抗生素和血清制剂治疗小鼠脓毒症时对血浆内毒素和细胞因子的影响

1、    抗生素和血清制剂治疗小鼠脓毒症时 对血浆内毒素和细胞因子的影响         摘要目的通过观察脓毒症小鼠的治疗过程，研究抗生素和血清制剂对血中内毒素脂多糖(LPS)和细胞因子的影响。方法脓毒症模型采用NH1小鼠，腹腔大肠杆菌。治疗分3组，先锋霉素5(CEF)，新生小牛血清(NBS)，生理盐水(NS)。结果NBS组的72小时生存率明显高于NS组(P0.05)。CEF组3小时白细胞计数低于NS组(P0.05)。NBS组的1、3小时LPS水平低于NS对照组(P0

2、.05)，血IL-1和TNF低于NS组(P0.05)。结论抗生素对抑制白细胞升高起主导作用，对LPS和细胞因子活性无明显抑制作用。血清制剂可能同时具有抗休克和抗炎症的双重作用，对提高早期生存率起重要作用。关键词脓毒症细胞因子内毒素抗生素血清Effect of antibiotics and anti-TNF agent on the serum endotoxin and cytokines in the treatment of sepsis in miceZHANG Haiying, LI Xinjian, MENG Xianjun. Department of Experimental

3、Surgery of Eastern Building, PLA General Hospital, Beijing 100853Abstract Objective To investigate the efficacy of an anti-TNF monoclonal antibody (Z12) administrated at different time points in the treatment of septic mice. Methods NH1 male mice were challenged twice at a 12 h interval with intrape

4、ritoneal (IP) bolus injection of E. Coli O111 B4 suspension. Z12 at 0.1 mg per mouse was IP injected at first challenge for early group and at second challenge for later group respectively, and the same volume (0.5 ml) of normal saline (NS) was IP infected as control group. Survival, white blood cel

5、ls of peripheral blood and cytokines' activities were investigated. Results Survival of later group was higher than that of early group (P0.01). Both early and later Z12 groups showed lower WBC count and blood cytokine activities than the NS control group (P0.05). The TNF and IL-6 levels in the

6、early group were lower than in the later group (P0.05). But IL-1 in the early group was higher than in the later group (P0.05). Conclusion Anti-TNF antibody should be applied in later time rather than in early time after infection.Key words Sepsis Cytokine Endotoxin An tibiotics Serum由于全身炎症反应综合征(SIR

7、S)理论的提出，抗生素和抗休克药物对炎症反应的影响越来越受到重视。本研究旨在探讨抗生素和血清制剂治疗小鼠脓毒症时对血浆内毒素和细胞因子的影响，现报道如下。材料与方法1.脓毒症模型10周龄NH1雄性小鼠，腹腔注射O111 B4大肠杆菌生理盐水悬液0.5?ml，浓度为(4.65.6)×107 cfu/ml(1/2LD90)，共2次，间隔12小时。共分3组，NBS 1.0mg，CEF 1.0mg，NS 0.5ml，均为每鼠剂量，于第1次攻击时给药。2.观察指标及方法(1)生存率：每组小鼠1617只，随机分组后，常规饲养3日，给药后观察并记录距第2次攻击后每12小时成活数(12、24、36小

8、时和3、5、7天)，计算成活率(%)。(2)标本采集：每时间点每组6只小鼠，于第2次攻击后1、3、12小时采集血标本。(3)外周血白细胞计数：乙醚麻醉下心腔穿刺抽取外周血，取20l加入2%冰醋酸溶液380l。常规镜下计数。(4)血浆LPS水平L定量鲎试剂分析法：使用鲎试剂盒(上海医学化验研究所生产并销售)。(5)细胞因子活性检测1：IL-1活性检测采用ConA协同的小鼠胸腺细胞增殖法；IL-6活性检测采用IL-6依赖性小鼠淋巴细胞系7TD1细胞增殖法；TNF活性检测采用在放线菌素D增敏的L929细胞溶解法。3.统计学方法用方差分析计算各组外周血白细胞计数以及血浆细胞因子活性水平的差异，利用2检

9、验计算成活率的差异性，利用回归方程检验生存曲线的相关性。结果1.白细胞计数第2次攻击后3小时的白细胞总数，CEF组明显低于NS组，分别为(11.9±4.0)×109个/L和(19.6±5.7)×109个/L(P0.05)。NS和NBS组分别为(19.6±5.7)×109个/L和(16.2±4.3)×109个/L(P0.05)。2.成活率抗生素组略高于NS组(P0.05)；NBS组的72小时生存率明显高于NS组(P0.05)，见1。     1NBS和NS组小鼠的生存曲线3.血

10、浆LPS水平各组之间差异无显著性，见2。     2小鼠血浆LPS水平4.血细胞因子的活性第2次攻击后1小时3种细胞因子活性比较，NS组的TNF高于CEF组，但差异无显著性(P0.05)；NBS对细胞因子有明显抑制作用：1小时时，NBS组的IL-1和TNF低于NS组(P0.050.01)，见3。     3第2次攻击后1小时各组小鼠血细胞因子活性*注：IL-1，IL-6为OD540光密度值，TNF为L929细胞裂解%讨论现在认为，脓毒症休克与脓毒症几乎同时发生24。因此，早期使用抗休克药物十分重要。本实验结果证明，早期使用血清制剂，可以改善感染动物的早期成活率。其作用不仅在于扩充血容量，还有广泛的抗炎症作用，对细胞因子有明显的抑制作用，在抑制细胞因子和改善动物生存率两项指标上均获得阳性结果。这说明，一方面是血清性抗休克制剂的优越性，另一方面，抗休克过程可能就是抗炎症过程，在特异性阻断剂疗效不理想的时候，非特异性血清制剂可能有助于这一问题的解决。脓毒症导致多器官功能衰竭，抗生素对此无效。本实验CEF组的生存率并未明显改善，证明了这一事实；但是，与前期报道有所不同1，本实验没有证明抗生素具有使血浆LPS增加