正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异

1、正常心肌缺血与糖尿病心肌缺血大鼠蛋白质组的差异         11-04-01 14:14:00     编辑：studa20              作者：雷培培，叶财学，杨徐一，金利泰，李校【摘要】  目的 ：运用蛋白质组学方法比较正常与糖尿病性大鼠心肌缺血再灌注损伤时心肌蛋白质组表达图谱的差异。方法 ：将SD大鼠随机分为心肌缺血

2、再灌注组(IR组)和糖尿病心肌缺血再灌注组(DMIR组)。分别取各组左心室心肌蛋白进行二维电泳及凝胶染色后，用ImageMaster 2D Platinum 软件对获得的蛋白图谱加以分析，寻找差异蛋白点。结果 ：二维电泳结果显示，IR组心肌蛋白二维电泳图谱与DMIR组相比共有29个显著差异点，其中6个点表达上调，6个表达下调，17个表达不匹配。结论 ：IR组与DMIR组大鼠心肌的二维电泳结果显示蛋白表达图谱有明显差异，但其差异蛋白为何种蛋白、起何种功能需要进一步的质谱数据进行分析。 【关键词】  心肌缺血;再灌注损伤;糖尿病;蛋白质组Abstract: Objective: To a

3、nalyze the differential expression of myocardial proteins of diabetic and non-diabetic rats with myocardial ischemia-reperfusion injury. Methods: Rats were randomly assigned to myocardial ischemia-reperfusion group (IR group) and diabetic myocardial ischemia-reperfusion group (DMIR group). The left

4、ventricular myocardial protein was extracted and two dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2-DE) was followed with ImageMaster 2D Platinum software analysis in order to find the differences of the protein spots. Results: The result of two-dimensional electrophoresis showed that there were

5、29 protein spots expressed differently， of which 6 spots showed high expression， 6 spots showed low expression and 17 spots only expressed in IR group. Conclusion: There are significant differences between the myocardial protein expres-sion of IR group and DMIR group， but whats the differential prot

6、eins and which role they played is still needed to further analyse by mass spectrometry.Key words: myocardial ischemia;reperfusion injury;diabetic;proteomic糖尿病高血糖可导致多种器官的长期损害和严重的并发症，其中心脏是高血糖损伤的关键靶目标。美国的一项研究显示， 糖尿病心肌病的发生率为0.76%1。据统计大约65%70%的糖尿病患者死于心脏疾病2，且以心肌缺血较为常见。统计表明，相同年龄的患者糖尿病心血管疾病导致的死亡比普通心血管疾病高25

7、倍。不仅仅心血管疾病在糖尿病患者中较普通患者更常见，糖尿病性心肌缺血患者甚至比非糖尿病患者预后差3。二维电泳技术是蛋白质组学研究的核心技术之一，它利用了蛋白质等电点和分子质量的不同来分离复杂蛋白质组分，具有较高的分辨率和灵敏度，目前已成为复杂蛋白质组分检测和分析的一种强有力的生化技术。本研究使用二维电泳对大鼠心肌蛋白进行分离，获得心肌缺血和糖尿病心肌缺血大鼠的心脏蛋白表达图谱差异，从蛋白质水平研究心肌缺血和糖尿病心肌缺血的差异，为研究糖尿病和心肌缺血的关系奠定了一定的基础。1 材料和方法1.1 材料与仪器蛋白裂解液：8 mol/L 尿素，2 mol/L硫脲， 4% CHAPS，2% IPG b

8、uffer，40 mmol/L DTT，0.14% PMSF。再水化液：8 mol/L 尿素，2% CHAPS，0.5% IPG-buffer，DTT 2.8 mg/mL，0.25%溴酚蓝。平衡储存液：0.05 mol/L，Tris HCl(pH 8.8)， 6 mol/L尿素，30%甘油，2% SDS，0.25%溴酚蓝溶液。1.2 方法将胶条转移至预先配置好的浓度为10.6%的SDS-聚丙烯酰胺凝胶，首先以10 mA/胶条恒流电泳30 min，使蛋白进入分离胶中;随后以20 mA/胶条电泳约4 h，待溴酚蓝迁移到胶的底部边缘即可结束电泳。2 结果2.1 血糖浓度与心肌梗死范围 两组大鼠血糖浓度差异有显著性(P2.2 二维电泳图 二维电泳结果如图1所示，pH值范围为310，分子量范围为10200 kD的图中可见大鼠心肌蛋白主要在pH范围59区间呈均匀分布状态，两组蛋白斑点有一定相似性但差异明显。2.3 斑点的检测 经软件分析，糖尿病心肌缺血与