高通量测序技术平台流程及应用

1、人体基因组结构和突变染色质免疫沉淀考古学Meta-Genomics DNA测序血浆微量DNA测序基因组DNA的随机打断DNA片段的末端修复将A碱基加入到DNA片段的3末端在DNA片段的末端加上特定接头PCR扩增连上接头的DNA片段文库检测DNA在Cluster Station的成簇扩增IlluminaGenome Analyzer上的测序生物信息组装/分析基因组DNA随机打断特定大小片段（2-10kb范围可选）末端修复生物素标记环化获得来自大片段两端共计400-600 bp的DNA片段修饰、加接头PCR扩增连上接头的DNA片段文库检测DNA在Cluster Station上的成簇扩增Illum

2、ina Genome Analyzer上的测序生物信息组装/分析从总 RNA中分离 small RNA5接头连接和纯化3接头连接纯化RT-PCR扩增Small RNA文库的纯化文库的检测DNA在Cluster Station成簇扩增Illumina Genome Analyzer上的测序生物信息学分析mRNA的分离和cDNA第一链的合成cDNA第二链的合成限制性内切酶NlaIII的酶切连接GEX NlaIII Adapter 1限制性内切酶 MmeI 的酶切连接GEX Adapter 2Adapter连接cDNA产物和PCR富集文库的检测DNA在Cluster Station上的成簇扩增Ill

3、uminaGenome Analyzer上的测序生物信息学分析Total RNA的DNase I 酶消化mRNA 分离和随机打断cDNA第一链和第二链的合成DNA片段的末端修复将“A”碱基加入到DNA片段的3末端在DNA片段的末端加上特定接头PCR扩增连上接头的DNA片段文库的检测DNA在Cluster Station上的成簇扩增IlluminaGenome Analyzer上的测序生物信息学分析基因组DNA随机打断DNA片段的末端修复将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端DNA片段末端加上特别处理的甲基化接头重亚硫酸盐处理去盐处理PCR扩增连上接头的DNA片段文库检测DNA 在Cluster

4、 Station上的成簇扩增Illumina Genome Analyzer上的测序生物信息学分析染色质免疫共沉淀目的DNA片段DNA片段的末端修复将 A 碱基加入到 DNA片段的3末端DNA片段末端加上接头PCR扩增加上接头的DNA片段文库检测DNA在Cluster Station成簇扩增Illumina Genome Analyzer上的测序生物信息学分析Meta基因组的提取DNA随机打断DNA片段末端修复将A碱基加入到DNA片段的3末端在DNA片段的末端加上接头纯化连接产物PCR扩增连上接头的DNA片段文库的检测DNA在Cluster Station的成簇扩增Illumina Genome Analyzer上的测序生物信息组装/分析收集10-15ml孕妇外周血提取血浆中游离DNAQ-PCR定量总DNA含量构建DNA文库Agilent和Q-PCR检测文库浓度Cluster制备和Genome Analyze