主要荧光素一览表

1、(1)荧光素类Fluorescein标准荧光素(Reference standard )之一，在其基础上进行结构改造，可产生一系列荧光素衍生物。Fluorescein 适用于Argon-ion Laser的488nm光谱线，有相对高的荧光吸收，较好的荧光产率以及良好的水溶性。标记蛋白时通常不会产生蛋白沉淀。与其他荧光素类衍生物一样，Fluorescein 具有光淬灭率高，pH敏感性强与发射波谱宽的缺点。主要应用于聚焦激光扫描微阵列( Confocal laser scanning microscopy )和流式细胞计应用(Flow cytometry )。FITC异硫氧酸荧光素，Fluores

2、cein isothiocyanate ,是荧光素衍生物的一种，5-FITC较6-FITC更经常使用。FITC的异硫氧酸基能与氨基反应，可用于标记氨基修饰DNA 一旦形成，产物极为稳定。适用于Argon-ion Laser 的 488nm光谱线，Abs/Em=492/519nm (pH=9.0)。与蛋白的结合力也强。FITC具有荧光素衍生物的普遍特性。在水中易变坏，不能长久保存。FITC-Oligo 广泛用于杂交探针；FITC-多肽用于Edman降解蛋白测序；FITC也经常被用于蛋白电泳检 测(即使是毛细管电泳)和荧光能量激发转移测试。FAM竣基荧光素，Carboxyfluorescein ,

3、是荧光素衍生物的一种，5-FAM较6-FAM更经常使用。Carboxyfluorescein-5-succimidyl ester ,即 5-FAM (NH9 广泛存在于荧光标记试剂盒。与FITC相比，FAM与氨基反应更快，产物也更稳定，但FITC结合蛋白的量更大且进程更易于控制。FAM也适用于 Argon-ion Laser的488nm光谱线，Abs/Em=492/518nm (pH=9.0),具有荧光素衍生物的普遍特性，在水中稳定。5-FAM主要应用于DNA自动测序中，标记其中的d/ddCTP (PE公司)，也经常用于 PCFT物定量，核酸探针等。TET四氯荧光素，Tetrachloro

4、fluorescein ,是荧光素衍生物的一种。TET以及HEX均是在FAM基础上加以改进的，氯原子使FAM的Abs与Em值都产生一定的红移，并在一定程度上减弱了 pH敏感性。TET也适用于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=521/536nm。TET, HEX FAMffi TAMRAT配合用于 DNA自动测序中，其中TET用于标记d/ddATP,HEX用于标记d/ddGTP 或 d/ddATP (PE公司)HEX,是荧光素衍生物的一种六氯荧光素，Hexachloro fluorescein适用于 Argon-ion Laser 激发光源，Abs/Em=535/556n

5、m。(请参见 TET介绍)JOE竣基-4',5'- 二氯-2',7'- 二甲氧基荧光素，Carboxy-4',5'-dichloro-2' , 7'-dimethoxyfluorescein , 是荧光素衍生物的一种，6-JOE更被广泛使用。JOE荧光产量高，pH敏感性弱，适合于标记蛋白。6-JOE也适合于Argon-ion Laser激发光源，Abs/Em=520/548 (pH=9.0)常用于DNA自动测序，标记d/ddATP,也经常被用于进行电泳检测与PC*物定量。(2)罗丹明类(Rhodamine dye)R 110标准荧

6、光素(Reference standard )之一，在其基础上进行结构改造，即可产生一系列罗丹明类衍生物。与Fluorescein 类衍生物相比，罗丹明类荧光素具有更强的光稳定性，更高的荧光产量以及更低的pH敏感性罗丹明类荧光素极为适合于标记寡核甘酸，但蛋白会引起大多数罗丹明类荧光素的荧光淬灭，故大多 数不适宜用于标记蛋白。R110被用于DNA自动测序。TAMRA全称竣基四甲基罗丹明，即Carboxytetramethylrhodamine ,是罗丹明类荧光素衍生物，6- TAMRA被广泛使用。TAMRA1少数几个能用于标记蛋白的，6- TAMRA!用于Argon-ion Laser激发光源，

7、Abs/Em=547/573nm(Ph=8.0) , 6-TAMRA(NHS常用于荧光标记试剂盒中。6- TAMRA主要用于DNA自动测序中。Texas RedTexas Red是一个长波长荧光素，与Fluorescein 几乎没有波谱重叠，只适合于Ar-Kr Laser的568nm 光谱线或 He-Ne Laser 的 594 光谱线，比 Tetramethylrhodamine 和 LissamineTM Rhodamine B 波长更长， 荧光量更高。Texas Red在荧光微阵列和流式细胞计中更被经常作为第三波长标记(Third labels) 。(3) BODIP偿BODIP偿荧光素

8、是由分子探针公司开发，以用来替代那些有部分缺陷的传统荧光素，普遍具有荧光产量高，pH敏感性低(无离子变化)，光稳定性强以及发射波谱窄的优点，故BODIP淮荧光素已被广泛用于核酸，脂肪酸，磷脂以及各种受体。同时，由于在电泳过程中对序列片段影响小，故已被逐渐用于DNA自动测序。但相对而言，BODIPY类荧光素并不特别适合标记蛋白.BODIPY FL可代替 FluoresceinBODIPY R6(M代替 Rhodamine 6GBODIPY TMFR?H弋替 TetramethylrhodamineBODIPY TR可代替 Texas Red这些BODIPY类荧光素具有与被替代物几乎类似的光谱特征

9、，能共用同样的光过滤器与激发光源，但更具优点。(4)其他荧光素Cascade blueCascade blue是在在(pyrene)结构基础上改造得来的，即sulfonated pyrene,它是一种短波长紫外激 发荧光素，与另一种常用的紫外荧光素 Aminocoumarin相比,Cascade blue 的Em与Fluorescein 有更小的 光谱重叠，有更高的荧光吸收和更大的荧光产量 .Cascade blue在376nm处存在第二个吸收峰，水中不稳定。Cascade blue主要用于标记蛋白，作为极性示踪子(polar tracer)可进行膜蛋白定位等.但也能用于标 记核酸和葡聚糖。A

10、minocoumarin一种短波长紫外激发荧光素，通常使用的是7-amino-4-methylcoumarin,红移现象明显，比Cascadeblue有更长的发射波长，肉眼观察明显，更适用于confocal。表1:主要荧光激发光源Excitation sourcePrincipal spectrum lines(nn)Mercury-arc Lamp366,405,436,546,578Xenon-arc Lamp250-1000(continous)Tungsten-halogen Lamp350-1000(continous)Cr:LiSAF Laser430Helium-cadmium

11、Laser325,442Argon-ion Laser488,514Nd:YAG Laser532Helium-neon Laser543,594,633Krypton-ion Laser568,647表2:主要荧光素一览表DyeAbs/Em Max(nm)NotesAcridine orange500/526green fluorescence bound to DNA, and red shift to 650 upon association with RNA, useful for flow cytometry.FAM492/518Most widely used green fluo

12、rescein, absorption overlaps the 488 nm spectral line of the argon-ion laser, prone to photobleaching, pH sensitive betweenpH 5-8,is widely used for automated DNA sequencingFITC494/519Subject to argon-ion laser, widespread use for hybridization, immunoreagent, protein sequencing and FRETHEX535/556pH

13、 insensitive, used for automated DNA sequencingJOE520/548Intermediate-wavelength spectra, important dye for automated DNA sequencing.Lissaminerhodamine B570/590Optimal for 568 nm excitation photostable,used in confocal laser scanning microscope.easier to label protein than TMR.Pyrene340/378Excimer:4

14、70Long excited-state lifetime, spectral shifts due to excimer emission,used in protein comformation and oxygen sensors.ROX570/590spectra between Lissamine rhodamine B and Texas Red, used in automated DNA sequencing.TET521/536pH insensitive, used for automated DNA sequencingTetramethylrhodamine555/58

15、0pHinsensitive , photostable,Widely used for automatedDNA sequencingTexas Red595/615Suited for the Ar-Kr 568nm and He-Ne 594nm spectra, brighter and lower background than other red dyes as third label, used in confocal laser scanning microscopesDansyl Chloride372/NDEnvironmentally sensitive, large s

16、tokes shift for protei sequencingDabcyl453/noneBroad absorption, no fluorescence, as a quenching group useful for fluorescence resonance energy transfer (FRET)CR-6G525/555Spectral between fluorescein andtetramethylrhodamine, good photostable, preferred nucleotide off proteinCascade Blue400/420Resistant to quenching upon protein conjugation, Water soluble.BODIPY R6G528/547Substitute for rhodamine 6