W6102高效液相色谱仪的基本构造-4-微教材

1、仪器分析技术课程-微教材微课编号W6102微课名称高效液相色谱仪的基本构造所属模块高效液相色谱分析技术子模块高效液相色谱法基本原理关键词高压输液系统；进样系统；分离系统；检测系统是否通用通用 农产品 食品是否重点建设是 否微课类型讲授型微课形式PPT动画式教学设计模式讲授法教学目标掌握高效液相色谱仪的四个组成部分教学内容知识点技能点1.高压输液系统2.进样系统3.分离系统4.检测系统高效液相色谱仪流程知识讲解1、高压输液系统输液系统由溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置和压力表等组成。(1) 高压输液泵主要部件之一，压力：150350×105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（

2、<10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。（2）梯度洗脱装置梯度洗脱就是在分离过程中使两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。梯度洗脱装置分为两类：一类是外梯度装置（又称低压梯度），流动相在常温常压下混合，用高压泵压至柱系统，仅需一台泵即可。另一类是内梯度装置（又称高压梯度），将两种溶剂分别用泵增压后，按电器部件设置的程序，注入梯度混合室混 2、进样系统进样装置：进样器+气

3、化室；进样器（六通阀）：推拉式和旋转式两种。 试样首先充满定量管，切入后，流动相携带定量管中的试样进入分离柱；不同规格的专用注射器，填充柱色谱常用10L；毛细管色谱常用1L；新型仪器带有全自动液体进样器，清洗、润冲、取样、进样、换样等过程自动完成，一次可放置数十个试样。3、分离系统分离系统包括色谱柱、恒温器和连接管等部件。色谱柱一般用内部抛光的不锈钢制成。其内径为2 6mm，柱长为10 50cm，柱形多为直形，内部充满微粒固定相。柱温一般为室温或接近室温。色谱柱有柱管和固定相组成，柱管用不锈钢制成，柱长1030cm，内径26mm，以的内径最常用。根据键合基团极性不同，化学键合相可分为非极性、中

4、等极性和极性三类。常用色谱柱有：ODS柱、氰基柱、氨基柱等。色谱柱使用注意点：pH范围。使用有机缓冲液，浓度以10-50mM为好。在中高pH下避免使用磷酸盐，碳酸盐缓冲液，最高操作温度60 ，最佳温度 40。分离碱性物质，所用流动相pH值应高于被测物pKa一个单位。色谱柱使用与保存：所有色谱柱使用缓冲液后必须用柱体积20-30倍的水冲洗色谱柱 色谱柱 柱体积 冲洗体积150× 4.6mm 2.5ml 50ml200× 4.6mm 3.3ml 65ml250× 4.6mm 4.2ml 80ml保存色谱柱时用100%甲醇或乙腈，柱两端必须用接头密封。停用数天后最使用时

5、，应先用低流速甲醇冲洗1h左右，然后再换上流动相，否则直接用流动相，柱效会下降，峰形不好。 新柱使用前应用甲醇或乙腈冲洗（）。色谱柱失效症状：Ø 色谱柱压增高Ø 峰变宽，拖尾，裂峰Ø 塔板数下降，选择性下降，分离度降低Ø 保留值减小或增大色谱柱失效的原因：Ø 进口滤片堵塞Ø 吸附了样品杂质Ø 柱填充不良，使用久，Ø 机械及热冲击造成空洞Ø 固定相遭化学侵蚀4、检测系统检测器是液相色谱仪的关键部件之一。对检测器的要求是：灵敏度高，重复性好、线性范围宽、死体积小以及对温度和流量的变化不敏感等。在液相色谱中，有两种类型的检测器，一类是溶质性检测器，它仅对被分离组分的物理或