调脂护肝胶囊定性定量方法研究

1、调脂护肝胶囊定性定量方法研究核心提示：【摘要】目的建立调脂护肝胶囊的定性定量方法。方法采用TLC法对处方中的虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝进行 【摘要】 目的 建立调脂护肝胶囊的定性定量方法。方法 采用TLC法对处方中的虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝进行鉴别；用高效液相色谱法测定虎杖苷的含量。结果 在TLC色谱中检出虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝；虎杖苷在4122472 g范围呈良好的线性关系，r=09995，平均回收率为988%，RSD为09%。结论 所建立的方法能够用于本品的质量控制。 【关键词】调脂护肝胶囊；定性定量分析；高效液相色谱法；虎杖苷 【Abstract】 ObjectiveTo esta

2、blish qualitative and quantitative methods for Tiaozhihugan capsule Methods Huzhang,Danshen,Nzhenzi,Jiaogulan were identified by TLC Polydatin was determined by HPLC ResultsHuzhang,Danshen,Nzhenzi and Jiaogulan were detected by TLC A good linear relationship was noted at the range of 4122472 g of po

3、lydatin，(r=09995)The average recovery was 988%，and RSD was 09%Conclusion The established methods can be used for the quality control of Tiaozhihugan capsule 【Key words】 Tiaozhihugan capsule；Qualitative and quantitative analysis； HPLC；Polydatin 调脂护肝胶囊系由虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝等药研制而成的中药新药。功能健脾疏肝，活血解毒，降脂护肝。主治脂肪肝，

4、症属脾虚肝郁，瘀毒内结者。为了有效地控制其内在质量，对方中的虎杖、丹参、女贞子、绞股蓝分别进行了薄层鉴别，对虎杖中的虎杖苷采用高效液相色谱法进行了含量测定1-2。 1 仪器与试液 LC-10A高效液相色谱仪（日本岛津）；岛津SPD-10A检测器；N2000色谱工作站；虎杖苷对照品（批号：111575-200502）、丹参酮A对照品（批号：0766-200010）、齐墩果酸对照品（批号：110709-200304）、人参二醇对照品3（批号：701-9405）均由中国药品生物制品检定所提供；化学试剂均为分析纯；调脂护肝胶囊由本院制剂室提供，批号：080325、080329、080402。 2 薄层

5、鉴别4 21 虎杖 取本品内容物2 g，加甲醇25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加25 mol/L硫酸溶液25 ml，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15 ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷5 ml使溶解，作为供试品溶液。另取虎杖苷对照品加乙酸乙酯制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除虎杖外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺虎杖的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺虎杖的阴性溶液。吸取供试品、阴性样品、对照品溶液各10 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（3060）-甲酸乙酯-甲酸（15

6、51）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点；置氨蒸气中熏后，斑点变为红色，阴性无干扰。 22 丹参 取本品内容物2 g，加乙醚25 ml，振摇，放置1 h，滤过，滤液挥干（滤渣备用），残渣加乙酸乙酯2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹参酮A对照品，加乙酸乙酯制成每1 ml含2 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除丹参外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺丹参的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺丹参的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以

7、甲苯-乙酸乙酯（191）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同的暗红色斑点，阴性无干扰。 23 女贞子 取上述丹参鉴别项下的滤渣，加甲醇25 ml，加热回流05 h，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇-三氯甲烷（32）混合溶液2 ml使溶解，作为供试品溶液。另取齐墩果酸对照品，加乙醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方量称取除女贞子外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺女贞子的空白样品，按供试品溶液制备方法制成缺女贞子的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮-乙酸乙酯（521）为

8、展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。 24 绞股蓝 取人参二醇对照品，加甲醇制成每1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液。另取虎杖鉴别项下的供试品溶液，作为绞股蓝的供试品溶液。按处方量称取除绞股蓝外的其他药材，照制备工艺的方法制成缺绞股蓝的空白样品，按虎杖供试品溶液制备方法制成缺绞股蓝的阴性溶液。吸取上述三种溶液各10 l，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（6090）-乙酸乙酯（83）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在110加热至斑

9、点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点，阴性无干扰。 3 含量测定 31 色谱条件 色谱柱：依利特C18柱，46 mm200 mm，5 m；检测波长：306 nm；流动相：乙腈-水（1585）；流速：10 ml/min；柱温：25；理论板数按虎杖苷峰计算应不低于3000。 32 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的虎杖苷对照品适量，加稀乙醇制成每1 ml含20 g的溶液，即得（实际所配浓度为206 g/l）。 33 供试品溶液的制备 取本品内容物1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25 ml，称定重量，加热回流30 min，

10、冷却至室温，再称定重量，用稀乙醇补足减失重量，摇匀，取上清液，即得。 34 阴性对照实验 取除虎杖外的其余处方量药材，按制备工艺制备缺虎杖的阴性样品，再按上述供试品溶液制备方法制成缺虎杖的阴性溶液，测定，液相色谱图与供试液色谱图比较，结果表明，阴性对照液对虎杖苷的测定无干扰。 35 线性关系考察 精密吸取浓度为206 g/ml的虎杖苷对照品溶液2、4、6、8、10、12 l进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：Y=59178x-32897，r=09995。结果表明虎杖苷在4122472 g范围内具有良好的线性关系。 36 精密度试验 取同

11、一供试品溶液，精密吸取10 l，注入液相色谱仪，连续测定6次，计算RSD（%）为14%，说明精密度良好。 37 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在0、4、8、12、24 h精密吸取10 l，进样测定，计算结果RSD（%）为17%，说明24 h内稳定性良好。 38 重复性试验 取同一批号样品6份，分别制备供试品溶液，测定、计算。结果RSD（%）为13%，说明重复性良好。 39 回收率试验 精密称取已知含量为17157 mg/g的同批样品1 g，共6份，分别精密加入虎杖苷对照品溶液（C=01531 mg/ml）100 ml，即1531 mg，照供试品溶液的制备方法,以上述条件进行测定,计算回收率

12、，平均值为988%， RSD为09%。结果见表1。 310 三批样品测定数据 取三批样品， 按上述方法测定，结果见表2。 4 讨论 41 虎杖主要含大黄素、大黄素甲醚等苷类化合物；绞股蓝主要含人参二醇、2-羟基人参二醇为母核构成的皂苷类化合物5，因此,鉴别实验中采用稀硫酸水解，三氯甲烷提取水解物，以大黄素对照品，人参二醇对照品作对照，用不同的展开剂展开，分别鉴别制剂中的虎杖和绞股蓝，结果斑点清晰，分离度好。菲醌类化合物为方中丹参抗炎的主要成分，此类成分见光易氧化分解，所以在供试品溶液及丹参酮A化学对照品溶液的制备过程中应尽可能避光，减少放置时间。 42 虎杖为方中的君药，所含的虎杖苷为降脂、抗氧化的有效成分之一，因此，笔者以虎杖苷作为本品的定量评价指标，由于方中成分复杂，干扰大，后经反复摸索，建立了本文的方法，经方法学考察，结果准确,方法稳定，重现性好，能够有效的控制调脂护肝胶囊的质量。 参考文献 1 国家药典委员会.中华人民共和国药典一部.北京：化