甾体激素类药物殊杂质的检验

1、药品检验技术课程单元教学设计情境：甾体激素类药物的分析（10） 任务：甾体激素类药物殊杂质的检验(03) 教学目标设计序号5上课地点理实一体化教室授课形式讲授、学生操作练习教 学 目 标技能目标知识目标能够依据药典，对甾体激素类药物中的有关杂质进行检查。甾体激素类药物特殊杂质的检验方法教 学 重 点其他甾体的检查；硒的检查；游离磷酸盐的检查；残留溶剂的检查教 学 难 点掌握甾体激素类药物特殊杂质的检验方法能力训练任务及案例结合知识点对案例分析，增强同学的实际操作能力、加强同学们对基础知识的掌握。教学进程设计（下面各格均可合并）步骤教学内容教学方法教学手段学生活动时间分配基础知识讲解甾体激素类药

2、物特殊杂质的检查方法教师举例、点评、归纳概括引出知识点。任务引导掌握甾体激素类药物特殊杂质的检查方法并归纳总结20分钟案例分析例如：醋酸去氧皮质酮中有关物质的检查通过案例分析同学们更好的掌握甾体类药物特殊杂质的检查方法25分钟甾体激素类药物中特殊杂质的检查甾体激素类药物多由其它甾体化合物或结构类似的其它甾体激素经结构改造而来，所以可能带来原料、中间体、异构体、降解产物以及试剂和溶剂等杂质。药物中存在的具有甾体结构且与标示药物结构不同的其他化合物都称为“其他甾体”。中国药典在甾体激素类药物的检查项下，除一般杂质的检查外，通常还要做“其他甾体”的检查，有些药物还需做硒、游离磷酸盐及有机残留溶剂等的

3、检查。1其他甾体的检查我国药典中，一般采用薄层色谱法或高效液相色谱法检查甾体激素类药物中的“其它甾体”。（1）薄层色谱法 薄层色谱法是使用最为普遍的甾体特殊杂质检查法。各国药典中多采用高低浓度对比法进行检查，即采用供试品的稀释溶液做对照，以对照溶液斑点颜色为参比来控制杂质限量。在使用薄层色谱法检查时对供试品规定了杂质斑点不得超过的数目和每个杂质斑点不得超过的限量以及杂质斑点的颜色。例15：醋酸去氧皮质酮中有关物质的检查取本品，加三氯甲烷-甲醇（9:1）溶解并稀释制成每1mL中约含10mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适量，分别加上述溶剂稀释制成每1mL中约含0.1g的对照溶液（1）与每1mL

4、中约含0.2mg的对照溶液（2）。照薄层色谱法（附录 B）试验，吸取上述三种溶液各5L，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以二氯甲烷-乙醚-甲醇-水（77:15:8:1.2）为展开剂，展开，晾干，在紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液（1）所显的主斑点比较，不得更深，如有1个斑点深于对照溶液（1）的主斑点，与对照溶液（2）所显的主斑点比较，不得更深。（2）高效液相色谱法 许多甾体激素类药物采用高效液相色谱法测定含量，一般可在相同的条件下检查其他甾体。检查的方法多采用不加校正因子的主成分自身对照法，即采用供试品溶液的稀释液作为对照，以对照溶液主峰面积为参比来控制杂质

5、限量。在使用高效液相色谱法检查时药典规定了杂质峰的个数、各个杂质峰及其峰面积总和的限量。例16：黄体酮中有关物质的检查取本品，加甲醇溶解并稀释制成每1mL约含1mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取1mL，置100mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照溶液10L注入液相色谱仪，调整仪器灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的30%。再精密量取供试品溶液与对照品溶液各10L，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主

6、峰面积（1.0%）。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积0.05倍的色谱峰可忽略不计。2硒的检查有些甾体激素类药物，在生产的后工序中使用二氧化硒脱氢，在药物中可能引入杂质硒。硒对人体有毒害，故须对这些甾体激素类药物中的硒进行检查。其检查原理为：利用氧瓶燃烧法进行有机破坏，使硒转化为高价氧化物（SeO3），以硝酸溶液吸收；再用盐酸羟胺将Se6+ 还原为Se4+；在pH2.0的条件下与二氨基萘试液作用，生成4,5苯并硒二唑，经环己烷提取后，在378nm波长处有最大吸收。通过测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度进行比较，规定供试品溶液的吸光度不得大于硒对照液的吸光度。例16：醋酸氟轻松中硒的检查

7、取本品50mg，依法检查（附录 D），应符合规定（0.01%）。3游离磷酸盐的检查甾体激素类药物中的游离磷酸盐是在药物制备过程中，由磷酸酯化时残存的过量磷酸盐产生的；另外，药物在贮存过程中也可能引入磷酸盐。甾体激素类药物中的游离磷酸盐，通常采用钼蓝对照品比色法进行检查。其检查原理为：利用在酸性溶液中磷酸盐与钼酸铵作用生成磷钼酸铵，再经过还原形成磷钼酸蓝（钼蓝）在740nm处有最大吸收，从而进行检查。例17：地塞米松磷酸钠中游离磷酸盐的检查精密称取本品20mg，置25mL量瓶中，加水15mL使溶解；另取标准磷酸盐溶液精密称取经105干燥2h的磷酸二氢钾0.35g，置1000mL量瓶中，加硫酸溶液

8、（310)）10mL与水适量使溶解，用硫酸稀释至刻度，摇匀；临用时再稀释10倍4.0mL，置另一25mL量瓶中，加水11mL；各精密加钼酸铵硫酸试液2.5mL与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸溶液（取无水亚硫酸钠5g，亚硫酸氢钠94.3g与1-氨基-2-萘酚-4-磺酸0.7g充分混合，临用时取此混合物1.5g加水10mL使溶解，必要时过滤）1mL，加水至刻度，摇匀，在20放置3050min。照紫外-可见分光光度法（附录 A），在740nm的波长处测定吸光度。供试品溶液的吸光度不得大于对照溶液的吸光度。4有机残留溶剂的检查部分甾体激素类药物，如地塞米松磷酸钠在生产过程中使用大量的甲醇和丙酮，甲醇对人

9、体有害，它为二类限制使用的溶剂，不得超过0.3%（g/g），丙酮为三类限制使用的溶剂，不得超过0.5%（g/g）。因此，须对药物中的残留溶剂进行检查。例18：地塞米松磷酸钠中残留溶剂的检查取本品约1.0g，精密称定，置10mL量瓶中，加内标溶液取正丙醇，用水稀释制成0.02%（mL/mL）的溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置顶空瓶中，密封，作为供试品溶液；另取甲醇约0.3g，乙醇约0.5g与丙酮约0.5g，精密称定，置100mL量瓶中，用上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取1mL，置10mL量瓶中，用上述内标溶液稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL，置顶空瓶中，密封，作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（附录 P第一法）试验，用6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷毛细管色谱