断血流中断血流皂苷A的提取与含量测定

1、断血流中断血流皂苷 A的提取与含量测定十年论文机构京都名师论文中心，正规全面的论文刊物为您提供职称论文，毕 业论文，硕士论文，医学论文，教育论文等各类论文发表服务。摘要：目的：从断血流中提取分离断血流皂苷 A并建立其含量测定方法。 方法参考中国药典2005年版一部提取方法，采用加热回流法考察提取工 艺；采用高效液相色谱法。色谱柱 Diamonsil?（钻石）C18 （250X 4.6mm 5卩m ,采用甲醇一水（71:29）为流动相，流速 0.8ml /min,检测波长250nm 柱温40C。结果：断血流皂苷 A在0.30683.068卩g范围内呈良好的线性关 系，平均加样回收率为99.92

2、%, RSD为0.68 %。结论：该法简便、准确，重 复性好，适用于断血流中断血流皂苷 A的定量分析。关键词：断血流，断血流皂苷 A,高效液相色谱法断血流为多年生草本唇形科植物荫风轮Cli nopodium polycephalum（Van iot ） C.Y.Wu etHsuan 或风轮菜 C.chi nese （Ben th. ） O.K un tze 的干燥地 上部分.夏季开花前采收，除去泥沙，晒干.多分布于我国东北、华东、西南及陕 西、甘肃、山西、河北、河南、江西、湖北、湖南等地.1断血流味微苦、涩、凉.有止血的功效.临床可用于治疗各种崩漏、尿血、鼻衄、牙龈出血、创伤出 血、子宫肌瘤出

3、血.本文从断血流中提取分离断血流皂苷A并建立其含量测定方法，为断血流的进一步开发利用提供科学依据。1. 仪器与试剂Agile nt 1100 Series高效液相色谱仪 丄C 10ATvp泵,SPD- 10Avp紫外检测器,CTC 10Asvp柱温箱;Shimadzu Libror AEL 40SM （十万分之一）天 平;HN1006超声波清洗机（北京医疗设备二厂）；试剂甲醇（色谱纯），重蒸馏 水,其余试剂均为分析纯.实验药材均购于成都市中药材公司，经鉴定符合中国药典2005年版一部2相关项下的规定断血流皂苷 A对照品由四川省药品检验所提供。2. 提取工艺的研究参考中国药典2005年版一部22

4、8页“断血流”项下的鉴别方法及相关 文献报道，研究采用加热回流法进行提取，综合考虑对提取方法和提取时间进 行了考察，筛选最佳提取工艺。2.1提取溶剂的考察实验研究表明，断血流皂苷 A 溶于水、甲醇、 70%甲醇、乙醇、 70%乙醇， 故精密称定药材粉末 1g，5 份，分别加入水、甲醇、 70%甲醇、乙醇、 70%乙醇 10ml，加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml使溶解，加乙醚振 摇提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 1ml使溶解，置中性氧化铝柱（100120 目, 5g,内径11.5mm用水湿法装柱

5、）上，用 40%甲醇40ml洗 脱，收集洗脱液，蒸干，用流动相溶解并定容至 25rnl 量瓶中，取适量进行断 血流皂苷A的含量测定，测定结果见表1。由上表可见，以70聽醇为溶剂，断血流皂苷 A的含量最高，因此选用70% 乙醇为提取溶剂。2.2 提取时间的考察称取药材粉末10g，3份，精密称定，各加入70%醇10ml，分别加热回流 20min、30min、45 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml使溶解，加乙醚振摇 提取2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 1ml使溶解，置中性氧化铝柱（100 120 目, 5g,内径

6、11.5mm用水湿法装柱）上，用40%甲醇40ml洗脱，收集 洗脱液，蒸干，用流动相溶解并定容至 25rnl 量瓶中，取适量进行断血流皂苷 A的含量测定，测定结果见表2。由上表可见，加热回流 30 分钟后含量几无变化，试验选择提取时间为30min。综上所述，供试品溶液的制备方法为：取本品粉末1g,加70%L醇10ml，加热回流 30 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml 使溶解，加乙醚振摇提取 2次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加水饱和正丁醇振摇提取2次，每次10ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇 1ml 使溶解，置中性氧化铝柱（ 100120 目， 5g,内径11.5mm用水湿法装柱

7、）上，用40%甲醇40ml洗脱，收集洗脱液， 蒸干，用流动相溶解并定容至 25rnl 量瓶中，作为供试品溶液。3. 断血流皂苷A的含量测定3.1 色谱条件色谱柱Diamonsil?（钻石）C18 （250X 4.6mm 5卩m），采用甲醇一水（71:29） 为流动相，流速0.8ml /min,检测波长250nm柱温40C。3 43.2 溶液的配制（1）供试品溶液的制备 取本品粉末1g,加70%醇10ml，加热回流30分 钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水 10ml 使溶解，加乙醚振摇提取 2 次，每次10ml，弃去乙醚液，水液加水饱和正丁醇振摇提取 2次，每次10ml，合并正丁 醇液，蒸干，残渣加甲

8、醇1ml使溶解，置中性氧化铝柱(100120 目, 5g,内 径11.5mm用水湿法装柱)上，用 40%甲醇40ml洗脱，收集洗脱液，蒸干, 用流动相溶解并定容至 25rnl 量瓶中，作为供试品溶液。(2) 对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的断血流皂苷 A 配置每 ml 含断 血流皂苷A为0.386mg的对照品溶液。3.3 线性关系的考察精密称取经五氧化二磷干燥至恒重的断血流皂苷A15.34mg置50ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制备成每毫升含断血流皂苷A0.3068mg的对照品液，精密吸取该液1, 2, 4, 8，10ml，置10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻 度，摇匀，制备成每

9、ml 含断血流皂苷 A30.86， 61.36， 122.72， 245.44， 306.80卩g的对照品溶液，分别精密吸取上述对照品10ul，注入高效液相色谱仪中，上述色谱条件测定峰面积。并且以对照品的进样量X (卩g)为横坐标，峰面积丫为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为 丫 = 757.91X+ 1444.8 , r = 0. 9996。结果表明，断血流皂苷 A对照品在0.30683.068卩g范围内与峰面值 具有良好的线性关系。3.4 精密度试验取对照品溶液，连续进样6次，每次10卩l，记录峰面积，得RSD为0.8 %, 结果表明仪器的精密度良好。3.5 稳定性试验精密吸取供试品溶液，

10、分别在 0、2、4、8、24、72h进样10卩l，记录峰 面积，得RSD为0. 97%,结果表明供试品溶液在 72h内，基本稳定。3.6 加样回收率试验分别精密称取样品 0.5g， 5份，分别精密吸取对照品溶液(0.386mg/ml )0.5ml ，加入到样品中，照供试品溶液制备方法操作，测得含量， 计算加样回收率，结果见表 3，表明本方法回收率较好，方法可行。3.7 重复性试验精密称取同一批样品( 080703) 0.5g， 5份，按供试品制备方法处理，并测定含量，结果分别为 0.382、0.379、0.385、0.384、0.378mg/g , RSD为 0.92%，表明本方法的重复性良好

11、。3.8 样品测定取3批断血流药材，分别按供试品溶液制备方法处理，各进样10卩l，测定其中断血流皂苷 A 的含量，结果见表 4。色谱图见图 2。4. 讨论实验结果表明，本实验方法测定断血流皂苷 A 含量的方法简便、灵敏、重 现性好。 2005年版中国药典中，断血流项下没有含量测定项。为使其质量 标准更加科学可靠，有必要为原药材建立含量测定指标，并依此更好地控制原 药材的质量。实测得断血流皂苷 A在断血流药材干品中的含量约为 0.036 % 0.038，已超过万分之一，按国家食品药品监督管理局的新药质量标准研究技 术要求，此成份可独立作为含测指标。参考文献1 戴金瑞，施大文，张和岑 . 风轮菜属 5 种药用植物的形态、解剖及化 学成分 . 药学学报， 1984， 19（6）: