抗体及基因重排

1、整理课件1抗体及基因重排抗体及基因重排（Antibody,AbAntibody,Ab）遵义医学院遵义医学院 孙万邦孙万邦整理课件2整理课件3抗体（抗体（antibodyantibody，AbAb）是是B B淋巴细淋巴细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞接受抗原刺激后增殖分化为浆细胞，由浆细胞合成、分泌能与相应胞，由浆细胞合成、分泌能与相应抗原特异性结合的抗原特异性结合的免疫球蛋白免疫球蛋白（immunoglobulinimmunoglobulin，Ig Ig）。抗体主要存在于血清中，也存在于抗体主要存在于血清中，也存在于各种体液中。各种体液中。整理课件4整理课件511.1 Ab11.1 Ab（I

2、g Ig）的基本结构及多样性）的基本结构及多样性 Ig Ig分子的基本结分子的基本结构是由两条相同构是由两条相同的重链和两条相的重链和两条相同的轻链通过二同的轻链通过二硫键连接而成的硫键连接而成的四肽链结构四肽链结构, ,称称为为Ig Ig的单体。的单体。整理课件6 一、重链和轻链一、重链和轻链 1. 1.重链重链（heavy heavy chain chain ，H H链）链） Ig Ig的重链由的重链由450550450550个氨基酸残基组成，个氨基酸残基组成，分子量约为分子量约为5075kD5075kD。整理课件7重链重链 根据重链免疫原性的不同，可将重链分为根据重链免疫原性的不同，可将

3、重链分为、和和五类（五类（classclass），），与轻链结合为与轻链结合为IgMIgM、IgGIgG、IgAIgA、IgDIgD和和IgEIgE。某些又可亚类。某些又可亚类。分为四个亚类（分为四个亚类（1-41-4），分为分为2 2个亚类（个亚类（1-21-21-21-2）。）。整理课件82 2轻链轻链（light light chainchain，L L链）链） Ig Ig的轻链约含的轻链约含214214个氨基酸，个氨基酸，约为重链的约为重链的1/21/2，分子量约分子量约25kD25kD。整理课件9轻链轻链轻链免疫原性的不同，分为轻链免疫原性的不同，分为、两型。两型。同一个体内可存在分

4、别带有为同一个体内可存在分别带有为和和链链的的Ig Ig分子，同一天然分子，同一天然Ig Ig分子中不可能同时分子中不可能同时有有和和链，两条轻链的型别必然相同。链，两条轻链的型别必然相同。整理课件10二、可变区和恒定区二、可变区和恒定区 1. 1.可变区可变区 Ig Ig近氨近氨基端轻链的基端轻链的1/21/2和和重链的重链的1/41/4（、）或）或1/51/5（、）. .整理课件11 可变区可变区 氨基酸排列顺序氨基酸排列顺序在不同抗体分子在不同抗体分子间变化较大称为间变化较大称为可变区（可变区（variable regionvariable region，V V区）。区）。整理课件122

5、.2.恒定区恒定区 Ig Ig分子近分子近C C端，轻链端，轻链的的1/21/2和重链的和重链的3/43/4（或（或4/54/5）区域中氨）区域中氨基酸的数量、种类基酸的数量、种类、排列顺序及含糖、排列顺序及含糖量均较为恒定，称量均较为恒定，称为恒定区（为恒定区（constant regionconstant region，C C区）。区）。整理课件13重链和轻链的恒重链和轻链的恒定区分别称为定区分别称为CHCH和和CLCL。Ig Ig的的C C区与抗体区与抗体的生物学功能相的生物学功能相关。关。整理课件14二、铰链区二、铰链区 铰链区铰链区 在在CH1CH1和和CH2CH2之间之间，即重链的

6、链间二，即重链的链间二硫键连接处附近，硫键连接处附近，有一个可转动的铰有一个可转动的铰链区（链区（hinge regionhinge region）。）。整理课件15 含较多的脯氨酸残含较多的脯氨酸残基，富于柔性，可基，富于柔性，可赋予较大的自由活赋予较大的自由活动度。该区由于是动度。该区由于是一段较伸展的肽链一段较伸展的肽链，对蛋白酶敏感，对蛋白酶敏感，易被木瓜蛋白酶、易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶水解。胃蛋白酶水解。整理课件16三、水解片段三、水解片段 在一定条件下，可在一定条件下，可通过蛋白酶将通过蛋白酶将Ig Ig消化消化成不同的片段，从成不同的片段，从而研究而研究Ig Ig的结构和功的结构

7、和功能，最常用的蛋白能，最常用的蛋白酶是木瓜蛋白酶和酶是木瓜蛋白酶和胃蛋白酶。胃蛋白酶。整理课件17Figure 3-3整理课件18 木瓜蛋白酶（木瓜蛋白酶（papainpapain）的水解部位位于的水解部位位于Ig Ig铰铰链区重链间二硫键近链区重链间二硫键近NN端处，水解后可得到端处，水解后可得到2 2个相同的抗原结合片段（个相同的抗原结合片段（fragment of fragment of antigen bindingantigen binding，FabFab）和）和1 1个可结晶的片段个可结晶的片段（fragment crystallizablefragment crystalli

8、zable，FcFc）。）。 FabFab段具有抗体活性的部分，可单价与抗原段具有抗体活性的部分，可单价与抗原结合；结合； FcFc段不能与抗原结合，保留了段不能与抗原结合，保留了Ig Ig重链的免疫重链的免疫原性及其相应功能区的生物学活性。原性及其相应功能区的生物学活性。整理课件19Figure 3-3 part 1 of 2整理课件20胃蛋白酶胃蛋白酶水解片段水解片段 用胃蛋白酶（用胃蛋白酶（pepsinpepsin）可使）可使Ig Ig在重链间二硫在重链间二硫键近键近C C端处断开，获得端处断开，获得1 1个仍由二硫键连接个仍由二硫键连接的的F F（abab）2 2片段和若干小分子多肽碎

9、片片段和若干小分子多肽碎片pFcpFc。F F（abab）2 2是由两个是由两个FabFab及铰链区及铰链区组成，可同时结合两个抗原表位。组成，可同时结合两个抗原表位。pFcpFc无无生物活性。生物活性。 白喉或破伤风抗毒素经胃蛋白酶消化后精白喉或破伤风抗毒素经胃蛋白酶消化后精制的制剂，由于去除了重链的制的制剂，由于去除了重链的FcFc段可减少段可减少超敏反应的发生。超敏反应的发生。整理课件21Figure 3-3 part 2 of 2整理课件22四、 Ig Ig的其他结构的其他结构 1 1、J J链链 连接链（连接链（joining chainjoining chain，J J链）是由浆细

10、胞链）是由浆细胞合成的一条富含半胱氨酸的多肽链，可将合成的一条富含半胱氨酸的多肽链，可将单体单体Ig Ig连接为多聚体并使之稳定。如连接分连接为多聚体并使之稳定。如连接分泌型泌型IgAIgA（secretory IgAsecretory IgA，SIgASIgA）成双体，）成双体，连接连接IgMIgM成为五聚体。成为五聚体。整理课件23整理课件242.2.分泌片分泌片 分泌片（分泌片（secretory piecesecretory piece，SPSP）又称分泌成）又称分泌成分（分（secretory componnentsecretory componnent，SCSC），是由粘），是由粘

11、膜上皮细胞合成含糖的肽链，以非共价形膜上皮细胞合成含糖的肽链，以非共价形式与式与IgAIgA二聚体结合，使其成为分泌型二聚体结合，使其成为分泌型IgAIgA（SIgASIgA）。其功能是保护）。其功能是保护SIgASIgA免受外分泌液中免受外分泌液中蛋白水解酶的水解作用，并能介导蛋白水解酶的水解作用，并能介导SIgASIgA转运转运，是其分泌至粘膜表面，发挥粘膜免疫作，是其分泌至粘膜表面，发挥粘膜免疫作用。用。整理课件25五、高变区五、高变区（抗体分子立体结构）（抗体分子立体结构） 重链和轻链重链和轻链V V区（区（VHVH和和VLVL）中各有）中各有3 3个区域的氨基酸个区域的氨基酸组成和排

12、列顺序变组成和排列顺序变化最为明显，称为化最为明显，称为高变区或超变区（高变区或超变区（hypervariable hypervariable regionregion，HVRHVR）。）。整理课件26整理课件27六、功能区的功能六、功能区的功能 1.VH1.VH、VLVL：是：是Ig Ig分子特异性识别和结合抗分子特异性识别和结合抗原的部位。原的部位。 由于超变区的氨基酸组成和排列随所结合由于超变区的氨基酸组成和排列随所结合的抗原特异性不同而不同，故其氨基酸的的抗原特异性不同而不同，故其氨基酸的种类和排列顺序千变万化，可形成很多能种类和排列顺序千变万化，可形成很多能与不同特异性抗原表位结合的

13、抗体。与不同特异性抗原表位结合的抗体。整理课件28整理课件29 2.CL2.CL和和CH1CH1：某些同种异某些同种异型的遗传标型的遗传标记存在于该记存在于该区。区。整理课件30 3.IgG3.IgG的的CH2CH2和和IgMIgM的的CH3CH3：有补体有补体C1qC1q的结的结合位点合位点(CR1)(CR1)，与补体经典途与补体经典途径的激活有关径的激活有关。 IgGIgG的的CH2CH2可通可通过胎盘。过胎盘。整理课件314.CH34.CH3或或CH4CH4：可与多种细胞表面：可与多种细胞表面的相应的的相应的FcFc受体结合，产生不同的受体结合，产生不同的免疫效应免疫效应。 溶细胞、细菌

14、，调理作用，溶细胞、细菌，调理作用，ADCC作用，作用，中和毒素，致超敏反应中和毒素，致超敏反应整理课件32整理课件3311.2 11.2 五类五类IgIg的特性和功能的特性和功能一、一、IgG IgG 整理课件34 IgGIgG的功能和结构在五类的功能和结构在五类IgIg中研究得最为充中研究得最为充分。人类分。人类IgIg共有共有4 4个亚类，即个亚类，即IgGIgG1 1、IgGIgG2 2、IgGIgG3 3和和IgGIgG4 4。 IgGIgG主要由脾脏和淋巴结中浆细胞合成，是主要由脾脏和淋巴结中浆细胞合成，是血清中含量最多（约占血清血清中含量最多（约占血清IgIg总量的总量的75%7

15、5%）、半衰期最长（约、半衰期最长（约2323天）的天）的IgIg； 机体在出生后机体在出生后3 3个月就开始产生个月就开始产生IgGIgG，3 35 5岁达到成人水平。岁达到成人水平。整理课件35 IgGIgG抗病毒和细菌感染，中和毒素的重要抗抗病毒和细菌感染，中和毒素的重要抗体，多数抗菌、抗病毒和抗毒素的抗体均体，多数抗菌、抗病毒和抗毒素的抗体均为为IgGIgG类。类。 IgGIgG的的FcFc段可与多种细胞表面的段可与多种细胞表面的FcRFcR结合结合，发挥调理作用及，发挥调理作用及ADCCADCC效应。效应。IgGIgG的某些亚的某些亚类有亲细胞性，与类有亲细胞性，与I I型超敏反应发

16、生有关；型超敏反应发生有关；还可与葡萄球菌还可与葡萄球菌A A蛋白（蛋白（staphlococcus staphlococcus protein Aprotein A，SPASPA）结合。某些自身抗体，）结合。某些自身抗体，也多属也多属IgGIgG类。类。整理课件36整理课件37整理课件38IgGIgG是五类是五类IgIg中中唯一可主动穿唯一可主动穿过胎盘的过胎盘的IgIg，对防止新生儿对防止新生儿感染有重要作感染有重要作用。用。整理课件39二、二、IgM IgM 整理课件40 IgMIgM为五聚体，在五类为五聚体，在五类IgIg中分子量最大中分子量最大，又称为巨球蛋白，又称为巨球蛋白， 含量

17、约血清含量约血清IgIg总量的总量的10%10%。 胚胎晚期开始合成或是在抗原刺激诱胚胎晚期开始合成或是在抗原刺激诱导的体液免疫应答中最早产生的导的体液免疫应答中最早产生的IgIg。整理课件41 IgMIgM也是初次免疫应答中的主要也是初次免疫应答中的主要IgIg，由，由于其不能通过胎盘，因此脐血中于其不能通过胎盘，因此脐血中IgMIgM异异常增高提示胎儿有宫内感染；常增高提示胎儿有宫内感染；整理课件42 病人血清特异性病人血清特异性IgMIgM水平增高，表明有近期水平增高，表明有近期感染，因此检测该指标有助感染性疾病的感染，因此检测该指标有助感染性疾病的早期诊断。早期诊断。整理课件43 由于

18、由于IgMIgM具有较多的补体结合位点，因具有较多的补体结合位点，因此具有较此具有较IgGIgG更强大的激活补体经典途更强大的激活补体经典途径的能力，是抗感染、特别是抗早期径的能力，是抗感染、特别是抗早期感染的主要抗体，当人体缺乏感染的主要抗体，当人体缺乏IgMIgM可能可能发生致死性败血症。发生致死性败血症。 类风湿因子、冷凝集素、天然血型抗类风湿因子、冷凝集素、天然血型抗体均为体均为IgMIgM类。类。整理课件44三、三、IgA IgA 整理课件45 IgAIgA有血清型和分泌型两型。血清型有血清型和分泌型两型。血清型IgAIgA主主要为单体，有要为单体，有IgA1IgA1和和IgA2Ig

19、A2两个亚型，凝聚两个亚型，凝聚的的IgAIgA可通过旁路途径激活补体，有一定的可通过旁路途径激活补体，有一定的免疫作用。免疫作用。 分泌型分泌型IgAIgA（secretory IgAsecretory IgA，SIgASIgA）由）由J J链链连接的二聚体和分泌片组成。连接的二聚体和分泌片组成。IgAIgA在出生后在出生后4 46 6个月才开始产生，粘膜固有层的浆细个月才开始产生，粘膜固有层的浆细胞合成和分泌二聚体胞合成和分泌二聚体IgAIgA，在与粘膜上皮细，在与粘膜上皮细胞合成的分泌片结合后，穿过粘膜上皮细胞合成的分泌片结合后，穿过粘膜上皮细胞，转运至局部腔道。胞，转运至局部腔道。整理

20、课件46 SIgASIgA广泛存在于唾液、泪液和与外界相通广泛存在于唾液、泪液和与外界相通的呼吸道、消化道和泌尿生殖道的外分泌的呼吸道、消化道和泌尿生殖道的外分泌液中，以初乳中含量最高，新生儿可从初液中，以初乳中含量最高，新生儿可从初乳中获得乳中获得SIgASIgA。整理课件47 SIgASIgA具有局部抗感染作用，阻止病原体粘具有局部抗感染作用，阻止病原体粘附到细胞表面，或通过中和毒素的毒性作附到细胞表面，或通过中和毒素的毒性作用而在粘膜局部发挥重要的抗感染作用，用而在粘膜局部发挥重要的抗感染作用，是防御粘膜表面微生物入侵的第一道防线是防御粘膜表面微生物入侵的第一道防线。老年性支气管炎以及幼

21、儿易患呼吸道或。老年性支气管炎以及幼儿易患呼吸道或消化道感染，均可能与消化道感染，均可能与SIgASIgA合成降低有关合成降低有关。整理课件48四、四、IgE IgE 整理课件49 IgEIgE是血清中含量最少的是血清中含量最少的IgIg，仅，仅0.3g/ml0.3g/ml左右，主要由呼吸道和消化道粘膜固有层左右，主要由呼吸道和消化道粘膜固有层的浆细胞产生，分布于这些部位的粘膜组的浆细胞产生，分布于这些部位的粘膜组织、外分泌液中。与肥大细胞和嗜碱性粒织、外分泌液中。与肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的细胞表面的I I型型IgE FcIgE Fc受体（受体（FcRIFcRI）结合）结合，与，与I I型

22、超敏反应的发生有关。型超敏反应的发生有关。 IgEIgE在抗寄生虫感染免疫中有重要功能，在在抗寄生虫感染免疫中有重要功能，在单核巨噬细胞和嗜酸性粒细胞表面有单核巨噬细胞和嗜酸性粒细胞表面有IIII型型IgE FcIgE Fc受体（受体（FcRIIFcRII，CD23CD23），可介导依），可介导依赖于赖于IgEIgE的抗寄生虫细胞毒效应。的抗寄生虫细胞毒效应。整理课件50五、五、IgD IgD 整理课件51 IgDIgD在循环中的量很低（在成人血在循环中的量很低（在成人血清中为清中为0.3mg/ml0.3mg/ml）；）； 易被蛋白酶水解，在血清中半衰期易被蛋白酶水解，在血清中半衰期很短，约为

23、很短，约为3 3天。天。 目前对目前对IgDIgD的生物学功能尚不明确的生物学功能尚不明确，可能与超敏反应或自身免疫病有，可能与超敏反应或自身免疫病有关系。关系。 整理课件5211.3 11.3 抗体分子的抗体分子的 FcFc受体受体整理课件53整理课件54整理课件5511.4 11.4 Ig Ig分子超家族分子超家族 IgSFIgSF类似类似IgVIgV或或C C去折叠机构，去折叠机构，氨基酸与氨基酸与IgIg一定同源性的分子。一定同源性的分子。整理课件5611.5 Ig11.5 Ig基因及其重排基因及其重排 整理课件57一、基因结构一、基因结构IgIg基因群：基因群：V,D,J,CV,D,

24、J,CIGH: IGH: IGHV, IGHD, IGHJ, IGHCIGHV, IGHD, IGHJ, IGHCIGK/IGL:IGK/IGL:IGKV/IGLV,IGKJ/IGLJ,IGKC/IGLCIGKV/IGLV,IGKJ/IGLJ,IGKC/IGLC整理课件58人人IgIg基因片段基因片段基因基因 V V总总/ /功能功能 D D总总/ /功能功能 J J总总/ /功能功能 C C总总/ /功能功能 IGHIGH 95/5195/51 23/2323/23 9/69/6 11/911/9IGKIGK 90/5090/50 0 0 5/55/5 1/11/1IGLIGL 60/3160/31 0 0 4/44/4 7/77/7整理课件59二、基因重排二、基因重排VDJVDJ两端为重排信号序列（两端为重排信号序列（7 7核苷酸序列）核苷酸序列）12231223原则：带原则：带12-bp-RSS12-bp-RSS只与只与23bp-RSS23bp-RSS结合结合整理课件60基因片段两端基因片段两端RSSRSS互相靠拢，互相靠拢，它们间它们间DNADNA环被剪除，环被剪除，D D，J J连接连接整理课件61三、多样性产生机制三、多样性产生机制 表11-4