，95% 酒精，1% 普鲁卡因，0.25 腆醇溶液，重氮试剂，各种浓度重铬酸钾溶液标准管，1% 盐酸苯肼溶液，四氯化碳溶液。（五）实验方法分阻塞性黄疸、溶血性黄疸和肝细胞性黄疸三个实验内容进行。一、 阻塞性黄疸1. 实验前检查及总胆管阻塞病理模型复制（1）实验前 3 天，取白色家兔 1 只，观察记录动物的一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳及皮肤的颜色。（2）从耳缘静脉采血 3-5 ml， 放入干燥离心管内，凝血后离心（2000 转/分），分离血清 ，进行胆红素定性和黄疸指数检测。（3 ）用导尿管导尿 3-5m1，测定尿中胆红素。上述各种测定结果作为实验对照。（4 ）将兔仰卧固定于兔台上，在上腹部剪毛、消毒 ( 按手术常规)，铺盖创巾，露出手术部位，用 1% 普鲁卡因局部浸润麻醉，在右侧肋缘后距正中线 1-1.5cm 处，纵行切开皮肤 6-8cm，剪开腹壁肌肉和腹膜，打开腹腔，将胃向左推移，沿幽门向下找到十二指肠壶腹部，在其右侧即可见到黄色透明的总胆管，细心剥离后，在其下穿线结扎，然后分别缝合腹膜、肌肉和皮肤，用消毒敷料包扎伤口，注意护理，防止感染，必要时可注射适量青霉素。2. 实验检查（l）3 天后，观察动物的一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳及皮肤的颜色，与手术前比较。（2 ）从心脏采血 15-2Om1，按前述方法分离血清，进行胆红素定性和黄疸指数检查；再用导尿管导尿 5-10ml，检测尿中胆红素。胆红素定性一凡登白试验原理：胆红素与重氮试剂作用发生重氮反应，形成红色的重氮胆红素。因血浆中的结合胆红素可溶于水，与重氮试剂作用后呈现红色，称此为直接反应阳性；游离胆红素因不能与重氮试剂直接作用， 故呈阴性反应，但加乙醇后游离胆红素则能与重氮试剂作用，呈现阳性反应，称为间接反应阳性。方法：取血清 0.2ml 放入小试管内，沿管壁加入新配制的重氮试剂0.5ml，立即计时（用秒表或手表）和进行观察。如在30秒至10分钟内试剂与血清交界处出现紫红色环，为直接反应阳性；如经 10 分钟仍不显色，当加入 95% 酒精 0.2ml 后才显色者，则为间接反应阳性。黄疸指数测定原理：血清黄色的深浅与其胆红素含量有关。临床检验规定 0.01% 重铬酸钾溶液的色度作为黄疸指数1，将血清用生理盐水稀释，肉眼观察其黄色深度与0.01% 重铬酸钾溶液相当时，血清的稀释倍数即为该血清的黄疸指数。 标准管单位所用生理盐水毫升数0.1方法：取血清0.1ml置于小试管内，所用试管应与标准管口径及厚度一致，用 1m1 吸管吸取生理盐水溶液稀释血清，当与某一标准管颜色的相同时，计量所用生理盐水毫升数，再按公式求出黄疸指数单位：0.1黄疸指数 =另法：取血清 0.1ml置于小试管内,加入生理盐水0.4ml 或0.9ml时,混合后与一系列标准管进行目测比色,与稀释血清色度相同的标准管黄疸指数乘以稀释倍数(5 或 10 ),即为该血清的黄疸指数。尿胆红素定性试验取尿液 1-2m1放入小试管内,沿管壁轻轻滴入0.2%腆醇溶液 1-2ml (Smith腆环试验)或沿管壁滴入少量浓硝酸(格梅试验),浮盖于尿液面上,使成两层,切勿摇混,如有胆红素存在，胆红素即被氧化成胆绿素等衍生物，则在两液面接触处出现绿色环，即为阳性。63黄疸实验记录表实验类别阻塞性黄疸溶血性黄疸肝细胞性黄疸实验动物检测时间实验前实验后实验前实验后实验前实验后一般状态颜色巩膜口腔粘膜耳皮肤定性胆红素血清直接反应间接反应血清黄疸指数尿胆红素定性其他六、注意事项1. 本实验的血清检查和尿胆红素试验以采用同一动物实验前后自体对照为最好，若无条件也可采取异体对照（另用一只对照白兔）。2. 为了取得足够的尿量，可在导尿前给家兔输注 5% 葡萄糖溶液 50ml/kg。七、 讨论将检测结果进行比较，并分析其原因。附注：1. 试剂配制（1）重氮试剂（凡登白试验试剂）甲液：取对-氨苯磺酸 1g，浓盐酸 15m1，加蒸馏水至 1 00Om1。乙液：取 50% 亚硝酸钠液（亚硝酸纳 25g，加蒸馏水至 50 m1 时，置冰箱中保存）0.5 m1，加蒸馏水5Om1，此液可用1周。临用前，取甲液5 m1，加乙液0.15 m1混合，在3小时内有效。（2）黄疸指数标准管制备0.1%重铬酸钾溶液：精确称取重铬酸钾（A.R.）0.1g，置于100ml容量瓶内，加蒸馏水约9Om1使其溶解，加浓硫酸0.1m1，再加蒸馏水至100m1 。取10ml试管10只，按下表操作： 黄疸指数12345678910 0.1%重铬酸钾溶液（ml）12345678910 蒸馏水（ml)9876543210各管混合后，分别吸取和装入 10 只内径（不超过 1cm ）与厚度相同的无色小试管内，密封管口，标明黄疸指数，备用。三、 溶血性黄疸1. 实验前检查及溶血性黄疸病理模型复制（1）实验前 3 天，取白色家兔一只称重，观察记录动物的一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳及皮肤的颜色。（2）从耳缘静脉采血 3-5m1，放入干燥离心管内，血凝后离心分离血清，进行胆红素定性和黄疸指数测定，再用导尿管导尿 3-5m1，检查尿胆红素。（3）给家兔耳缘静脉注射 1% 盐酸苯肼（按每公斤体重 2m1），造成溶血。2. 实验检查（1)实验（注射苯肼 2-3 天后）时，观察动物的一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳及皮肤的颜色 , 与实验前比较有何变化。（2）从心脏采血 15-2Om1，分离血清，再用导尿管导尿 5-1Om1，分别进行血清胆红素定性，黄疸指数及尿胆红素的测定（方法同前）。3. 讨论分析检测结果，并与其他两种黄疸进行比较。四、 肝细胞性黄疸1. 实验前检查及中毒性肝损伤病理模型复制(1)实验前 3 天，取白色家兔 1 只称重，观察记录其一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳及皮肤的颜色。（2）从耳缘静脉采血 3-5ml，放入干燥离心管内分离血清，再用导尿管导尿 3-5m1，分别进行血清胆红素定性、黄疸指数及尿胆红素测定。（3）给家兔用胃管投灌四氯化碳溶液 2ml/kg，造成肝细胞损伤。2. 实验检查（1）投药后 3 天进行实验时，观察动物的一般状态和巩膜、口腔粘膜、耳和皮肤的颜色，与实验前比较有何差异。(2)从心脏采血 15-2Om1，分离血清，再用导尿管导尿 5-1Oml，分别检测血清胆红素、黄疸指数及尿胆红素（方法同前）。3. 讨论分析检测结果，并与其他两种黄疸进行比较。实验十四 急性心机能不全（一）实验目的复制急性心机能不全动物模型。了解心机能不全的发病机理 , 观察心机能不全时血液动力学的主要变化。（二）实验原理右心室的前负荷或后负荷过度增加，都会发生右心衰竭。本实验用注射过量生理盐水和注射栓塞剂的方法，造成家兔的急性右心室前、后负荷增加，从而发生急性右心衰竭。通过测定其在心衰过程中血液动力学的变化 , 进一步理解心机能不全的发生及发展。（三）实验动物 健康家兔 1 只。 （四）实验器材与药品兔台 1 只，小动物手术器械 1 套，血压及呼吸描记装置，血气酸碱分析仪，中心静脉压测定装置 1 套，输液装置 1 付，婴儿秤，1%普鲁卡因溶液，1% 肝素生理盐水溶液，生理盐水，液体石蜡。（五）实验方法1. 将家兔称重后，仰卧固定于兔台上。2. 颈动脉插管 颈部剪毛、消毒。从正中皮下注射 1% 普鲁卡因作浸润麻醉后，做颈部正中切口，逐层钝性分离，游离左侧颈总动脉 2-3cm，其下穿入两根丝线，结扎近头端，近心端以动脉夹夹闭。在结扎端稍下方用眼科剪将动脉壁剪一小斜口，插入动脉导管，用线结扎固定，然后连于血压描记装置。3. 颈静脉插管 分离一侧颈外静脉，其下穿入丝线两根，结扎近头端，在其稍下方剪 一小斜口，插入充满生理盐水的塑料导管 5-6cm，结扎固定并连于中心静脉压测定装置。 观察测定管液面有无波动。如无波动，表明导管不通，可用少许生理盐水冲洗或将导管稍加旋转，进退，直至液面出现波动为止。4. 分离另一侧颈外静脉，同样作静脉插管并连以输液装置。5. 气管插管 分离气管，其下穿一根线，用眼科剪在气管上作 T 形切口，插入气管套管，并用线结扎固定，连以呼吸描记装置。6. 观察并记录实验前各项指标 描记一段血压、呼吸曲线，测定中心静脉压，从耳中动脉隔绝空气抗凝采血 lml，作血气和酸碱指标测定。7. 用已预热至 38的液体石蜡，按每公斤体重 0.5ml 的量，从耳缘静脉缓慢注入。注射时，注意观察呼吸、中心静脉压和血压的变化，当中心静脉压开始上升或/和血压开始下降时，即停止注射。观察 5-10 分钟，如仍恢复正常水平可再缓缓注入少量液体石蜡，直至血压有轻度下降或/和中心静脉压有轻度升高为止(一般液体石蜡用量不超过0.5ml/ kg)。8. 注射栓塞剂后 5 分钟,再测各项指标一次。9. 以约每分钟 10ml 的速度,输入生理盐水。输液量每增加 5Om1,测各项指标一次。直至动物死亡。10. 动物死亡后，挤压胸壁，观察气管内有无分泌物溢出。剖开胸、腹腔（注意勿损伤血管和脏器），观察胸、腹腔有无积水，脏器有无淤血水肿，心脏大小。最后剪开心腔观察心脏各腔体积，测量左右心室壁厚度。切开肺脏并挤压，观察有无水分挤出。11. 结果记录 观察指标实验阶段血压（mmHg）呼吸（次/分）中心静压（mmH2O）血 气 分 析P02（KPa）pHPC02(KPa) HCO3-(mmol/l) 正常 注蜡后 输液后 剖检所见(六) 实验注意事项1. 用液体石蜡作栓塞剂时，注射速度一定要慢，控制在 0.1-0.2ml/ 分，且一定要事先给液体石蜡和注射器加热，以降低液体石蜡粘稠度，使其在进入血液后易形成小栓子。2. 若输液量已超过每公斤体重 200ml，而动物各项指标变化仍不显著时，可再补充注入栓塞剂。（七）讨论1. 试述本实验家兔发生心机能不全的原因及机理。2. 实验中观察到的哪些变化是由心机能不全引起的？其机理是什么？实验十五 实验性呼吸机能不全（一）实验目的通过急性上呼吸道不全阻塞、闭合性气胸以及肺水肿等呼吸机能不全动物模型的复制，观察动物呼吸、血压以及血气分析指标的变化，认识呼吸机能不全的基本发病机理和对机体的影响。（二）实验原理肺通气障碍、换气障碍以及通气血流比例失调等因素均可引起呼吸机能不全。阻塞性通气障碍和肺泡通气血流比失调是呼吸机能不全的常见病因。本实验通过复制上呼吸道的不全阻塞、闭合性气胸和肺水肿，造成家兔的呼吸机能不全，观察和测定各种不同原因引起的呼吸机能不全时，其内环境变化的异同，进一步了解呼吸机能不全的发生及发展。（三）实验动物 健康家兔 1 只。 （四）实验器材与药品兔台 1 只，兔急性手术器械 1 套，1m1、2ml、lOm1、5Oml注射器，6 号、9 号、16号针头，橡皮塞，呼吸和血压描记装置，血气酸碱分析仪，1% 普鲁卡因溶液，每毫升含 1 000 单位的肝素生理盐水溶液，生理盐水，10% 葡萄糖液。（五）实验方法1. 动物固定 家兔称重后，仰卧固定于兔台上。2. 记录呼吸 颈部剪毛消毒，1% 普鲁卡因局部麻醉，切开颈部正中皮肤，分离出气管，并插入气管套管 , 其一端接以呼吸描记装置，另一端装上一长约 4-5cm 的乳胶管。3. 记录血压 分离一侧颈总动脉，结扎离心端，向心插入一充满抗凝剂的动脉插管，并连以血压描记装置。4. 耳中动脉隔绝空气抗凝采血 1ml，作血气分析。5. 描记一段正常血压和呼吸曲线。6. 复制上呼吸道不全阻塞 用止血钳将Y形气管插管上端侧管所套乳胶管夹闭三分之二，或在完全夹闭的乳胶管上插 2 根 9 号针头，造成动物的不全窒息 8-10 分钟，取动脉血作血气分析并观察血压和呼吸的变化。7. 放开止血钳 10 分钟，待动物恢复正常。8. 复制气胸 在兔右胸第 4-5 肋间插入一根 16 号针头，造成右侧气胸，5-10 分钟后，取动脉血作血气分析，同时观察呼吸和血压。用 50ml 注射器将胸腔内空气抽尽，拔出针头，立即在针孔处涂上凡士林，以防漏气。9. 等 10-20 分钟，待动物的呼吸恢复到正常。10. 复制肺水肿 将兔头端兔台抬高。用 2ml 注射器吸取 10% 葡萄糖 1-2ml（按动物大小取量），将针头插入气管内，缓慢匀速地将葡萄糖液滴入气管内，造成渗透性肺水肿。 5 -10 分钟后，放平兔台，取动脉血作血气分析，并观察血压和呼吸。11. 用止血钳将气管插管上的乳胶管完全夹闭，直至动物死亡。临死前，取动脉血作血气分析，并记录血压和呼吸。12. 动物死亡后，打开胸腔，注意肺和心脏的变化。13. 结果记录观察指标项目呼吸血压（mmHg）PO2(KPa)pHPCO2(KPa)次/分幅度实验前不全阻塞气胸肺水肿窒息剖检所见（六）实验注意事项1. 作血气分析的血切忌与空气接触，如针管内有少量小气泡，要立即排除。2. 造成气胸以后，胸腔内的空气一定要抽尽。3. 复制肺水肿时，气管内滴葡葡糖液的速度一定要慢，1-2m1 葡萄糖液一般在 5 分钟内滴完。（七）讨论上呼吸道不全阻塞、闭合性气胸、肺水肿时血压、呼吸及血气分析指标有何变化 ? 为什么 ?实验十六 中毒性肾病（一）