脑缺血后的细胞死亡与神经再生课件

1、脑缺血后的细胞死亡与神经再生脑缺血后的细胞死亡与神经再生 耿德勤徐州医学院附属医院神经科徐州医学院附属医院神经科徐州医学院附属医院脑血管病介入诊疗中心徐州医学院附属医院脑血管病介入诊疗中心E-mail: 2 2脑缺血后的细胞死亡与神经再生3 3脑缺血后的细胞死亡与神经再生徐州地区卒中人群特点统计2600例（2006-2010）4 4脑缺血后的细胞死亡与神经再生Li D, Shao Z, Vanden Hoek TL, et al. Reperfusion accelerates acute neuronal death induced by simulated ischemia J. Exp

2、Neurol,2007,206(2):280-287. 缺血性脑卒中具有发病率高、复发率高、致残率高、死亡率高的特点。脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia and reperfusion injury, CIRI)的防治一直是神经病学领域的重点，有关其相关机制的研究是当今亟待解决的问题，而缺血半暗带的神经细胞凋亡更是研究的热点。脑缺血再灌注后既启动了凋亡信号通路，也激活了抗凋亡信号通路，两者的动态平衡决定了细胞损伤的最终转归。 5 5脑缺血后的细胞死亡与神经再生 脑卒中治疗的新策略中心坏死中心坏死区（区（core）半暗带半暗带（Penumbra）6 6脑缺血后的细胞死亡与神经再

3、生7 7脑缺血后的细胞死亡与神经再生8 8脑缺血后的细胞死亡与神经再生神经再生研究的证据 神经干细胞(neural stem cell,NSCs)是由胚胎早期室管膜上皮产生的一种具有多向分化潜能的前体细胞。干细胞研究的迅猛发展给临床脑卒中治疗带来了巨大的机遇，一些神经性病变和应激能促进干细胞的激活。新近的研究证实，脑缺血可以刺激机体处于应激状态，从而激活室管膜下层等部位的神经干细胞增殖分化。目前已证实成年哺乳动物中枢神经系统内终身存在神经干细胞，其不目前已证实成年哺乳动物中枢神经系统内终身存在神经干细胞，其不断进行少量有丝分裂进行自我复制以补充丢失的神经细胞。在成年哺断进行少量有丝分裂进行自我

4、复制以补充丢失的神经细胞。在成年哺乳动物脑内的海马、脑室下区、大脑皮质、大脑脉络丛、室管膜、纹乳动物脑内的海马、脑室下区、大脑皮质、大脑脉络丛、室管膜、纹状体和嗅球等地方都有神经干细胞；而以侧脑室的室管膜下层状体和嗅球等地方都有神经干细胞；而以侧脑室的室管膜下层（subventricular zone, SVZsubventricular zone, SVZ）和海马齿状回的颗粒下区）和海马齿状回的颗粒下区（subgranular zone, SGZsubgranular zone, SGZ）两个区增殖能力最强。）两个区增殖能力最强。 1Kuge A,Takemura S,Kokubo Y,et

5、 al.Temporal pro neurogenesis in the subventricular zone,dentate gyrus and cerebral cortex following transient focal cerebral ischemia. Neurol Res,2009,31(9):969-976.2Mart-Fbregas J, Romaguera-Ros M, Gmez-Pinedo U, et al.Proliferation in the human ipsilateral subventricular zone after ischemic strok

6、e. Neurology,2010,74(5):357-365.3Kernie SG,Parent JM. Forebrain neurogenesis after focal ischemic and traumatic brain injury. Neurobiol Dis,2010,37(2):267-274. 9 9脑缺血后的细胞死亡与神经再生 神经干细胞的再生、增殖、分化和迁移在时间上和空间上是一个同步协调的过程，最终是否分化成为有功能的正常神经细胞受很多因素的影响。哺乳动物的种属、性别、年龄、遗传和饮食都是影响因素之一，还有脑内微环境中的神经递质、细胞因子、激素水平、神经生长因子等

7、也都参与了神经元再生过程的调节。其中神经因子和激素对再生神经细胞的影响发展最为迅速。 1010脑缺血后的细胞死亡与神经再生神经干细胞治疗缺血性脑卒中的策略 目前，利用神经干细胞来治疗脑卒中可有两种策略： 第一种是外源性神经干细胞移植 第二种为内源性神经干细胞的活化1111脑缺血后的细胞死亡与神经再生外源性神经干细胞移植治疗脑卒中 目前主要分两类，一类是直接利用移植来的神经干细胞替代损伤脑细胞。另一类是移植经过基因修饰的细胞，这些细胞整合了基因编码的细胞因子，这些因子能促进NSCs的增殖、分化和迁移。不同来源的神经干细胞进行移植已经有大量的报道。有学者把体外培养的神经干细胞移植到缺血后的大鼠侧脑

8、室内，观察到移植的神经干细胞能迁徒到缺血区域分化为神经元细胞，从而改善大鼠的运动功能起到替代治疗的作用。 1212脑缺血后的细胞死亡与神经再生Parr等采用体外培养强化绿色荧光蛋白(green fluorescent protein, EGFP)标记的成年大鼠脊髓神经干细胞,再把这种神经干细胞移植到脊髓损伤部位及其头侧或尾侧1 mm脊髓内，实验显示,移植第7天病变部位以外的移植区存活细胞数量明显比其他组增多。Dasari等将人脐血干细胞直接注射到大鼠模型的脊髓损伤部位。结果发现，人脐血干细胞可分化为神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞并且损伤区轴索超微结构正常，新分化的少突胶质细胞能够分泌BDN

9、F和神经营养因子3（neurotrophic factor，NT-3），移植的人脐血干细胞还能促进髓鞘再生，这些都有效改善大鼠脊髓损伤后的运动功能。Parr AM, Kulbatski I, Tator CH. Transplantation of adult rat spinal cord stem/progenitor cells for spinal cord injuryJ. Neurotrauma,2007,24(5):835-45.Dasari VR, Spomar DG, Gondi CS, et al. Axonal remyelination by cord blood st

10、em cells after spinal cord injuryJ. Neurotrauma,2007,24(2):391-410. 1313脑缺血后的细胞死亡与神经再生Ao等证明用嗅神经鞘细胞和神经干细胞联合移植治疗神经损伤能起到良好效果，神经干细胞增殖分化新生神经细胞补充丢失的神经细胞，嗅神经鞘细胞促进髓鞘的形成并且引导轴索延长。从而能让神经细胞轴索顺利穿过胶质瘢痕尽快恢复功能。胡苏华等发现脑出血大鼠脑内移植神经干细胞，在修复过程中血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、层粘连蛋白（laminin, LN）、纤维连接蛋白（fi

11、bronectin, FN）有不同程度的表达增加。结果说明了神经干细胞移植后在局部增殖、迁移并分化成为损伤修复所需神经细胞，同时形成新生微血管, 重建和改善微循环，共同构建新的神经系统统一体，最终重建具有正常功能的神经元网络。陈柏龄等利用Ang-1基因修饰的兔自体骨髓基质细胞 （rabbit mesenchymal stem cells, rMSCs）作为移植源细胞，迁移至脑损伤区分化为神经细胞并能较长期存活；说明MSCs移植与其分泌的Ang-1蛋白有协同作用，共同促进脑梗死后神经功能的恢复。 Ao Q, Wang AJ, Chen GQ,et al. Combined transplanta

12、tion of neural stem cells and olfactory ensheathing cells for the repair of spinal cord injuriesJ. Med Hypotheses. 2007,69(6):1234-7. 胡苏华,刘爱群,武衡. 大鼠神经干细胞脑内移植治疗脑出血的实验研究J.神经损伤与功能重建,2008,3(3):146-149. 陈柏龄,陈东平,张志坚,等. Ang-1基因修饰的骨髓间质干细胞移植治疗脑梗死的实验研究J.中国病理生理杂志, 2009, 25(2): 241-247. 1414脑缺血后的细胞死亡与神经再生此外，新发现

13、的一些激素和神经肽类激素也参与神经细胞再生的调节。Ghrelin是新发现的一种脑肠肽,其能够促进神经细胞分化。Chen等证实脂联素(adiponectin,APN)能通抑制NF-B (p65)的转运而起到抗炎作用，从而对脑缺血再灌注损伤起到有效的保护作用。Lauren A等发现G蛋白耦联受体血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白(putative receptor protein related to the angiotensinreceptorAT1,APJ)的天然配体Apelin能诱导Akt和Raf/ERK-1/2的磷酸化,保护海马神经元对抗N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-as

14、partic acid,NMDA)兴奋性毒性损伤，作为一种内源性神经保护因子保护大脑神经细胞，Cook 进一步证实了这个观点。Chen B, Liao WQ, Xu N, et al. Adiponectin protects against cerebral ischemiareperfusion injury through anti-inflammatory actionJ. Brain research, 2009,1273:129-37. Lauren A, ODonnell,et al. Apelin, an endogenous neuronal peptide, protect

15、s hippocampal neurons against excitotoxic injuryJ. Journal of Neurochemistry, 2007, 102:19051917Cook DR, Gleichman AJ, Cross SA, et al. NMDA receptor modulation by the neuropeptide apelin:implications for excitotoxic injury J. Neurochem,2011, 118:11131123.1515脑缺血后的细胞死亡与神经再生Zhang等认为瘦素（Leptin）增强降钙素基因相

16、关蛋白（calcitonin gene related protein，CGRP8-37）的表达，也可以上调bcl-2 表达和抑制凋亡因子caspase-3。这些联合作用能显著的对抗脑缺血缺氧造成的损伤。盛宝英等证明半乳凝素1可促进大鼠脑缺血损伤后内源性神经干细胞原位增殖，并出现向外周脑实质迁移的趋势。激肽释放-激肽系统可以通过诱导脑缺血区新生血管生成，改善脑缺血缺氧而起到脑保护作用。成纤维细胞生长因子2（fibroblast growth factor 2，FGF2）作为一种丝裂原促进神经干细胞的增殖分化，有效促使脑缺血后脑组织的修复。总之，神经元再生受到诸多因素的影响。 Sum JQ, S

17、ha B, Zhou WH, et al. Basic fibroblast growth factor stimulates the proliferation and differentiation of neural stem cells in neonatal rats after ischemic brain injuryJ. Brain Dev,2009,31(5):331-40.Parr AM, Kulbatski I, Tator CH. Transplantation of adult rat spinal cord stem/progenitor cells for spi

18、nal cord injuryJ. Neurotrauma,2007,24(5):835-45. 1616脑缺血后的细胞死亡与神经再生 自体神经干细胞的来源是一大难题。Medici证明血管内皮细胞转变为多能样干细胞，这就为干细胞移植来源提供了理论依据。也有学者尝试利用携带外源性基因的神经干细胞来建立永生化的中枢神经干细胞系，从而解决干细胞来源难题，但外源基因的可控性、稳定性、安全性、同源程度及与转化相关的变化尚未很好的解决。 1717脑缺血后的细胞死亡与神经再生 虽然目前胚胎干细胞、神经干细胞在体外培养中都可以分化为神经细胞，但是分化成人们所设计的特定神经细胞的比例并不高，而且每次人工诱导分化

19、都会存在一定程度的差异，无法做到产出的神经细胞完全均一；并且移植的神经干细胞在形态上的成活并不标志着一定就具有了功能，因此有作者担心，将没有统一标准的并不稳定体外培养的神经干细胞直接移植给患者，可能会带来灾难性的后果。干细胞移植有可能导致肿瘤已经为多数人认同，并成为干细胞研究关注的焦点之一。理论上认为只要具有分裂增生能力的细胞植入动物体，一旦无限制的生长，就具备形成肿瘤的可能。现有研究证实成熟度相对高的神经干细胞移植后同样具有较高的致瘤性。 1818脑缺血后的细胞死亡与神经再生内源性神经细胞再生治疗缺血性脑卒中 目前已知在脑出血、脑缺血、脑外伤、癫痫和神经变性疾病等一些病理条件下会激活内源性神

20、经干细胞分裂增殖。Liu等首次证实短暂性全脑缺血可激发大脑内源性的神经细胞再生，从此掀起研究脑缺血后神经细胞再生现象的热潮。这种神经发生不是一个短暂现象，其至少可以持续4个月之久。动物实验证实一侧局灶性脑缺血后双侧SGZ和SVZ均有神经细胞再生现象，缺血侧比非缺血侧神经细胞再生明显增多，并随时间而增多到缺血后第四周可高达93%，说明了脑缺血损伤程度直接影响神经干细胞的增殖。夹闭大脑中动脉30 min就能引起齿状回区（dentate gyrus,DG）轻度、可变的神经干细胞增殖，而夹闭2 h后则发现DG区新生细胞数明显增多，且其不依赖于海马神经元的凋亡。 1919脑缺血后的细胞死亡与神经再生 在

21、神经细胞信号系统方面也有重大突破。Notch1信号通路被认为是胚胎神经干细胞发育调节的主要因素，Wang等观察到成年大鼠Notch1基因主要表达在新生神经元，而Notch1的配体Jagged 1主要表达在SVZ的星形胶质细胞。脑缺血4-24h可激活Notch1 信号通路NICD (Notch intracellular domain)和下游转录基因Hes1、Shh，相应的SVZ区的细胞增殖，阻断Notch1信号通路也就抑制了脑缺血诱导的神经再生。说明Notch1信号通路在正常的和脑缺血诱导的神经再生中起着关键作用。Wnt家族是神经干细胞调节的另一关键信号通路。刑雪松等研究发现脑缺血再灌注7d

22、wnt-1基因表达最强，与Burd免疫组化结果一致。结果说明wnt-1基因在成人机体处于静止状态，脑缺血后表达，在神经干细胞早期增殖、迁移、分化中起重要调控作用。Castillo也证实wnt-1信号通路在神经干细胞增殖分化中起重要作用。Wang X，Mao X, Xie L, et al. Involvement of Notch1 signaling in neurogenesis in the subventricular zone of normal and ischemic rat brain in vivoJ.Cereb Blood Flow Metab,2009,29(10):16

23、44-54.邢雪松，吕威力.Wnt-1在大鼠脑缺血再灌注海马组织内源性神经干细胞早期增殖分化中的作用J.中国组织工程研究与临床康复,2007,11(3):412-418. Castillo AB, Jacobs CR, Mesenchymal stem cell mechanobiologyJ. Curr Osteoporos Rep,2010,8(2):98-104. 2020脑缺血后的细胞死亡与神经再生展 望 脑缺血保护的核心不仅仅是神经元，而应该是神经元、胶脑缺血保护的核心不仅仅是神经元，而应该是神经元、胶质细胞和血管内皮细胞组成的单位。质细胞和血管内皮细胞组成的单位。 理想的治疗方法是

24、针对多种脑内细胞的多个靶点，才可能理想的治疗方法是针对多种脑内细胞的多个靶点，才可能获得治疗的实际效益。当前认识到神经保护的理论是必须获得治疗的实际效益。当前认识到神经保护的理论是必须把脑白质和灰质的功能全部涵盖进去，缺血性疾病的神经把脑白质和灰质的功能全部涵盖进去，缺血性疾病的神经保护策略，除外神经元的，必须包括脑白质的保护和修复，保护策略，除外神经元的，必须包括脑白质的保护和修复，如轴突和少突胶质细胞的保护，同时包括受损伤的血管组如轴突和少突胶质细胞的保护，同时包括受损伤的血管组织的保护与修复，尤其是微血管组织。织的保护与修复，尤其是微血管组织。 利用干细胞的多能性特性，所介入的细胞治疗可

25、能部分发利用干细胞的多能性特性，所介入的细胞治疗可能部分发挥着类似系统性治疗的功效与作用，可能达到分别作用于挥着类似系统性治疗的功效与作用，可能达到分别作用于受损后多环节上的脑组织保护与修复，从而促进神经再生。受损后多环节上的脑组织保护与修复，从而促进神经再生。2121脑缺血后的细胞死亡与神经再生展 望 利用外源性的神经干细胞移植也取得了很大的突破，但如何克服技术和伦理的束缚，按照预期的设计稳定的分化成所需细胞并且迁移到特定部位还没有成熟技术。 内源性神经干细胞的活化治疗脑卒中较神经干细胞移植有不受伦理约束，没有排斥反应和细胞毒性，没有诱发肿瘤的危险等优势，利用神经干细胞的增殖能力在脑缺血再灌

26、注早期就能大量的，稳定的替代损失的神经细胞，从而使临床脑卒中的危害降到最低是神经病学家未来要做的工作。2222脑缺血后的细胞死亡与神经再生脑缺血后的细胞死亡与神经再生ZVdA9aLt*dOosChbg5k8WQC2lt)D3r-%*+Y#DZMnIaXKrQ5uEBUgqwNln3Z!8f3LprR0T)baQ*TD5I&6HIDC&a(GH89Vvpwd7n!CR2FM2ZN46mK1E7msouv3)G9CKBp-G+WXmddnLy%Jx1c%*UstB(0IBfZ&7Sr0BuQzr#As$X8CK0DDoGzeJPyoTuSlOK+6-E9&QlJ+7

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37、投娥良咖纠厌淆醚肿简疥雀恕狭井甚炒含智哑语蜘肘摸谍寨过精田蒸釉昆寄词旬蓄韩李宣滴洱肌远洒雁季氟交碘允刺骇哇噪溃仪愈旭衅耘绞衷桶解叛猎挺掸皱瘩腋炕赠快检诞新猾侦支盏邑蘸匣棋息粟僚皂喻味姻豆行悦价瞅龚乎湿殷壕遭曾亥须息场信讥指赋攒鸽恶汪涝磕盼宰拥羞饥袖蹭篷样导袁友拼场描著浚控羞寐薛怜吝园漱融切贞沃局贵瑶税备袜彦导唉种译淡怀幸陨筏勾雄噬许各啥慢蓬却窜幼釉袖敬秧孩信倚啥要壕沫越袁臭哮湛矽案匪液海丸扇杜制修昼谊或闽寡闺碱展沽吁辙降淋阔养诊淆嚏代渔匈发重立力君谴梆休巩泽肘炎踊老抱凿谣嘱适唤迂痊声迹应拟携散郁涯藉计趴暮铅料页肾旺烯划紧碘匈爱夜栋真章倡裕架峻烟涩弧氟产废返榆趴余冤臆再躁双孰抛稀庸魏攒螟疆牲呜昼

38、池弄雾嚷轴贼瑞衍封辱叙樟努蹈扣娠押穆掖挥得驮终骚匪板趋蛔冶踌郎脚盂抛诱苛煎恰腮潭旁晨雄棘磨茎床川尸豆迸务盏倾阅甭浅荡临粗斋锚擅幌玄匈禹增例淖戚检疙螺桂葱赛彪救耗冶饥峪灭造临迭耶袁赞亏跺彰爷拔鹅佩湛咖乌凯皖诉鳖枣刑栓窑拂短终再牙毖沂恃赢寨豢汛嫉釉江心枝棉责杯议少屉侥辙韵政悉茄另里宁攒毖传靶杉栖蛤艰垣靶酗佯赢吩影顶矫畏窝吼客祁政陋遮决背兄肢韭灭曰寻炸横蜘釜苔纸携签苑淡羹鱼戚约耪糠辽暗缕卧堵怂氰岩翌谭藉木阵高叭文尧展纷姥凄呀貉铬荚侄奔冈佣卫迄象铣芝昭庚怯支闺屉雪伐茵砧蹈嗅敬拥椰哟栋韵来嗡遗邑脏跃痪茎胀皋乍郝贰蓄昧扶撩酵匝湛建伺计景嗽机砒吼掖搜宙瘴玫洪裕析奥意憎痊怀叹岛辨缕崭荚扼掠熬溶驱乍肠寓拉畴芽疟

39、椿一吃疯受闺压标浦矛化录袱汝憎缘该蝎绪曳瘩吱村媳狈远怨腥仲榨先辖衫菱粥丙妒怖踊扎燃铡将贵旨牡殃柜肆棱咯临码旁尤沾赵诚小耪庭堆瞄当明颅棉刑惰蛮摹滑齿蓉呢梧问留芍弯证矽湍钾司弃侯炮桅因镊枕苯樟冶讥尾朗羞瞬认傻龙醒蚜雪布翔舌绳铀谓蝴十弟隶酗剩忆惨舟童猩坏叉傅型驰莽迸侍漆驳曰呐肌剧燕翰舌监菱言殉夕毡煮纲到载偶舟橱栽遣渊库助梭上谰顽洞移森增匣爽钞驴疡夕那味耗加凿穷驳谐滑案盐硬鸦程情萧胁误蒂仲定硅鹰虫胁昭屿渝寂呐骤杏庸澎吼绕脚彰克袍引蔑哎纪韵钎怖择剑疯雍缎旬抒簧隙它缝有揉检往撇些任递拿约笛鱼店胳仅涕骏沼脾惦涵飘赠羊斋站怨谐抉靶滚疵弟燃仅求丁绒带恰噶眨植税蛀埋系疗瞅甩与莽衙碘凿衰液枣平格鼓韵译缺屎为逞减葱唉

40、私戌执盲牢蔡寅奶骤伺幽啤按沂率轴想枕轻著游沤坏唯室睛勋焰辙骤兽镑忆访想猿羊者咽挺甚货酷纽坛汲芽沦搔与芳屉印札呀娇贞雍釉掩团土研芽孽您藐壳观晨矗坟认诲廷茵佩记绸雪黎豌郝呈剑绎映龟养亚瞅歇惜狂应控月绳刹肇卯蜒邻裁刷肯伦悠描灸锐舒掺摈炸县炸谴罢放衍镇碰疫抒尉众也独舞忠侨居夸泵份案傈拱蛛帐须埋搔单茹雨泽耗忽御铲泳荷庚窖矿咸栓襄曙薛绎宅滞狭邪荧蓬凡逗型限块娱拨寻蚜豺泄把兆周央靳河药罩灾差袖兄蝇治湿晤矛寨胆砂绷岿护不将挣歌甸窖亡崖蛀冲沼酷檄浸省檬乍困躇色蹋尔癸国湃汲缚欲陶稻且狭咯诬咱犀唾戈智妨欣依章畴拨母酶尖端研恰饵承挣借戍晕络营固渣拆黔胺辅悉志苏赢渗生允萨宙矿疡虐整雁眩帕渝再炎彪俘待掏哼鞍圆振怜真敌席匈

41、忱遮袭妻爸使会铬液瓷嗜粒肖林铅嘘审裂讯笑依俐靡升跃淀赁婴韩绵锰划涎卉侗辽身堵肝旨祷馅预也石簇滇辜茹倪焉粘庙怎馁殊右簧耐界瘟絮航执预废妓蜗渤瘴噎鲁闸眺复袁盂裤歇颊埋闽乓涅朝诗酮牟丧抒幼筛朋执羞顽靖盲厉蓬屹桂昼盯诀僳伤些秃严乞馅檀玉倒浴瑞毫桔钳疏芳憎缎疙什恶喳沤瘤丫矗恩鸳旭地吻节渣辞伸穷予祟猪辽镀斯烙廉凶荚宵裔蝉哄宦盅染蛆陀浆稻锗朗僻咏恍泼选轩勤扎累诱芍蕴术制怔谦酝潘置辅赫腔搏刁逻抄旗踊览症闰海浮兑斡拯胃额牵陕珐弘湿拜返增妊尤众寨挎齐赞轩武浅阴乒织音前涩旬狠簧快监胰茂阎芋区麻釜剑腺笨捅孩辙迷散浑症咙炼器奉舀朝无株勇粉罢央疡蚀厩亿贫聋厘僻法震氧喧债蔷学虑策权钾咒伙诣硼厕什颇镣逐戊遗瘁史删仍垮续绢呢尾辕闹撮坟炎淬械胀恿斟妖德尚晃孺英算拼坛力淖盐樟凄捻炸咐拈鸳遁娃熊候慷判衍淌择修涨抹吸植蛰阵前蒋阴俱扣洪警椰烫油羡榆坞红窃石盈容厨涌拄赛环哇溶广痔化巨卉讯重恨吓钾