苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制

1、苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用及其机制         11-01-05 11:30:00     编辑：studa20                 作者：种铁，付德来，牛建强，李和程，张鹏，甘为民，王子明【摘要】  目的观察苦参碱对体外培养的人ACHN肾癌细胞的生长抑制作用，并探讨其

2、可能的作用机制。方法应用不同浓度的苦参碱分别作用于人肾癌ACHN细胞株24、48、72、96h，采用MTT 法观察苦参碱对ACHN的细胞毒作用;透射电镜和流式细胞术检测苦参碱对ACHN细胞凋亡的影响;免疫细胞化学技术检测苦参碱对ACHN细胞Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。结果不同浓度的苦参碱对ACHN细胞株均有一定的增殖抑制作用，且呈量效和时效关系;苦参碱能明显诱导ACHN细胞株凋亡;苦参碱作用后，ACHN细胞株Bax蛋白表达明显增强，Bcl-2蛋白表达有下降趋势，但无统计学差异。结论苦参碱对体外培养的人肾癌ACHN细胞株有显著的增殖抑制作用，其机制可能与调节Bcl-2/Bax蛋白表达比值、

3、诱导细胞凋亡有关。 【关键词】  苦参碱;肾癌;ACHN细胞株ABSTRACT: ObjectiveTo observe matrines inhibitory effect on the growth of ACHN human renal cell carcinoma in vitro and explore its possible mechanism.MethodsThe cell line of ACHN human renal cell carcinoma was treated with matrine of different concentrations for 2

4、4, 48, 72 and 96h, respectively. MTT assay was used to evaluate the cytotoxic effects of matrine on ACHN cells. The ACHN cell apoptosis induced by matrine was detected with transmission electron microscopy and flow cytometry. The expressions of Bcl-2 and Bax proteins were evaluated with immunocytoch

5、emical technique.ResultsMatrine of different concentrations had a cytotoxic effect on ACHN cell line in obvious dose- and time-dependent manners. Matrine could obviously induce apoptosis of ACHN cell line. Bax protein expression was significantly increased while the expression of Bcl-2 protein decli

6、ned but with no significant difference.ConclusionMatrine has an obvious inhibitory effect on proliferation of ACHN renal cell carcinoma in vitro, which may be related to down-regulating the ratio of Bcl-2/ Bax protein expression and promoting cell apoptosis.KEY WORDS: matrine; renal cell carcinoma;

7、ACHN cell line肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)约占成年人全部恶性肿瘤的2%3%、占肾脏肿瘤的90%95%1，且近年来发病率逐渐上升，全球每年新发病例约为209000例、死亡病例102000例2。我国肾癌在泌尿生殖系统肿瘤中的发病率仅次于膀胱癌。局限性肾癌可以通过根治性肾切除术治疗，然而在肾癌诊断时约有1/3的患者已出现转移3，另外局限性肾癌手术治疗后仍有30%40%发生远处转移。目前，进展期肾癌尚缺乏有效的治疗方法，探索肾癌新的治疗方法已成为泌尿外科医师面临的重要课题。苦参碱(matrine, Ma)是从传统中药苦参、苦豆子中提取的生物碱(图1)，目

8、前临床上广泛用于慢性病毒性肝炎的治疗4-5。近年研究发现，苦参碱对肺癌6、肝癌6-7、乳腺癌8、胃癌9等多种肿瘤的生长均表现出抑制作用。我们前期研究亦发现，苦参碱对体外培养的人肾颗粒细胞癌GRC-110、透明细胞癌786-O11细胞株具有显著的生长抑制作用。本研究拟应用不同浓度的苦参碱作用于人肾癌ACHN细胞系，进一步观察其对人肾透明细胞癌的生长抑制作用。图1苦参碱的结构Fig.1 Structure of matrine1材料与方法1.1材料1.2方法2结果2.1苦参碱对ACHN细胞增殖的抑制作用MTT结果显示，加入0.3、0.5、0.8、1.0、1.5g/L苦参碱的ACHN细胞，培养24、

9、48和72h后，细胞生长抑制率随苦参碱浓度的增高、作用时间的延长而升高(表1、图2)。2.2苦参碱作用后ACHN细胞形态结构的变化倒置显微镜下可见，正常培养的ACHN细胞呈单层生长，细胞排列密集，形态不规则，细胞体积较大，胞质透明，核小、位于细胞中央;苦参碱作用72h后，细胞体积变小，排列稀疏，胞质透亮度下降;1.5g/L苦参碱组见细胞密度明显降低，细胞形态趋于一致，呈圆形，核分裂相少见(图3)。表1不同浓度苦参碱作用不同时间后ACHN细胞的生长抑制率图2苦参碱作用后ACHN细胞生长抑制率的变化Fig.2 Growth-inhibiting effect of matrine on ACHN cell lineA：细胞生长抑制率与苦参碱作用时间的关系;B：细胞生长抑制率与苦参碱药物浓度的关系。图3苦参碱作用72h ACHN细胞的光镜下形态Fig.3 Micromorphology of ACHN cells after 72hs administration o