固相萃取_高效液相色谱法同时测定大豆中5种除草剂(1)_图文

1、作者简介 崔勇(1977-, 男, 硕士, 主管技师, 主要从事理化检验工作。=化学测定方法固相萃取-高效液相色谱法同时测定大豆中5种除草剂崔勇, 刘思洁, 张冠英, 张博, 王蕴馨, 李青(吉林省卫生监测检验中心, 长春 130062摘要 目的:建立大豆中5种除草剂多残留同时检测的高效液相色谱分析方法。方法:样品经甲醇提取, C 18固相萃取小柱净化后, 采用高效液相色谱方法分离, 检测波长为230n m 。结果:5种除草剂(普杀特、苯达松、氟磺胺草醚、喹禾灵、2, 4-滴丁酯 在0151010mg/L范围内线性良好, 回收率为7719%10118%, 相对标准偏差为1124%6150%,

2、方法的定量限为01050108m g/kg, 能达到国家有关上述除草剂残留限量的要求。结论:本法操作简便, 准确可靠, 为质量监控提供了参考。关键词 除草剂; 大豆; 高效液相色谱法; 固相萃取中图分类号 R 115 文献标识码 A 文章编号 1004-8685(2009 08-1790-03Si m u ltaneous determ inat ion of 5h erb icide residues in soybean by h igh per form an ce liqu id chro m a tography w ith solid pha se extractionCUI Y

3、ong , LI U S i 2jie , Z HA NG Guan 2yi ng, Z HA NG B o , W A NG Y un 2xin , LI Qing (Jili n Center f or San itatio n Inspectio n and Test , Changchun 130062, Ch i naAbstra ct O bjective :A h i gh per f or m ance li quid chro m atography (HPLC m e t hod for s i m u ltaneo us dete r m ina ti on of 5he

4、 rbi 2cides res i dues i n so ybean was deve l oped and evalua ted 1M ethods :The ana l ytes i n soy bean were extracted w it h m ethanol 1The ex 2tract was c l eaned up usi ng an SPE -C 18cartri dge , separated and determ i ned by H PL C w ith UV detector at a wave length of 230nm 1R e s u lts :The

5、 linear ity of 5herb i c i des was good i n t he range of 0151010mg/L1The recovery of the me t hod was 7719%10118%and relative standard devi atio n (RSD 1124%6150%1The li m its of quan tita ti on (L OQ of the 5herb i c i de res i dues were 01050108m g/kg1C onc l u sion :The m ethod is accurate , re

6、liab le and easy to be o perated 1It can be used for the deter m i na 2ti on of 5herb icide residues i n soybean 1K ey wor ds H erb icide ; Soy bean ; H i gh perfor m ance liqu i d chro m atography ; Soli d phase extracti on 大豆作为四大作物之一, 在我国以及全世界都有很大的种植面积, 特别近年来高产高油转基因品种的种植, 使大豆产量大大提高, 大豆田杂草众多, 危害严重,

7、 可使大豆减产40%50%。因此在大豆田使用化学除草剂已经得到各国的广泛认可1。大豆田常常使用多种类型除草剂, 除草剂残留分析方法也逐渐由单一种类除草剂的检测向多残留分析发展。目前我国除草剂残留检测方法主要是色谱检测法, 但一般是针对一种或两种除草剂的检测2, 3。为满足我国食品安全的快速检验的要求, 迫切需要研究大豆中除草剂多残留的同时快速检测技术。我们借鉴和参考其它种类除草剂的分析方法35, 建立了采用固相萃取-高效液相色谱法同时测定大豆中多种除草剂残留的检测方法。该方法灵敏, 线性范围宽, 结果准确可靠。1 材料与方法111 仪器及设备W a ters 2996型高效液相色谱仪, 附紫外

8、检测器; UP WS -1-10T 型纯水器(杭州永洁达科技有限公司; C 18小柱(500m g/3m , l W ate rs , US A ; 固相萃取装置(G l ass Spe-edM ate -12, ASI ; RV05-S T 型旋转蒸发器、HS260型振荡器(I KA; 3-18K 型离心机(S I G MA 。112 试剂乙腈(色谱纯; 甲醇(色谱纯; 正己烷、盐酸均为分析纯; 超纯水1812M 8#c m; 除草剂标准品:普杀特、苯达松、氟磺胺草醚、喹禾灵、2, 4-滴丁酯(德国DR 公司, 纯度99%以上 。113 液相色谱条件Zorbax SB-C 18色谱柱(5L

9、m, 250mm 416mm ; 柱温:30e ; 检测波长:230n m; 进样量:10L ; l 流动相:011%磷酸:乙腈(体积比为30:70; 流速:110m l/mi n 。114 标准曲线的制备储备液:精密称取普杀特、苯达松、氟磺胺草醚、喹禾灵、2, 4-滴丁酯标准品各10m g 用乙腈溶解定容至50m , l 储于4e 冰箱中。工作液:测定前用乙腈稀释成标准系列溶液, 浓度为015、110、210、410、810、1010mg /L, 经0145L m 滤膜过滤后, 进样20L , l 用峰面积对浓度绘制标准曲线。115 样品测定取500, 经打碎, 四分法称豆试1790中国卫生

10、检验杂志2009年8月第19卷第8期 Ch i nes e J ournal ofH ealt h Lab oratory T echnol ogy , Aug 2009; V ol 19 No 8样10100g 于离心管中, 加入30m l 甲醇, 超声提取10m in , 离心(3000r/mi n , 5m i n, 取上层清液于分液漏斗中, 残渣再按上述操作提取1次。合并上层清液。在甲醇提取液中加入3m l 水, 用10m l 甲醇饱和的正己烷振摇提取, 静置分层后, 弃正己烷层。同法重复提取一次。收集甲醇层于旋转蒸发器浓缩至近干, 待净化。分别用乙腈、甲醇和水各310m l 活化C

11、18固相萃取小柱, 再用01001m ol/LHC :l 乙腈(体积比为8:2 310m l 平衡小柱, 试样浓缩液用01001m ol/LH C:l 乙腈(体积比为8:2 510m l 溶解后上柱; 用01001m ol/LH C:l 乙腈(体积比为8:2 610m l 淋洗小柱, 抽干; 用810m l 乙腈洗脱待测组分, 收集全部洗脱液。控制淋洗和洗脱速度为20滴/min 左右。将洗脱液氮气浓缩吹干, 加入110m l 乙腈, 混匀, 经0145L m 滤膜过滤后, 用于HPLC 分析。2 结果与讨论211 检测波长的选择根据紫外光谱分别扫描可知, 待测的5种除草剂在200n m 附近均

12、有最大的紫外吸收。在230n m 处有较强吸收, 由于大豆试样基体复杂, 在200n m 波长下检测, 干扰严重, 因此采用230nm 作为检测波长, 此时样品中其他物质干扰较小, 方法有较高灵敏度。212 流动相的选择由于本实验采用的紫外检测波长是230n m, 乙腈在此波长下吸光值低, 分离效果比甲醇好, 所以选择乙腈作为流动相中的有机溶剂。为了改变待测组分在色谱柱上的保留行为, 采用011%磷酸作为流动相的水相, 各组分峰形明显改善。采用等度洗脱:011%磷酸:乙腈(体积比为30:70, 流速为110m l/m i n 待测组分获得满意的分离结果, 见图1 。11I m az ethap

13、yr(3116m i n; 21Ben t azone(3182m i n ; 31Fo m esafen(5159m i n; 41Qu i zalof op -ethyl (14120m i n; 512, 4-D-butyi ate(14154m i n图1 标准及样品色谱图(a 、b213 提取溶剂的选择实验中分别采用二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲醇作为提取溶剂, 结果表明:二氯甲烷提取样品时乳化现象严重, 而乙酸乙酯在用正己烷除脂过程中也出现了不同程度乳化现象。用乙腈或甲醇提取两次, 各待测组分的提取效率均在7217%10115%范围内。考虑到甲醇的价格比乙腈低, 而且测定大豆中除草剂

14、时, 所用提取溶剂量大, 因此本实验中采用甲醇作为提取溶剂。比较超声提取和震荡提取, 结果表明:超声提取所用效率更高, 因此确定采用超声提取10m i n 。214 固相萃取条件的优化分别采用硅胶柱和C 18固相萃取小柱进行试验, 结果表明C 18小柱净化的效果较好。选择的淋洗液为乙腈:011001m ol/LHC l(体积比为2:8 6m l 时, 可以去除杂峰干扰, 各待测物的回收率均高于75%。当淋洗液中乙腈比例加大或淋洗体积加大时, 普杀特和苯达松的回收率受到了显著的影响。本实验选用乙腈作为洗脱液淋洗待测物。取加标试样提取液于C 18固相萃取小柱上, 洗脱液量分别用10、810、410

15、和210m l 淋洗, 结果表明, 在洗脱体积810m l 时, 待测除草剂的洗脱效率已经达到要求, 此后如果再增加乙腈的用量进行洗脱, 则会洗脱杂质而干扰分析, 故本实验在进行SPE 处理时, 洗脱液乙腈的用量为810m l 。图2 固相萃取中淋洗条件优化215 标准曲线的线性范围与最低检出限将1145种除草剂标准溶液取20L l 注入H PLC , 以除草剂峰面积为纵坐标, 以浓度为横坐标, 5种除草剂标准在0151010m g/L范围内呈良好的线性关系, 5种除草剂的线性相关系数在019975019998之间。普杀特、苯达松和氟磺胺草醚的检出限为01015m g/kg, 定量限为0105

16、m g/kg, 喹禾灵和2, 4-滴丁酯的检出限为01025mg /kg, 定量限为0108mg/kg , 可以满足最大残留限量的检测要求。216 精密度和准确度试验在大豆空白样品中添加不同含量的3个水平5种除草剂的混合标准溶液, 按照115步骤进行回收率实验, 每个添加浓度平行测定6次, 测定精密度, 结果见表1。5种除草剂在0105110mg /kg浓度范围内, 加标回收率在7719%10118%, 所测定的RS D 在1124%6150%之间。方法的准确度和精密度均符合残留分析的要求。图3为5种除草剂加标 大豆样品的色谱图。11I m azet hapyr(3112m i n ; 21B

17、entaz one(3176m i n; 31Fo m esaf en (5148m i n ; 41Qu i zal ofop-ethyl (13195m in; 512, 4-D-bu t y i ate(14127m i n图3 大豆样品加标色谱图(下转第1791中国卫生检验杂志2009年8月第19卷第8期 Ch i nese Jou rnal ofH ea l th Laboratory Technol ogy , Aug 2009; Vo l19 N o 8作标准曲线有悖这个原理; 另外, 不同体积法进样易受进样针的准确性、仪器性能稳定性等因素的影响, 况且大体积进样在填充柱中适用,

18、 对毛细柱而言本身就存在严重过载的问题。鉴于上述原因, 采用多个标准管酯化、固定体积进样制作标准曲线更为现实、准确性更高。218 样品净化对普通的固体食品或含脂量不高的固体食品来说经过沉淀剂沉淀处理后其水提取液即可直接用于酯化, 有些高脂固体食品的基体比较复杂, 直接酯化后会有大量的杂峰产生, 这些杂峰不仅严重干扰甜蜜素的分离, 而且污染色谱柱, 使分析时间延长。通过将样品的提取液预先用正己烷萃取12遍可以有效地消除这些杂峰。图2是慕司水提取液直接酯化的分离图谱, 图3是慕司水提取液经正己烷预萃取后再酯化的分离图谱。从图2可以看到较多的杂峰, 全部分离完毕需要15m in ; 图3中的杂峰已被

19、消除, 只需分离7m in 就能完成分析(见图2、图3 。219 洗针液选择气相色谱法一般用试验溶剂作为洗针液, 在实验过程中发现正己烷提取液的粘滞性很强, 用正己烷不容易洗涤干净, 采用自动进样时容易造成卡针、断针现象, 用丙酮洗针能够很好地克服这个毛病, 并且不会对色谱分离造成影响。3 小结实验室检测方法应该适应现实社会政治、经济等各方面发展的客观需要, 以便更好地服务社会、促进社会和谐地发展。高脂固体食品中甜蜜素含量的毛细管气相色谱测定方法有效消除了高脂食品中的干扰因素, 灵敏度高、检测限低、线性范围宽, 操作比较简便、快速, 检测结果的准确性符合相关要求, 与国标方法相比有较大的优点,

20、 能够满足GB2760-2007中甜蜜素的限量要求, 同时也能满足美、英等国家和地区对食品中甜蜜素的限量要求, 适合于高脂固体食品甜蜜素含量的检测, 此法也适用于含脂量不高的普通固体食品。参考文献1GB2760-20071食品添加剂卫生标准S12王骏1毛细管柱气相色谱法测定食品中甜蜜素含量J1粮食与食品工业, 2006, 6(13:57-5913湛嘉, 俞雪钧, 计宏, 等1复杂基体的食品中甜蜜素的检测方法J1上海水产大学学报, 14(4:424-42714GB/T5009197-20031食品中环己基氨基磺酸钠的测定S15顾建华, 徐爱萍1毛细管气相色谱法测定黄酒中甜蜜素含量J1中国卫生检验

21、杂志, 2007, 17(5:940-94116郝义, 孙维, 唐岩1食品中甜蜜素的毛细管气相色谱法测定J1中国卫生检验杂志, 2005, 15(11:1341-139617殷德荣1气相色谱法测定食品中甜蜜素与前处理方法的再研究J1中国食品卫生杂志, 2000, 12(2:26-2718王竹天1食品卫生检验方法(理化部分 注解(下 M1北京:中国标准出版社, 2008:72-731(收稿日期:2009-04-29(上接第1791页表1 大豆试样的加标回收率及相对标准偏差试验(n =6 除草剂本底(m g/kg添加浓度(mg /kg回收率(% RSD (% 普杀特ND1108415411201578155113010582114121苯达松ND11010017615001595145141010588