切花菊‘白扇’开放式组培快繁体系的建立

1、切花菊白扇开放式组培快繁体系的建立白扇是从日本引进的优良切花白菊品种,花色洁白、花型端庄,广泛应用于祭祀和殡葬业,市场需求量大,出口韩国、日本、荷兰等国家,目前生产这种切花菊的繁殖以扦插为主,但扦插繁殖速度较慢,种苗花期参差不齐;常规组培虽然能生产开花期整齐一致的种苗,但需要较高的投资（超净工作台、高压灭菌锅等）、生产成本高,不利于规模化生产,为解决常规组培快繁存在的问题,本研究以切花菊白扇原种插穗的带腋芽茎段作为外植体,以次氯酸钠为消毒剂,在初代培养基、继代增殖培养基和瓶内生根培养基中添加不同种类和浓度的抑菌剂（代森锰锌、山梨酸钾和次氯酸钠）,建立白扇开放式组培快繁技术体系,找出外植体的最佳

2、表面消毒条件,筛选出初代培养基、继代增殖培养基和瓶内生根培养基中最适的抑菌剂配方、无根苗瓶外生根和瓶内生根苗移栽的最佳基质配比;以白扇母株为对照，采用ISSR分子标记技术，比较开放式继代增殖芽苗与母株的遗传差异,检测开放式增殖芽苗的遗传稳定性。本研究结果可以为切花菊白扇种苗产业化生产提供理论依据与技术支持,具有重要的理论意义和实践价值,本研究的主要结果如下:1.确定了外植体的最佳表面消毒条件:以切花菊白扇插穗带腋芽茎段为外植体,以不同浓度次氯酸钠进行处理,试验结果表明,外植体最佳的消毒条件为0.1%次氯酸钠消毒15min,污染率为53.3%,成活率为46.7%。2.确定了开放式培养基中琼脂的最

3、适添加量:在煮好的开放式培养基中添加不同浓度的琼脂粉，搅拌均匀，调好pH,直接分装到培养瓶中，冷却后观察凝固情况,试验结果表明:开放式培养基的琼脂最佳添加量为4.5g/L,比常规组培培养基的添加量（7.0g/L）低得多。3.筛选出开放式初代培养的最佳抑菌剂浓度配比组合：在常规组培的最适初代培养基MS+1.0mg/L6-BA+0.1mg/LNAA中,添加不同代培养的最佳抑菌剂组合为：50mg/L代森钮锌+0.010%(v/v)次氯酸钠+5mg/L山梨酸钾,污染率36.7%,成活率63.3%,诱导芽生长良好。4.筛选出开放式继代增殖培养的最佳抑菌剂组合:在常规组培继代增殖培养基MS+1.5mg/L

4、6-BA+0.1mg/LNA冲,添加不同种类和浓度的抑菌剂,以初代诱导的无菌苗带腋芽茎段为接种材料,比较污染率、增殖系数和芽苗质量,结果表明:开放式继代增殖培养的最佳抑菌剂浓度配比组合为:40mg/L代森锰锌+0.010%(v/v)次氯酸钠+5mg/L山梨酸钾,平均污染率为10%,平均增殖系数为5.93,芽苗底部叶片有部分枯黄,略差于常规组培。5.筛选出开放式生根培养的最佳抑菌剂组合：在常规组培生根培养基1/2MS+0.1mg/LNAA,添加不同种类和浓度的抑菌剂，以继代增殖的3cm左右无根苗为接种材料，诱导不定根，比较污染率、生根率和生根质量,结果表明:开放式生根培养的最佳抑菌剂浓度配比组合

5、为:40mg/L代森钮锌+0.010%(v/v)次氯酸钠+5mg/L山梨酸钾，平均生根率为80%,平均根长为2.93cm,平均根数8.68根,生根质量较好。6.筛选出开放式组培苗最佳生根移栽条件:将开放式生根苗炼苗不同时间后移栽到不同配比的移栽基质中,试验结果表明,最佳的炼苗时间为3d,最佳移栽基质为草炭土:蛭石:珍珠岩=2:1:1,成活率100%,植株长势旺盛。7.筛选出开放式培养最佳的瓶外生根条件：将开放式继代组培苗炼苗3d,在60mg/L的NAA容液中,浸泡不同时间,再移栽到不同的生根基质中,进行生根试验,试验结果表明:继代组培苗在60mg/L的NAA溶液中的最佳浸泡时间为10min,成活率为94%;最佳的生根基质为河沙,成活率为100%,生根时间为6d。8.用ISSR分子标记技术检测了开放式组培苗遗传稳定性：采用I