薄层扫描法测定凤香乐外用海绵条中苦参碱的含量

1、    薄层扫描法测定凤香乐外用海绵条中苦参碱的含量        摘要用薄层扫描法测定凤香乐外用海绵条中苦参碱的含量。线性范围1.54.5g，r=0.9993(n=5)，加样回收率100.3%，RSD=3.37%(n=7)。方法准确，可靠。关键词苦参碱薄层扫描法凤香乐外用海绵条 凤香乐外用海绵条是中药三类新药，该品是浸渍了地龙、苦参、黄柏、丁香、蛇床子等7味药材混合提取液的黄色外用海绵药条。具有清热湿，止痒杀虫功效。本方中苦参为君药，苦参主要含苦参碱等生物碱成分1，对苦参碱

2、采用薄层扫描法进行含量测定2、3、4，结果较为满意。1仪器与试药瑞士CAMAG薄层点样仪，薄层扫描仪。样品及阴性对照品由广州兴华药厂提供；苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供；苦参药材购自广州市药材公司，经鉴定符合中国药典(95版)一部规定；硅胶G为青岛海洋化工厂生产；中性氧化铝为薄层层析用规格；所有试剂均为分析纯。2溶液制备2.1对照品溶液的制备精密称取室温真空干燥至恒重的苦参碱对照品适量，加甲醇溶解，使成浓度0.5mg/ml，即得。2.2供试品溶液的制备取本品5枚，用石油醚150ml(3060)浸没，水浴回流2h，弃去石油醚，药条吹干，加碱性氯仿150ml(3ml浓氨水250ml氯仿)

3、浸没，时时振摇，2h后，倾出浸出液，继加碱性氯仿200ml浸泡过夜(16h以上)，合并浸出液，将药条逐一放入30ml医用玻璃注射器内，每枚分别用30ml碱性氯仿分3次洗涤，挤干，用氯仿洗涤容器合并浸出液及洗涤液，水浴浓缩至干。残留物用少量氯仿转移至已处理好的中性氧化铝柱上，用氯仿250ml洗脱至洗脱液无色，收集洗脱液，回收氯仿并浓缩至干，残留物用甲醇溶解，定量转移至1ml量瓶内，并稀释至刻度，摇匀，即得。2.3阴性对照品溶液的制备取缺苦参药材的样品5枚，照供试品溶液制备方法处理，即得。3实验条件及其考察3.1色谱条件硅胶G薄层板：以3%CMC-Na中含有2%NaOH为粘合剂，苯-丙酮-甲醇(8

4、30.5)为展开剂，改良碘化铋钾溶液-无水乙醇(21)为显色剂，将薄层板浸于显色剂中1秒，冷风吹干，至斑点清晰，于100%湿度环境中放置1.5h至底色为米黄色。3.2扫描条件s=510nm，r=650nm，Sx=3，双波长反射法锯齿扫描。3.3色谱分离度及干扰因素的考察对空白样品溶液进行了测定，结果在苦参碱相应的位置上无吸收；供试品溶液得到分离度良好的色谱。见1。1薄层色谱药材 苦参碱对照品 阴性对照品 样品3.4线性关系考察精密量取对照品溶液3、4、7、8、9l，分别点于同一薄层板上，展开，显色，测定。以斑点峰面积积分值A为纵坐标，点样量X(g)为横坐标作，得一直线，回归方程为：A=6019

5、.21+5735.94Xr=0.9993n=5。3.5稳定性考察苦参碱为双喹嗪类生物碱，因其本身无紫外吸收，故参照文献2用改良碘化铋钾显色后，扫描测定，其显色后可见光吸收谱max于510nm处，与文献报道相符。用无水乙醇-改良碘化铋钾溶液(21)浸板显色后，薄层板背景色为橙黄，而苦参碱斑点色为橙红，背景色与斑点色反差较小，且背景吸收较大，扫描灵敏度小，基线不平。经反复试验，发现显色好的薄层板于空气中放置一段时间后，待显色剂中碘挥散尽，使背景变成米黄色后，再扫描，此时基线平稳，灵敏度提高，扫描谱见2。经观察在70%80%湿度环境中放置时间4h，在100%湿度环境中放置时间1.5h。3.6精密度试

6、验取6份同一供试液3l，点于同一薄层板上和分别点于6块薄层板上，测定，计算，结果同板的RSD为1.9%，异板的RSD为4.2%。2苦参碱显色后扫描谱3.7回收率试验取已知含量药条5枚，加入苦参碱对照品0.57mg，按溶液制备项下的供试品溶液制备方法操作，按样品测定项下方法测定。结果平均回收率为100.3%，RSD=3.37%，n=7。4样品测定精密吸取供试品溶液3l，对照品溶液3l与4l，分别交叉点于同一薄层板上，展开，取出，冷风吹干，于显色剂中浸渍1秒，取出，冷风吹干，至斑点清晰，于100%湿度环境中放置1.5h后，用另一干净玻璃覆盖，并用胶布将四周封闭、固定，扫描测定。用外标两点法计算苦参

7、碱含量，本品含苦参碱(G15H24N2O)计算，测定结果见表1。5讨论5.1对于苦参碱的显色，我们曾参考文献用改良碘化铋钾溶液喷雾，发现重现性较差，扫描基线不稳，经反复实验，我们改用无水乙醇-改良碘化铋钾溶液(21)浸板显色，显色后的薄层板底色均一，扫描基线平稳，此法设备简单，重现性良好。表1样品中苦参碱含量测定结果批号每克生药中含苦 参碱量(mg)每枚中含苦参碱量(mg)10.0590.11820.0600.12030.0830.16640.0540.10850.0690.13860.0950.19070.1040.2085.2对色谱条件摸索，我们曾试用中性固定相、碱性固定相、酸性固定相，结果发现在固定相中加入NaOH，苦参碱的Rf值变小，斑点扩散减小，扫描精度提高，同时也增强了苦参碱在固定相中的稳定性，为浸板显色创造条件。 陶涛(广州市胸科医院广州510095)参考文献1，江苏新医学院编.中药大辞典(上册).上海科学技术出版社，1977：12832，中国药典(95版)一部.1995：1763，陈勇，甄汉深，等.薄层扫