活动期类风湿关节炎血清MIF与TNF_IL_1_表达的相关性研究

1、558ClinicalMedicalJournalofChina,2008.Vol.15,No.4中国临床医学2008年8月第15卷第4期论著活动期类风湿关节炎血清MIF与、表达的相关性研究TNF2IL21李振彬1杨志霞1,2徐铮1刘彦卿1耿丽芬1摘要目的:探讨活动期类风湿关节炎(rheumatoidarthritis,RA)血清巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhibito2(TNF2)、(IL21)的相关性。方法:根据DAS积分选择活动期和稳定期RAryfactor,MIF)与肿瘤坏死因子2白细胞介素21、浓患者各30例,并设30名健康者为正常对照;分别采用双

2、抗体夹心ELISA法和放射免疫法检测血清MIF和TNF2IL21度;采用SSPS11.5软件进行相关性等统计学分析。结果:活动期RAMIF(P<、含量呈正相关关系;活动期RA、0.05),且与血清TNF2IL21关节压痛指数、ESR、CRP、PLT均呈正相关,而与年龄、病程、晨僵时间和RFMIF水平显著增高且与TNF2表达密切相关。IL21;关键词类风湿关节炎;肿瘤坏死因子2白细胞介素21中图分类号R593.22、inActiveRheumatoidArthritisLIZhenbin1TheCorrelationsbetweenSerumMIFandTNF2IL21YANGZhixia

3、XUZhengLIUYanqingGENGLifen1.DepartmentofRheumatology,theChinesePLABethuneInternationalPeaceHospital,Shijiazhuang050082;2.HandanMunicipalFirstHospitalinHebeiProvince,Handan056002Objective:Toexplorethecorrelationsbetweentheserummacrophagemigrationinhibitoryfactor(MIF)andtumorAbstract2(TNF2)、(IL21)inac

4、tiveRA.Methods:ClinicaldataofsixtyRApatientswereclectedbycarry2necrosisfactor2interleukin21ingoutretrospectiveanalysis,thenonthebasisofDASaccumulatedpoints,theyweredividedintoactiveandinactivegroupre2spectively,whowerecontrastedwith30healthadults.Enzymelinkedimmunosorbentassaywasappliedtodetectserum

5、MIFconcentration.ThecorrelationswereobservedbetweenserumMIFandtheactivityofRAdisease.Results:ThereweremarkedincreaseinserumMIFofpatientswithactiveRAthanthatofinactiveRAandnormalvolunteers(P<0.05),buttherewerenoinsignificentdifferencebetweenthetwolatters.Thereweresignificantcorrelationsbetweenthes

6、erumMIFconcentration,ac2tiveinflammatoryindexofRAdisease,bloodsedimentationrate(ESR),C2reactiveprotein(CRP),plateletcounting(PLT),IL2,TNF2,swelljointindexandtendernessjoint,butnosignificantdifferencewereobservedbetweentheserumMIF,age,dis21easecourse,morningstiffnessandrheumatoidfactor(RF).Conclusion

7、:TheserumMIFconcentrationissignificantlyincreasedinpatientswithactiveRA,anditmaybeausefulparameterformonitoringdiseaseactiveofRAandtherapeutictarget.Diseasereactiveness;Macrophagemigrationinhibitoryfactor;Tumornecrosisfactor2KeyWordsRhumatoidarthritis;Interleukin21巨噬细胞移动抑制因子(macrophagemigrationinhib

8、itoryfactor,MIF)是一种含有115个氨基酸的蛋白质,其相对分子量质量约12.5kDa,以/结构的同源三聚体形式存在,垂体促肾上腺皮质细胞、单核细胞/巨噬细胞和活化的T淋巴细胞是体内MIF的基本来源1,2。MIF以具有抑制巨噬细胞游走及促进巨噬细胞增殖的作用而得名,被认为(IL21)、是炎性细胞因子白细胞介素21肿瘤坏死基金项目:1.河北省科技厅指导计划基金项目(编号072761191);2.河北省中医药管理局科研计划基金项目(编号2007043)作者单位:1.中国人民解放军白求恩国际和平医院风湿免疫科,河北石家庄050082;2.河北省邯郸市第一医院,河北邯郸056002(TNF

9、2)的上游调控因子3,在免疫调节中因子2起重要作用。近年研究4发现,MIF在RA、系统性红斑狼疮(SLE)、慢性肾小球肾炎、肿瘤、动脉粥样硬化等多种疾病中的表达明显增强,提示MIF可能成为炎性疾病治疗的新靶点。本研究拟探讨我国北、方RA患者血清MIF的表达及其与TNF2IL21的相关性,并分析MIF在判断RA病情活动中的意义。1资料与方法1.1病例选择60例RA患者为2005年9月2006年10月白求恩国际和平医院风湿免疫科门诊及住院患者,均符合1987年美国风湿病学会修订的RA分类标准。1.2病例分组根据1990年疾病活动性评分中国临床医学2008年8月第15卷第4期ClinicalMedi

10、calJournalofChina,2008.Vol.15,No.4559(diseaseactivityscore,DAS)5,计算DAS积分(积分大于3.2为RA活动期,小于3.2为RA稳定期)。其中活动期RA30例,均未应用控制病情抗风湿药(DMARDs)治疗,其中男性7例,女性23例,年龄(1865)岁,平均年龄(49.70±13.37)岁,病程(2个月216年);稳定期RA30例,确诊后均接受NSAIDs及甲氨蝶呤、来氟米特或羟氯喹等治疗,其中男性5例,女性25例,年龄(1968)岁,平均年龄(48.70±11.23)岁,病程(6个月20年)。活动组与缓解组的性别

11、、年龄、病程比较均无统计学意义。所有患者均排除重叠其他风湿病或合并心、脑、肝、肾和造血系统等严重疾病。另选取健康体检者30,中男性6例,女性62)(43.37±11.93)岁,、。1.3记录晨僵时间、压痛关节数、肿胀关节数,检测类风湿因子(RF)、C2反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、血小板计数(PLT)。1.4MIF检测于患者治疗前采静脉血,270保存。采用双抗体夹心ELISA法检测MIF浓度,试组别活动期缓解期晨僵时间(min)63.5±12.3313.0±11.93剂盒购自美国Adlitteram试剂公司,按照试剂盒说明书操作。在酶标仪上450nm处读取吸

12、光度(OD)值,根据标准曲线计算各血清样品MIF浓度。和IL21检测采用放射免疫法1.5TNF2(RIA)测定TNF2、浓度,试剂盒均由中国人IL21民解放军总医院科技开发中心放免所提供,严格按照说明书操作。上预先编好程序的自动计数仪,直接测得相关参数、标准曲线及样品浓度。1.6统计学处理所有数据均以珔x±s表示。采用SPSS11.5统计分析软件,t;(r)表示,并进行t05。2.1活动期与缓解期RA患者病情活动相关指标的比较按DAS积分判断为活动期的RA患者其晨僵时间、肿胀关节数、压痛关节数和外周血小板计数明显增多,血沉、C2反应蛋白明显增高,与缓解期RA相比具有显著差异(P<

13、;0.05);但两组的RF2半定量(对数绝对值)则无统计学意义(P>0.05)(表1)。(-1)49.6±29.837.7±4.2表1活动期与缓解期RA患者临床及实验室指标比较(珔x±s,n=30)肿胀关节(个)17.4±5.835.9±3.6P<0.05压痛关节(个)20.1±8.636.6±4.2血沉(mmh-1)58.3±37.438.1±4.1(109L-1)345.8±100.33186.6±58.9RF(对数值)1.8±0.41.5±1.7注

14、:与缓解期RA比较,、的表达活2.2各组血清MIF和TNF2IL21和IL21水平均显动期RA患者血清MIF、TNF2著高于缓解期RA患者及健康对照者,差异具有统计学意义(P均<0.05);而缓解期RA患者上述血清炎性细胞因子表达与健康对照者相比均无统计学意义(P>0.05)(表2)。、表2RA患者及健康者血清MIF和TNF2IL21-1的表达(珔x±s,ngL)组别活动期缓解期正常对照例数303030MIFTNF2IL2153.71±14.5832.52±0.4330.28±0.09333.88±7.5729.43±2.

15、132.04±0.431.83±0.230.18±0.050.15±0.02注:与正常对照组比较,3P<0.05;与RA缓解期比较,P<0.05、表2.3活动期RA患者血清MIF与TNF2IL21达的相关性分析直线相关分析结果表明,活动期、含量呈正相RA患者血清MIF水平与IL21TNF2关关系(r分别为0.883,0.583;均P<0.05)(图1)。3讨论RA是临床最常见的炎性关节病和主要致残因素之一。RA的主要特征是基于炎性刺激的滑膜细560ClinicalMedicalJournalofChina,2008.Vol.15,No.

16、4中国临床医学2008年8月第15卷第4期胞增殖,从而导致具有侵袭性的血管翳形成,血管翳的扩张可促进软骨和骨的破坏,导致关节功能丧失7。目前研究认为,众多的炎性细胞因子在RA滑膜炎的启动和持续中发挥重要作用;在这一细胞和IL21起核心作用。TNF2因子网络中,TNF2和IL21具有许多相似的生物学作用,如促进细胞因子分泌、表达粘附分子、诱导细胞增殖和产生基质金抑制剂和IL21受体抑制剂属蛋白酶等。TNF2(IL21Ra)已被成功地用于RA的治疗。但是,只有抑制剂有显著疗效,且这种1/3的RA患者对TNF2有效性需要持续用药来维持,停药则导致疾病复发;IL21Ra对RA的疗效尚不如TNF抑制剂。

17、析,其它细胞因子在RA8近年研究表明M子,因子,(cycloxygenase,COX)途径的中间产物,促进炎症和免疫反应。在RA患者的滑膜组织中,MIFmRNA和MIF蛋白增多;且在T细胞浸润的滑液中,MIF水平增加。MIF还可通过酪氨酸激酶、蛋白激酶C(proteinkinase,PKC)、Ap21和NF2B的途径上调基质金属蛋白酶21和基质金属蛋白酶23的表达,从而诱导PKC参与关节破坏的过程9。RA患者经治疗后,随着临床症状、和改善,MIF水平明显降低,滑液中TNF2TGF2IL21也同时降低。MIF作为RA新的治疗靶点的证据主要包括以下几个方面:(1)MIF调节TNF和,IL21受体表

18、达和功能,上调巨噬细胞生成TNF2上调基质金属蛋白酶(MMPs)和COX22mRNA在类风湿滑膜成纤维细胞的表达426;(2)在RA滑膜组织,MIF在滑膜T细胞呈过度表达,滑液MIF水平明显增高7;(3)MIF缺失小鼠在LPS刺激反应)产生降低8;(4)MIF时炎性细胞因子(如TNF2单克隆抗体可显著抑制RA模型的关节炎症9。上述研究提示,MIF可能是RA滑膜炎症的关键性上游调控因子,与抑制其他炎性细胞因子相比,以MIF为治疗靶点,抑制MIF活性可能是治疗RA的更有效措施。本研究结果显示,正常健康人血清MIF浓度维持于低水平,而RA患者则较正常对照组显著增高,RA活动组较缓解组增高更明显(P&

19、lt;0.05);RA患含量呈正相关者血清MIF水平与血清IL21、TNF2关系。这可能与MIF能直接或间接地刺激巨噬细胞、血管内皮细胞等分泌有生物活性的炎症因子和IL21等有关。此外,血MIF增高程度与临TNF2床反映病情活动的炎性指标存在显著相关,提示MIF不仅是RA的治疗靶点,而且血清MIF水平还可作为判断RA1MacrophagemigrationinhibitoryfactorJ.CnitCareMed,2002,80:27235.2BernhagenJ,CalandraT,BucalaR.Regulationoftheimmunere2sponsebyMIF:biologicala

20、ndstructurefeaturesJ.JMolMed,1998,76:151.3InazukaM,TahiraT,HoriuchiT,etal.AnalysisofP53tumoursuppressorgenesmaticmutationsinrheumatoidarthritissynovi2umJ.Rhematology,2000,39(3):2622266.4陈伟英,李广然,梁伟,等.血清巨噬细胞移动抑制因子水平与SLE活动性的关系J.新医学,2004,35(11):6672668.5vanderHeijdeDM,vantHofMA,vanRiclPL,etal.Judgingdiseaseactivityinclinicalpracticeinrheumatoidarthritis:firststepinthedevelopmentofadiseaseactivityscoreJ.AnnRheumDis,1990,49:916.6GiatromanolakiA,SivridisE,MaltezosE,etal.Upregulatedhypoxiaan