牛样品采集与运送方案

1、附件4: 牛样品采集与运送方案牛样品既可以按以前的方式进行甲醛固定处理，也可以按下面方案一的方式进行冷冻保存，然后运送至检测实验室进行检测。具体方法见方案一：新鲜牛脑样品的采集与运送方案和方案二：甲醛固定的牛脑样品的采集与运送方案。参考实验室建议采用方案一的规定进行采样和运送，该方案也是当前国际上广泛采纳的方案。方案一：新鲜牛脑样品的采集与运送方案1专用采样工具采集牛脑样品的特点：国家牛海绵状脑病参考实验室根据国际上通用的牛脑采样工具设计出我国的牛脑样品采样工具。该工具为塑料制品，呈勺子形状，前端带有锋利的齿，便于切断脑组织。这种采样方式有着非常明显的优点，如使用简单、节约成本、工作效率高、机

2、动性强、采样安全。2. 采样物品准备：数码照相机（或数码摄像机）、专用的采样勺（一把勺子最多可以采集三份样品，牛脑采样勺为蓝色）、医用剪刀（一把，长10cm左右）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）、口罩、工作服、样品杯（可向参考实验室索取）、记号笔、冰袋（至少3块大号的冰袋）、大号的透明胶带、带盖泡沫箱（有厚度，无破损，大小适中）、签字笔或圆珠笔、采样单（见附件3）、吸水纸等。3采样步骤：（1）如果有比较典型的BSE疑似牛，则要拍照或摄像留下证据。要对临床疑似牛进行拍照或摄像，并且收集临床疑似牛的其他材料如档案等。采集临床疑似牛时，采样人员还需要通过问询等方式弄清该病牛的其他情况，问询内

3、容可以包括饲养历史、来源、流动等情况。这些证据材料必须存档和备份，运送样品时一并寄送至检测实验室。（2）每次采样至少有两人在场，其中一人戴好一次性手套和橡胶检查手套，另外一人专门登记和开启样品杯（见图1）而不需要戴手套。通过观察牙齿检查牛的年龄（见附录2），大于3岁的牛（第二对永久门齿长出）才可以采样，但如果该动物为疯牛病或痒病风险动物则没有年龄限制。（3） 在平整地面倒置牛头，即牛头的两角和鼻子靠地放置。同时，另外一人开始填写采样单，并且在样品杯上标记上对应的样品编号（以县/市名+序号，如合肥1号）。一个样品杯只能装一个脑样品。（4）在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜（见图2），目的是便于插入采样

4、勺。然后用一个手指伸入枕骨大孔中，沿着延脑（延髓）转一周（见图3），目的是切断延脑与头骨之间相连的神经和血管，以便于脑组织顺利挖出。（5）从延脑腹侧（也即勺子从枕骨大孔的上面进入，见图4）将采样勺插入枕骨大孔中，插入时采样勺要紧贴枕骨大孔的腔壁，以免损坏延脑组织。采样勺插入的深度约为5-7cm（采羊脑时插入深度约为4 cm），然后向上一扳勺子手柄，同时往外抠出脑组织和勺子，延脑便可完整取出。注意：尽量保护好延脑“三叉口”处（脑闩部，见图5）的组织的完整性。（6）将脑组织放入编好号的样品杯中，拧紧杯盖，然后放置在盛有冰袋的泡沫箱中，用透明胶带将泡沫箱的盖子绑紧。注意：采好的样品必须在5小时之内放

5、入冰柜中冷冻上，以防腐败；样品至少要冷冻24小时才能往疯牛病检测实验室运送。（7）各地送来的样品要先在省兽医总站里统一清理，如果没有冷冻好的样品，则必须及时放入冰柜中冷冻，然后由省兽医总站统一将样品发送至检测实验室。4样品运送：准备好带盖的结实的泡沫箱，该泡沫箱必须无任何破损，并且大小适中（根据样品的量来决定）。先在泡沫箱的底部铺上一层吸水纸，之后放入冷冻好的样品，然后在侧面放入几块冷冻好的冰袋，最后在样品的上面放入几块冷冻好的冰袋，盖紧箱盖。用大号的透明胶带封好箱口，再横向打好包，箱子外面用记号笔写上“易碎勿压”以及向上的“箭头”等字样，然后由省动物疫病预防控制机构统一运送。打好包的样品必须

6、及时发送，并确保4天之内运送至检测实验室。提示：一、这种包裹最好通过航空途径运送或由专人运送，并切记要注明“易碎勿压”。二、切记在采样单上写明送样人及其联系方式，样品检测完后实验室要出具检验报告并寄给送样人。方案二：甲醛固定的牛脑样品采集与运送方案1材料（1） 数码照相机（或数码摄像机）、采样单、复写纸和圆珠笔或铅笔（2） 医用胶布（用于捆装有样品的纱布，并在其上写上样品编号）（3） 电动骨锯或采样勺、骨钳、斧头（4） 解剖刀、剪刀、乳胶手套（5） 纱布、棉线、密封塑料桶（容积不少于5000ml）（6） 固定液：即10%福尔马林（甲醛）生理盐水 氯化钠8.5g ；水900ml ；40%福尔马林

7、（甲醛）100ml2采样步骤（1）如果有比较典型的BSE疑似牛，则要拍照或摄像留下证据。要对临床疑似牛进行拍照或摄像，并且收集临床疑似牛的其他材料如档案等。采集临床疑似牛时，采样人员还需要通过问询等方式弄清该病牛的其他情况，问询内容可以包括饲养历史、来源、流动等情况。这些证据材料必须存档和备份，运送样品时一并寄送至检测实验室。（2）填写采样单（见附件3）根据实际情况，按采样单要求认真填写。采样地点相同的样品可以登记在同一张采样单上。（3）取样A.电锯采样法（见图7） a.用电锯沿两牛角根部到枕骨大孔上边缘的方向将牛颅腔打开。b.用手术刀将脑膜切开，骨钳打开颅腔，然后把脑神经和脑血管切断。c.取

8、出整个脑组织包括大脑、小脑和脑干（间脑、中脑、脑桥和延脑）；注意千万不要把脑干损坏。d.将每头牛的脑组织用纱布松松地裹住(纱布容易透水)，千万不能紧，一定要松，然后将写有编号名称的医用胶布（用圆珠笔或铅笔将编号写在上面，编号：地名+序号+样品类别名，如“合肥市10号牛”）用棉线栓在纱布口处，注意不让胶布脱落。处理好后放入10-20倍体积10%福尔马林生理盐水中固定一周。注意标签编号与采样单的编号相对应。 e.用新的福尔马林生理盐水更换旧的固定液，密封在塑料桶中，桶外贴上桶中所有牛脑的编号，以便我们处理牛脑时不开桶盖便可知桶中的牛脑情况。每个塑料桶可根据大小放置相应数量的牛脑。B.采样勺采集法（

9、见图1图6）a.准备专用的采样勺（一把或二把便可）、医用剪刀（一把）、一次性手套、橡胶检查手套（即乳胶手套）以及其他采样用品如采样单等。b.戴好一次性手套和橡胶检查手套，专门登记的人员不需要戴手套。通过观察牙齿检查牛的年龄。c.在平整地面倒置牛头，即牛头的两角和鼻子靠地放置。d.在枕骨大孔处用剪刀剪开脑硬膜，目的是便于插入采样勺。然后用一个食指伸入枕骨大孔中，沿着延脑转一周，目的是切断延脑与头骨之间相连的神经和血管，以便于延脑的取出。e.从延脑腹侧（也即勺子从枕骨大孔的上面进入）将采样勺插入枕骨大孔中，插入时采样勺要紧贴枕骨大孔的腔壁，以避免损坏延脑组织。采样勺插入的深度约为5-7cm（采羊脑

10、时插入深度约为4 cm），然后向上一扳勺子手柄，同时往外抠出脑组织和勺子，延脑便可完整取出。f.其余步骤见A中的d和e。注：对于临床疑似牛，采下脑后，从脑中线一分为二，一份用于甲醛固定，另一份用于20冷冻并在低温下运送至参考实验室。3. 样品的包装与运送（1）单独将采样单邮寄给检测实验室，切不可与样品一起邮寄，目的是防止采样单被污染。（2）将固定好的牛脑放在几个大的带内盖的塑料桶中密封，注意每个牛脑都随身带有一个唯一的编号，桶外壁上也标明桶内的所有牛脑编号。运送时桶里的固定液可以不按10-20倍体积的量，而保留适当的量便可，适当的量是以浸没牛脑为准，不过运送时必须更换成新的固定液。（3）运输时

11、，将装有样品的塑料桶用木架子固定好，以防运输途中颠倒。（4）在木架子外面加两张不干胶标签，一张注明样品名称、采样单位与地址及联系电话，另一张注明放置方向、小心、易碎和切勿倒置等字样。（5）样品最好由专人或经航空运至指定实验室。样品杯 图1 样品杯及采样用品延脑脑硬膜图2 用剪刀剪开脑硬膜图3 将手指沿延脑转一周，以切断神经与血管图4 将采样勺沿延脑的腹侧插入，并紧贴枕骨大孔的腔壁图5 脑闩部的位置脑闩部组织（不能损坏的部位） 图6 采样工具及取出的延脑组织沿此线锯开枕骨大孔牛角牛眼图7 电锯采集牛脑- 13 -附录2：一、牛的牙齿与对应年龄（见表2和附图2）牛的年龄主要通过门齿来判断。牛的牙齿分为乳齿和恒齿（永久齿）（见附图1），乳齿小而洁白，齿间有孔隙，齿薄而细致，长到一定年龄便脱落换为恒齿。恒齿比乳齿大而粗壮，齿冠长而排列整齐，齿间无孔隙，齿根呈棕黄色。永久门齿的长出顺序是钳齿、内中间齿、外中间齿和隅齿，它们对应的别一种叫法是第一对永久门齿、第二对永久门齿、第三对永久门齿和第四对永久门齿。表2 牛的牙齿与对应年龄永久门齿生长情况对应年龄第一对永久门齿长出2岁第二对永久门齿长出3岁第三对永久门齿长出4岁第四对永久门齿长出(齐口)5岁前三对永久门齿齿面重磨，第四对永久齿也出现磨损6岁第一对永久门齿齿面呈方形7-8岁第二对永久门齿齿面呈方形8-9岁第一对永久门