高效液相色谱法测定葡萄酒中11种有机酸含量

1、安徽农业科学，埘。（：责任编辑李菲菲责任校对卢瑶高效液相色谱法测定葡萄酒中种有机酸含量杨东伟，李晓静，王芬，李永库（沈阳农业大学理学院，辽宁沈阳叭；中州大学实验中心，河南郑州）摘要建立了固相萃取一高效液相色谱光电二极管阵列检测法测定葡萄酒中草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸种有机酸的方法，并用此方法测定了市售的种葡萄酒中种有机酸的含量。试验采用。柱（斗，）分离，以甲醇一磷酸为流动相，线性梯度洗脱，以保留时间和特征光谱对分离出的组分予以定性确证，用峰面积进行定量。结果表明，种有机酸组分的质量浓度与其峰面积在一定的范围内有良好的线性关系，相关系数为，种组

2、分的平均回收率为一（相对标准偏差为），检测限为。该方法简便、快速、灵敏也适用于其他复杂体系中草酸等种有机酸的成分分析。关键词固相萃取；高效液相色谱一光电二极管阵列检测法；葡萄酒；有机酸中图分类号文献标识码文章编号（）（，），（）（，。，）（，）一。一一（）。；有机酸是一类含有羧基的化学物质，具有抑菌、抗病毒、增加冠脉流量、抑制脑组织脂质过氧化物生成、消炎、抗突变和抗癌等作用。，是葡萄酒中主要的风味营养物质，其含量高低与酒制品的品质和药用价值有着极其密切的关系。关于有机酸的测定方法主要有毛细管电泳法扣。、气相色谱法日和液相色谱法一“，其中气相色谱法中常因酸的沸点较高，不易气化而需要在分离前对有机

3、酸进行衍生，以增加其挥发性，样品前处理繁琐费时；离子色谱由于淋洗液和柱填料的特殊性，对样品中蛋白质含量有严格限定，不适合作复杂的样品分析；毛细管电泳法与其他分析方法相比，重现性方面仍存在不足；高效液相色谱法仍是有机酸分析中最成熟、最常用的方法。而采用反相高效液相色谱一二极管阵列检测法同时测定葡萄酒中草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸种有机酸的方法国内外尚未见文献报道。笔者建立了一种快速、可靠地测定种不同葡萄酒中该种有机酸的固相萃取一反相高效液相色谱一光电二极管阵列检测器（）方法，该方法已成功用于实际样品的分析，结果令人满意。材料与方法材料供试材料种不

4、同葡萄酒。高效液相色谱仪，美国；光电二极管阵列检测器，美国；自动进样器，美国；固相萃取装置：多管真空处理系统，一作者简介收稿日期杨东伟（一），女，辽宁丹东人，实验师，硕士，从事色谱分析方法的研究，：。通讯作者，讲师，硕士，从事色谱一质谱联用技术研究，：。（，）固相萃取柱，德国；氮吹仪，美国；超纯水仪，美国；电子分析天平，德国。草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸，公司；甲醇和乙腈为色谱纯，公司；其他试剂均为分析纯，所有用水均为超纯水。色谱条件色谱柱：。柱（岬，姗）；流动相：甲醇，：磷酸水溶液；采用梯度洗脱程序：，一，；流速：；柱温：；进样体积：出；入。

5、标准溶液的配制准确称取标准品草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸各，用甲醇溶解并分别定容在容量瓶中，配制成的标准贮备液。标准贮备液置于冰箱中保存，使用时用流动相稀释成所需浓度。样品的制备吸取混合均匀的葡萄酒样，经滤膜减压过滤后，约在内通过，。固相萃取小柱（分别用甲醇、乙腈和水预先活化）。待样品全部吸附完，分别以纯水、的甲醇水溶液冲洗固相萃取柱后，连续抽真空，最后用甲醇洗脱，洗脱液在氮吹仪上于下蒸发至近于，用甲醇准确定容到，待分析。结果与分析色谱条件的选择试验对常用流动相甲醇一水和乙腈一水进行了考察。结果表明，使用甲醇一水比乙腈一水作流卷期杨东伟等高效液

6、相色谱法测定葡萄酒中种有机酸含量动相时灵敏度略高。但同时发现，在水相中加入不同比例的磷酸对种有机酸的分离度有较大影响。通过试验可知，当加入磷酸时，种有机酸能够达到基线分离且峰形较好。图为种有机酸混合标准物和一葡萄酒样品在检测波长为时的色谱图。最佳检测波长的选择由紫外二极管矩阵检测器在时间口时间注：草酸；乙酸；丙烯酸；琥珀酸；丙二酸；酒石酸；富马酸；柠檬酸；丙酸；苹果酸；乳酸。图标准晶）和样品（）的色谱波长扫描可得各色谱峰的光谱图，样品中各有机酸均由其保留时间及紫外光谱图与标样对照确定，并作了峰纯度分辨，确认各测定组分均达到完全分离。由于种有机酸物质在波长左右均有较大吸收，因此试验选择检测波长为

7、。线性范围和检出限配制系列不同浓度的革酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸标准品混合溶液。取系列标准品混合溶液各一进样分析，以标准品峰面积对浓度（）进行线性回归，得到种标准品的回归方程和相关系数，见表。以信噪比等于为标准，测得草酸、乙酸、丙烯酸、琥珀酸、丙二酸、酒石酸、富马酸、柠檬酸、丙酸、苹果酸和乳酸检出限列于表。表种组分的回归方程及检出限化合物线性方程线性薏围相关系数检出，型生型生草酸一】乙酸一丙烯酸一琥珀酸一丙二酸一酒石酸一富马酸一柠檬酸一丙酸：一苹果酸一乎酸一注：回归方程中为峰面积，为浓度（）。回收率及精密度准确量取已测得含量的样品干红玫瑰香葡萄

8、酒份，分别置于容量瓶中，分别准确加入一定量的有机酸类化合物对照品溶液，充分振荡均匀后，按照“样品的制备”步骤处理，然后平行测定次，将测得的峰面积代入回归方程，计算各有机酸的含量，并计算出平均加标回收率，结果见表。表方法的精密度和回收率（）化厶物需詈芝篙詈回警草酸乙酸丙烯酸一琥珀酸、丙二酸一酒石酸富马酸一柠檬酸丙酸一苹果酸乳酸实际样品分析分别吸取种葡萄酒样各，分别准确加入一定量的种有机酸对照品溶液，充分振荡均匀后，按照“样品的预制备”步骤处理。然后平行测定次，将测得的峰面积代人回归方程，计算各有机酸的含量，并计算出平均加标回收率，结果见表。由表可知，选择的种葡萄酒中均检出草酸、乙酸、琥珀酸、酒石

9、酸、柠檬酸、苹果酸和乳酸，其中酒石酸的含量最高，而丙烯酸、丙二酸、富马酸和丙酸却没有检出。表样品的分析结果样品草酸乙酸琥珀酸酒石酸柠檬酸苹果酸乳酸结论研究建立了种有机酸的固相萃取一反相高效液相色谱一光电二极管阵列检测器的测定方法。该方法利用先进的固相萃取技术，有效地去除了葡萄酒中大量的干扰成分，提高了葡萄酒中多种有机酸定性和定量检测的准确性，并充分地对检测结果进行验证。该方法的建立，满足了葡萄酒及其他酒类和果汁样品中多组分有机酸检测的需要。（下转第页）蚪如力斛瑚掰瑚埘研纵伽啪雠蛳伽啪劝啪如鸲研安徽农业科学生理化指标。制得的紫心地瓜干中，总糖（以葡萄糖嚆眦，吐。池酬，拟，（）：硫酸钠（以：残留量

10、计）。，苯甲酸钠，按譬矗嘉薹笺鬈篓警集警备磊素的提取及性质研究华南添加剂按脚印规定执行。盆甏嚣黼季警潞鬻嚣簧端嚣霎花色苷产微生物指标。产品中，菌落总数，大，唑掣，唑肠菌群，霉菌，致病菌不得检出。删蛳。（舅舅蒜口“”呻融“叼“”蕤星，刘小强紫息甘黧养成分和药用价值研究进展安徽农：出石，一（）一，（）业科学，：一忙山”“。卜崔嵋、：“：“【雾璺鍪耄露嚣罢慧营养成分分析及休闲食品开发浙玎】。，砌，（御，“卿。江万里考慧帮淝趔）：器蔷需；，器并嚣孑蒜蕊菇兰蔷揣。？。，煳，一刈：箸湍篡署：二苫：意二篙黼妇一锄若删州蚰“，儿。譬捻面删赢，（）娟加，枷（）：，咖。一。黑，：们州。盖：等“。篇：三？二。”赫！

11、御，：盖心。！茹：嚣不赫蒜：蚴，”吖。“删。儿口恻。（枷警二咖）如：！脚勰：（，“删。舷种。，（）：、”，”一”，儿。：？”明煳口，耄臻张明等紫色甘薯的开发前鄹重庆幛药研充删一呐。址搿箍孟咒（气与一而“泓“崎“。呻矗址蒜二，烨（）：。心，孺（紫甘薯慧搿紫登录结束触。酬趼酬盏鞲茹肚“址川“删越。蕊。，“苗矗。睡刍，壁：！：品黪。商凸齿士硒皇日出出靠。、赫三描芝嵩：蒜；：！：釜；，：，余燕影，王杉，曹树稳，等川山紫薯色素提取分离及主要组成成分分。“”，“”“，“，张。海燕；臻；冀妾欺妻熟薯系列保健产品的研帝及产业化开。吧“。？“：麓：篙三芒？训蒹篙：￥淼总黧紫拦嚣忿扪扉和立聆厍粤犯士【唧谲茹：磊曲

12、砌吼弑徐敏人体自由基与衰老的关系临床和实验医学杂志，一“，”“”“。“叫一“、“”；翁：。强，一韩永斌，朱；尊，顾振新，等紫甘薯花色苷色素的抑菌作用研究，一萧一二一印童。黑肿洲卿呈“黧鋈燃警紧黑的提取及其抑菌效果分析，（）：“于刘要？亨：平，守口镕日女。（上接第页）咛，：参考文献一鬈咒，：麓要：搂警三：兰戮咒，。麓嚣，塞： 高效液相色谱法测定葡萄酒中11种有机酸含量作者：杨东伟， 李晓静， 王芬， 李永库作者单位：杨东伟,王芬,李永库(沈阳农业大学理学院,辽宁沈阳,110161， 李晓静(中州大学实验中心,河南郑州,450044刊名：安徽农业科学 英文刊名：Journal of Anhui A

13、gricultural Sciences年，卷(期：2013,41(31. ALONSO BORBAL(AN (A M;ZORRO L;GUILL(EN D A Study of the polyphenol content of red and white grape varietiesby liquid chromatography-mass spectrometry and its relationship to antioxidant power 20032. LOPEZ M;MARTINEZ F;DEL VALLE C C Analysis of phenolic constitue

14、nts of biological interest in red wines by high-performance liquid chromatography 20013. DOM(INGUEZ C;GUILL(EN D A;BARROSO C G Automated solid-phase extraction for sample preparation followed byhigh-performance liquid chronatography with diode array and mass spectrometric detection for the analysis

15、ofresveratrol derivatives in wine 20014. FERN(ANDEZ-PACH(ON M S;VILLA(NO D;GARCIA-PARRILA M C Antioxidant activity of wines and relation with theirpolyphenolic composition 20045. CHEN F X;LIN Q L;LIU X X Effects of magnetic field and fertilization on organic acids in loquat fruit 20076. PERKS R G;MO

16、RAES E P;MICKE G A Rapid method for the determination of organic acids in wine by capillaryelectrophoresis with indirect UV detection 20097. MATO I;SU(AREZ-LUQUE S;HUIDOBRO J F Simple determination of main organic acid in grape juice and wine by usingcapillary zone electrophoresis with direct UV det

17、ection 20078. CHEN F X;LIU X H;CHEN L S Developmental changes in pulp organic acid concentration and activities of acid-metabolising enzymes during the fruit development of two loquat(Eriobotrya japonica Lindl. cultivars differingin fruit acidity 20099. BENKEBLIA N;SHINANO T;OSAKI M Metabolite profiling and asessment of metabolome compartmentation of soybeanleaves using non-aqueous fractionation and GC-MS analysis 200710. HERN(ANDEZ Y;GLORIA LOBO M;GONZ(ALEZ M Factors affecting sample extraction in the liquid chromatographicdetermination of organic acids in papaya and pineappl