姜黄素与依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠模型干预的对比研究

1、姜黄素与依那普利对单侧输尿管梗阻大鼠模型干预的对比研究         11-05-15 09:35:00     编辑：studa20                 作者：赵爱青,张晓明,侯恒,李荣山,马存根【摘要】  目的 观察姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,并与依那普利进行比较

2、。方法 采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型,术后第4周处死各组大鼠,用HE、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度；用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子1(TGF-1)、结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)的表达部位及蛋白表达水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠肾间质纤维组织面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-1、CTGF和TIMP-1蛋白质表达均显著上调(P<0.01)。姜黄素或依那普利干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或P<0.01)。两种药物作用比较无显著差异(P>0.05)。结论 姜黄素或依那普利对

3、UUO大鼠的干预效果相似,此可能与下调肾组织内TGF-1和CTGF,进而部分抑制TIMP-1的表达有关。 【关键词】  姜黄素；依那普利；转化生长因子1；结缔组织生长因子；基质金属蛋白酶抑制剂-1；肾间质纤维化Abstract：Objective To investigate the effect of curcumin on renal interstitial fibrosis following unilateral ureteral obstruction (UUO), and compare the effects of Curcumin with that of Enal

4、april. Method UUO rat model was used. Male Wistar rats were randomly divided into four groups with 8 rats each：shame-operated group (0.9% saline solution), model group (dimethyl sulphoxide, DMSO), Curcumin treatment group curcumin 100 mg/(kg·d), and Enalapril treatment group enalapril 10 mg/(kg

5、·d). All rats were killed 4 w after surgery. The degree of tubulointerstitial fibrosis was scored by HE and Masson staining. The sites and levels of protein expression of TGF-1, CTGF and TIMP-1 were detected by immunohistochemistry staining. Result Compared with those of shame-operated group, t

6、he blood urea nitrogen level was significantly increased (P<0.01), and the relative area of interstitial fibrosis was also significantly enlarged, the expression of TGF-1, CTGF and TIMP-1 protein was significantly up-regulated in kidney tissue of model group (P<0.01). After intervention with C

7、urcumin or Enalapril, the upregulation of the above-mentioned parameters were all significantly inhibited (P<0.05 or P<0.01). There was no significant difference of intervention effects between Curcumin and Enalapril (P>0.05). Conclusion Pharmacological effects of Curcumin or Enalapril on u

8、nilateral ureteral obstruction rats are quite similar. These effects may result from the down-regulation of TGF-1, CTGF and TIMP-1 expression in kidney tissue.Key words：Curcumin；Enalapril；TGF-1；CTGF；TIMP-1；renal interstitial fibrosis姜黄素(Curcumin)是从姜科植物姜黄中提取的一种植物多酚,也是姜黄发挥药理作用最重要的活性成分。近年研究表明,姜黄素对多种原因所

9、致的肾损害、糖尿病大鼠肾脏都具有保护作用1。在大鼠动物模型中,可明显减轻肺纤维化、肝纤维化程度2。但姜黄素能否明显减轻单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾间质纤维化？目前国内外鲜见报道。为此,笔者通过一定剂量的姜黄素作用于UUO大鼠,观察其抗肾纤维化作用及对转化生长因子1(TGF-1)、结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达的影响,并与依那普利进行比较。1  实验材料1.1  动物    68周龄清洁级雄性Wistar大鼠32只,体重180200 g,山西医科大学动物实验中心提供。1.2  主要试剂兔

10、抗大鼠TGF-1多克隆抗体(150)、兔抗大鼠CTGF多克隆抗体(1100)、山羊抗大鼠TIMP-1多克隆抗体(1100)、生物素化山羊抗兔IgG,链酶亲和素-生物素-过氧化物酶复合物工作液,二甲基邻苯二胺(DAB)显色试剂均购自武汉博士德公司；多聚赖氨酸粘片剂购自北京中杉金桥生物技术有限公司；姜黄素购自美国Sigma公司。2  实验方法2.1  分组和造模动物随机分为4组：假手术组(A组,仅予生理盐水)、模型组(B组,仅予二甲基亚砜)、姜黄素组C组,100 mg/(kg·d)、依那普利组D组,10 mg/(kg·d),每组8只。各组大鼠于术后第2天开始

11、腹腔注射给药。UUO致肾小管间质纤维化模型参考文献3方法。2.2  血生化指标检测假手术组打开腹腔后分离左侧输尿管,并不结扎即关闭腹腔。术后第4周,右心耳心脏穿刺抽血约6 mL,用自动生化仪测定尿素氮(BUN)。之后处死各组大鼠,左侧肾脏行原位灌流去除血细胞后,部分肾组织用10%中性福尔马林液固定,其余肾组织放入液氮中保存备用。2.3  肾组织病理学检查    动物麻醉后取双侧肾脏观察其大体外观变化,取部分梗阻肾经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋,切4 m厚的切片,行HE染色及Masson染色,光学显微镜(×200)采集Masson染色图

12、像(每只大鼠随机采集15个视野),以多功能彩色病理图像分析系统(山西医科大学)进行自动测量分析,计算肾间质纤维组织相对面积(肾间质绿染区面积/视野总面积×100%)。2.4  免疫组化染色采用SABC法进行免疫组化检测。切片常规处理后,用微波处理10 min(TGF-1、CTGF),或用0.075%胰蛋白酶(TIMP-1) 37 消化20 min修复抗原。分别滴加相应第一抗体,4 冰箱孵育过夜。然后加入相应生物素化第二抗体,37,20 min,滴加链酶亲和素-生物素-过氧化物酶,37 ,20 min,最后加入DAB显色液,显微镜下控制显色。每次染色用PBS缓冲液代替一抗设立阴性对照。免疫组化半定量分析借助多媒体病理彩色分析系统完成。在200倍光镜下采集免疫组化图像,每张切片随机采集10个不重叠视野(避开肾小球及动脉血管),计算肾小管间质相对阳性面积(肾小管间质阳性面积/视野