帕金森病动物模型具体方法及步骤_第1页
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1、帕金森病动物模型具体方法及步骤原型物种人来源MPTP模式动物品系SPF级Balb/C小鼠,健康，雄性,46W ,体重为 18g20g。实验分组实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂 量组。实验周期4-6 weeks建模方法模型建模方法：腹腔注射MPTP 20mg / kg / d ,连续注射14天。对照组使用等体积生理盐水 进行腹腔注射，操作及注意事项相同。MPTP给药结束后，模型建立成功。药物给以相应的药物处理；正常组、PD模型组使用等体积PBS进行腹腔注 射，操作及注意事项相同。应用疾病模型 模型评价）_-1 .转棒实验：使用小鼠转棒仪检测小鼠的运动协调能力。将小鼠置于直

2、径 为3cm的旋转杆上，转速调整为30r/min ,每次同时测定5只小鼠，每个隔 室中1只。记录小鼠从转棒开始转动至掉落转棒所经历的时间，测定时间为 lmin ,每次中间休息lmin ,连续5次，记录lmin内掉落次数。2 .旷场实验：即自发活动，是检测MPTP损伤后少动的常用指标。 旷场实验所用实验箱为尺寸：500x500x300mm旷场，周壁的颜色为黑色， 旷场底面被平均分为16个4x4个小方格。正上方架摄像头,视野覆盖整个旷 场。将动物放置在正中央格，同时进行摄像和计时，时间为5 min。通过计算 机示踪分析系统来分析动物在一定时间内的活动状态。实验室保持安静，室温 为20 V左右，光线

3、充足。观察指标：方格间穿行次数（动物的四肢从一个格 进入另一个格为穿行一次）、直立次数（动物双前肢同时离地,或者双前肢放 在墙壁上算作直立一次）、中央格停留时间、穿过中央格的次数。3 .爬杆实验：是评价小鼠运动协调能力的经典方法。通过记录小鼠由杆的顶端 往下爬到底部（双前爪看地）所需时间，比较其运动能力。本实验将小鼠放置 于一个木制的粗糙的小球上,其下端接有一个表面粗糙、截面为圆形的木棒， 木棒下端放置于鼠笼里，当小鼠头朝下方从木球爬至木棒上，用秒表记录此刻 的时间为A,当其爬至木棒最下端时，记录此刻的时间为B,那么小鼠爬完整 个木棒所用的时间为C , C=A-B ,每只小鼠测试俩次，将俩次爬杆的平均时间 作为统计闾示。组织病理学;二1 .脑组织尼氏体染色取各组小鼠脑组织，经固定液固定、石蜡包埋、切片后，进行尼氏小体染色。观察各组动物脑组织中尼氏小体的数量。2 .免疫组化检测脑黑质TH表达取各组小鼠脑组织切片，修片至脑黑质部位，进行免疫组化染色酪氨酸羟化酶 的表达。3 .电镜检测脑部线粒体：电镜下观察小鼠脑部多巴胺能神经元细胞超微结构。低倍视野有基本完整的细胞结构，高倍视野中要有线粒体线粒体特写，MPP 组可见铁死亡线粒体：大小变小，双层膜密度增高，外膜断裂,脊减少或消 失。应用SPSS软件进行统计分析

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