第十八章平面色谱法五版ppt课件

1、 第十八章 平面色谱法 第一节 平面色谱法的分类和原理 一、平面色谱法的分类 薄层色谱法： 纸色谱法二、平面色谱法参数二、平面色谱法参数定性参数：定性参数： 1. 比移值比移值Rf： 原点到斑点中心的原点到斑点中心的间隔间隔 Rf = 原点到溶剂前沿的原点到溶剂前沿的间隔间隔 l = l0 ll0 1K大，大，Rf小小 2薄层板一定，对于极性组分薄层板一定，对于极性组分 展开剂极性展开剂极性大，大，Rf大容易洗脱大容易洗脱 展开剂极性展开剂极性小，小，Rf小小 不容易洗脱不容易洗脱 3Rf范围：范围：0 Rf 1 组分迁移速度和间隔小于展开剂迁移速度和间隔组分迁移速度和间隔小于展开剂迁移速度和

2、间隔 Rf = 0.20.8常用常用 0.30.5最正确最正确讨论：讨论：2. 相对比移值Rr： 原点到样品斑点中心的间隔 Rr = 原点到参考物质斑点中心的间隔目的：消除系统误差第二节第二节 薄层色谱法薄层色谱法、分类和原理、分类和原理分类吸附薄层色谱分配薄层色谱胶束薄层色谱原理吸附系数的差异 分配系数的差异 分配系数的差异固定相吸附剂液体聚酰胺流动相有机溶剂正相：有机溶剂反相：甲醇-水含表面活性剂 二、吸附薄层色谱法(一)吸附剂1.硅胶：-SiOH 特点：(1) 吸附力与含水量有关。含水量高吸 附力下降。 (2) 微酸性 (3) 分别酸性或中性物质，如有机酸、氨 基酸、甾体 种类：种类：

3、硅胶硅胶H：不含粘合剂，制板时需另加粘含剂。：不含粘合剂，制板时需另加粘含剂。 硅胶硅胶G：硅胶和煅石膏混合而成。：硅胶和煅石膏混合而成。 硅胶硅胶HF254：不含粘结剂含剂：不含粘结剂含剂,而含萤光剂，在而含萤光剂，在 254 nm紫外光下呈剧烈黄绿色荧光紫外光下呈剧烈黄绿色荧光背景。背景。 2.氧化铝： 氧化铝G、氧化铝H、氧化铝HF254等 表19-1 硅胶和氧化铝的含水量与活性关系硅胶含水量 %活性级氧化铝含水量%0 （最强）053156251038 （最弱）15二展开剂 展开剂选择的普通原那么: 类似相溶 吸附剂和展开剂的选择吸附剂和展开剂的选择被分别物质的极性被分别物质的极性 吸附

4、剂吸附性能吸附剂吸附性能 展开剂极性展开剂极性 小小 强强 小小 大大 弱弱 大大一一) )薄层板的制备薄层板的制备 三、薄层色谱法操作方法三、薄层色谱法操作方法 吸附剂涂铺均匀薄层板要求: 外表光滑 厚度一致动画动画1. 载板的预备： 要求：外表光滑、平整清洁。2. 软板的制备： 直接将吸附剂置于玻板上并使成为一均匀薄层。 3.粘合薄层板硬板的铺制 (1) 粘合剂：煅石膏 羧甲基纤维素钠CMC- Na (2) 硬板的铺制方法： 薄层板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂硅胶或氧化铝，200250目均匀地涂在长条形玻璃板上厚度0.150.5mm。枯燥后即可运用。4. 活化: 硅胶板先晾干，再在 10

5、5 110C 活化 0.51 小时。 冷却即可运用也可保管于枯燥器中备用。二点样二点样 1. 样品溶液的制备： 应尽量防止用水作溶剂， 普通用甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等挥发性有机溶剂溶解样品。 2. 点样：用微量注射器或玻璃毛细管汲取一定量试样点在原点上。试样点的直径普通应小于4mm。可并排点多个试样同时展开。 留意：留意： 点样线距底边点样线距底边1.5 2cm处。处。 斑点面积越小越好。斑点面积越小越好。三展开三展开上行法：用于硬板多次展开：用于硬板径向展开：纸色谱下行法：纸色谱展开剂：由一种或多种展开剂：由一种或多种溶剂按一定比例组成。溶剂按一定比例组成。留意：留意：点样线不能浸入展开剂中

6、；点样线不能浸入展开剂中；展开时要恒温、恒湿度；展开时要恒温、恒湿度；展开槽和薄板须用展开剂蒸气饱和后再展开。展开槽和薄板须用展开剂蒸气饱和后再展开。 目的：消除边缘效应目的：消除边缘效应 边缘效应：边缘效应： 同一物质在同一薄层板上出现中间部分的同一物质在同一薄层板上出现中间部分的Rf值比值比边缘的边缘的Rf值小。值小。 四定位方法四定位方法1. 显色法：喷洒显色剂进展显色反响使组分显色而定位。 通用型显色剂：碘 硫酸溶液 荧光黄公用显色剂： 茚三酮 氨基酸 酸碱指示剂 羧酸2. 荧光法： 吸附剂中混有荧光剂，展开后，在紫外灯下，色斑在荧光背景上呈现暗斑。一定性分析方法 定性分析的根据： 在

7、固定的色谱条件下， 一样物质的Rf值 一样。 四四. 定性与定量分析定性与定量分析知物对照法知物对照法: :样品与知物对照品在同一薄样品与知物对照品在同一薄层上展开，比较组分与对照品的层上展开，比较组分与对照品的RfRf值。值。二定量分析二定量分析1. 洗脱测定法：洗脱测定法： 斑点定位斑点定位斑点取下斑点取下洗脱洗脱适当方法适当方法测定。测定。2. 直接测定法：直接测定法：目视比较法目视比较法: 比较样品斑点与对照品斑点的比较样品斑点与对照品斑点的 颜色深度或面积大小颜色深度或面积大小薄层扫描法薄层扫描法: 丈量斑点的面积大小。丈量斑点的面积大小。六六. .薄层扫描法简介薄层扫描法简介 以一

8、定波长的光照射展开后的薄以一定波长的光照射展开后的薄层色谱板，侧定其对光的吸受或所发层色谱板，侧定其对光的吸受或所发出的荧光，进展定量分析的方法。出的荧光，进展定量分析的方法。双波长薄层扫描仪光路表示图 波长的选那么： 测定波长：斑点中化合物的 max 参比波长：斑点中化合物无吸收的波长 目的：消除背景吸收图19-2 薄层色谱扫描曲线 测光方式 a. 透射法： 只适用于透明薄板。 b. 反射法： 外标两点法： m样 = a + b A样 b = (m1 - m2) / (A1- A2) a = m1 - b A1七、薄层色谱法的运用七、薄层色谱法的运用 合成药物反响速度或反响完成程度的监控；合

9、成药物反响速度或反响完成程度的监控； 药物的杂质检查；药物的杂质检查； 天然药物有效成分的分别、鉴定、含量测定；天然药物有效成分的分别、鉴定、含量测定； 少量物质的制备、提纯等。少量物质的制备、提纯等。 判别合成反响进展的程度： 例：判别普鲁卡因合成反响的终点。 色谱条件： 固定相：硅胶-CMC 展开剂：环己烷-苯-二乙胺 ( 8:2:0.4 ) 显色剂：碘化铋钾 1 2 3 4 51：盐酸普鲁卡因2：肖基卡因3：复原 2 h 取样4：复原 3 h 取样5：复原 4 h 取样复原2h，原料点完全消逝，反响达终点。第三节第三节 纸色谱法纸色谱法一一. . 根本原理根本原理 以纸作为载体的色谱法，属于分配色谱。以纸作为载体的色谱法，属于分配色谱。 固定相：纸纤维上吸附的水分或其的它物质固定相：纸纤维上吸附的水分或其的它物质 流动相：有机溶剂流动相：有机溶剂 定性参数：Rf 值：同薄层色谱 影响Rf值的要素： 1. 组分的性质：组分的极性强，Rf值小。 2. 色谱条件 展开剂的极性 展开剂的蒸气 展开时的温度 CHO CHO CHO HC-OH OH-CH CH2 HO-CH OH-CH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH HC-OH CH2OH CH3 CH3 极性：最强 其次 最小Rf： 小 中