试验一蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定

1、实验一蛋白质的两性性质和酪蛋白等电点的测定一、实验目的与要求1. 掌握蛋白质的两性解离性质；2. 熟练掌握测定蛋白质等电点的基本方法。二、实验原理蛋白质是由氨基酸组成的高分子化合物。虽然大多数的a氨基和a羧基成肽键结合，但仍有 N 末端的氨基和 C 末端的羧基存在，同时侧链上还有一些可 解离基团。因此，蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。调节蛋白质溶液的pH，可使蛋白质带上正电荷或负电荷；在某一 pH时，其分子中所带的正电荷和负电 荷相等，此时溶液中蛋白质以兼性离子形式存在。在外加电场中蛋白质分子既不向正极移动也不向负极移动，此时溶液的 pH 称为该蛋白质的等电点，蛋白质的溶解度最小。不同的蛋白质

2、，因氨基酸的组 成不同有不同的等电点。三、实验材料、试剂与仪器1. 材料与试剂NaOH、HC、乙酸、溴甲酚绿、酪蛋白、精密 pH试纸等。0.5 %酪蛋白溶液：0.5 g酪蛋白，先加入几滴1 mol/L的NaOH使其湿润，用玻璃棒搅拌研磨使 成浆糊状，逐滴加入0.01 mol/L的NaOH使其完全溶解后定容到100 mL酪蛋白一乙酸钠溶液： 将0.25 g酪蛋白加5 mL 1 mol/L的NaOH溶解，加20 mL水温热使其完全溶解 后，再加入5 mL 1 mol/L的乙酸，混合后转入50 mL的容量瓶内，加水到刻度， 混匀备用（ pH 应为 88.5）；0.01%的溴甲酚绿溶液：将0.01g溴

3、甲酚绿溶解于100mL含有0.57mLO.lmol/LNaOH的水中。该指示剂的变色范围是：酸性（ pH3.8）为黄色， pH5.4 为蓝色；0.02 mol/L的HCI溶液：将0.8 mL浓盐酸用蒸馏水稀释到 480 mL即可；0.02 mol/L的NaOH溶液：将0.8 g NaOH溶解于100 mL水中，最终加入到 1000 mL；0.1 mol/L 的乙酸溶液：将1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL；0.01 mol/L的乙酸溶液：将0.1 mL冰醋酸用水稀释到170 mL；1 mol/L的乙酸溶液：1 mL冰醋酸（17 mol/L）加水到17 mL即可。2.仪器试管、滴管、移液管、

4、pH 试纸等。四、实验方法与步骤1. 蛋白质的两性反应1 ）取一支干净的试管，加入 20 滴0.5 %的酪蛋白溶液，逐滴加入0.01 %的溴甲酚绿溶液（约 57滴），充分混合，观察溶液的颜色并解释 （蓝色）。2）逐滴加入0.02 mol/L的HC,随加随摇动试管，直到出现明显的沉淀为止，用精密pH试纸测溶液的pH,观察溶液的颜色变化。3）继续加入0.02 mol/L的HCI，观察沉淀的变化和溶液颜色的变化。4）逐滴加入0.02 mol/L的NaOH到上面的溶液中，使溶液的 pH接近中性，观察沉淀是 否形成。5）继续滴加0.02 mol/L的NaOH,观察沉淀的变化。2. 酪蛋白等电点的测定1）取 9 只试管分别编号 19.2）按下表向每管中加入试剂。注意,每种试剂加完后,要振荡试管。3）试剂全部加完后,静置 20 min。4）观察每管内溶液的混浊度,用 “ +、”“-”表示沉淀的多少。5）判断酪蛋白的 pI 是多少？试管号9水/mL2.43.22.03.03.51.52.753.381 mol/LHAc/mL1.60.80.1mol/LHAc/mL4.02.01.00.50.01 mol/L 酪蛋白醋酸HAc/mL2.51.250.62 钠溶液 /mL1 溶液最终的pH3.53.84.14.44.75.05.35.65.9 沉淀多少五、思考题1.何谓