乳腺癌层粘连蛋白受体表达与微血管密度和转移及复发的关系

1、    乳腺癌层粘连蛋白受体表达与微血管密度和转移及复发的关系         摘要目的：探讨乳腺癌层粘连蛋白受体(LN-R)与间质微血管密度和肿瘤转移、复发的关系及意义。方法：应用免疫组化LSAB法检测73例乳腺癌LN-R、FAg的表达,并对28例病人进行随访分析。结果：LN-R 的表达程度与乳腺癌淋巴结转移存在正相关(P<0.0001)，与病理分级无关(P>0.05)，与乳腺癌间质微血管密度（MVD）存在正相关(P<0.0001)。淋巴结转移阳性组其MV

2、D值明显高于阴性组(P<0.001)。随访28例病人中，复发组的LN-R表达增强比率及MVD值明显高于未复发组(P<0.05)。结论：LN-R的表达程度及MVD值均可作为判断乳腺癌病人转移及复发的独立指标。关键词受体，层粘连蛋白；微血管密度；乳腺肿瘤；预后中分类号R737.9文献标识码A文章编号1001-7399(2000)04-0294-04The relationship between laminin-receptor expression, interstitial angiogenesis and tumor metastatic, relapse ability in

3、breast carcinomas and their meaningKou Baijun, Li Yulin, Zhu Guibin, Wu Shan, Zhang Lihong(Dept of Pathol, Norman Bethune University of Medical Sciences, Changchun130021)ABSTRACTPurposeTo study the relationship between laminin-receptor expression , interstitial angiogenesis and tumor metastatic, rel

4、apse ability in breast carcinomas and their meaning. MethodsThe expression of LN-R, FAg were detected in 73 cases of breast carcinoma with immunohistochemical technique, and 28 cases patients were followed up for three years. ResultsThe expression of LN-R showed positive relation with lymph node met

5、astasis, but it was not related with pathological grade. The positive relationship had been shown between the expression degree of LN-R and MVD. There was a significant difference of MVD between positive and negative groups of lymph node metastasis. The ratio of LN-R expression enhancment and MVD in

6、 the relapse group was significantly higher than that in the non-relapse group within the 28 cases following-up patients. ConclusionBoth LN-R expression degree and MVD were regarded as independent factors in estimating metastasis and relapse in breast carcinoma patients.KEY WORDSreceptors,laminin; m

7、icrovascular density; breast neoplasms; prognosis获得克隆性增生的肿瘤细胞，其生长、侵袭及转移能力的异同受各种因素的影响。研究表明，当实体瘤直径大于12 mm后，就不仅仅依靠其细胞膜与周围组织之间的渗透作用获得营养；其生长和转移有赖于血管生成。新生血管解决了肿瘤组织的物质交换问题，从而促进其生长和转移。细胞外粘附分子尤其是层粘连蛋白在促进肿瘤血管生成及转移过程中作用机制错综复杂。LN可促进血管内皮细胞的形成，同时成熟的血管内皮亦分泌LN构成基底膜成分。而LN促进肿瘤转移是由于与肿瘤细胞表面的特异性受体LN-R结合力的显著提高从而促进其侵袭和转移。

8、本研究拟通过检测乳腺癌层粘连蛋白受体的表达特点以探讨其在乳腺癌间质血管生成中的作用以及与淋巴结转移及预后的相互关系，以期为临床乳腺癌病人提供治疗和判断预后的参考指标。1材料与方法收集1995年1月1998年8月白求恩医科大学各临床学院及吉林省肿瘤医院手术切除乳腺癌标本73例。患者术前均未经任何抗癌治疗。依据1957年和1981年WHO乳腺癌的分级、分类标准确诊为乳腺癌并进行病理分型。所取材经Carnoy's液固定，梯度脱水、透明、包埋后做4 m连续切片。备HE及免疫组织化学染色。FAg（Dako，MAb) 1400，LN-R（北京医科大学提供，MAb) 1100，LSAB试剂盒购于Da

9、ko公司。免疫组织化学采用LSAB法。结果以在肿瘤细胞胞浆、胞膜、血管内皮细胞出现棕黄色颗粒，其着色强度高于背景非特异性染色者判定为阳性。免疫组织化学染色过程中，以PBS代替一抗作阴性对照。微血管包括毛细血管和小静脉。其计数是在200×视野下在F:Ag染色的切片上进行，单个内皮细胞着色亦作为一个计数单位；每例选择4个不重复视野计数，然后计算每例乳腺癌的单位视野（200×视野）平均血管数，即间质微血管密度（microvascular density，MVD)，单位为：个200×，结果用均数±标准差（<"0 (881 bytes)"

10、 src="/med/cano/201003/20100319163655969" 12 14>±s）表示。将LN-R的免疫组织化学染色切片分为3组：即切片中完全无表达或癌细胞阳性表达率小于10者为（）；阳性物质表达率大于10但仅表达在癌细胞的近基底膜面为（）；阳性物质表达几乎占整个细胞膜面或在大部分胞浆中有表达为（+）。根据数据类型分别采用t检验，方差分析或2检验。所有数据均应用spass 7.5软件包处理。2结果2.1LN-R 的表达特点和临床指标间的关系73例乳腺癌中，有21例可见LN-R表达于癌细胞的近基底膜面，呈黄褐色颗粒感，胞浆及胞核不着色（1）

11、。另有34例乳腺癌，可见LN-R表达广泛，几乎占整个细胞膜甚至累及胞浆（2）。LN-R的表达程度与临床指标间的关系见表1。由表1可知，LN-R的表达程度与病理分级无关，与淋巴结转移情况有显著相关（P0.0001）。2.2乳腺癌间质微血管密度与临床指标间的关系73例乳腺癌的平均微血管密度为47.82个200×，乳腺癌间质微血管密度和临床指标间的关系见3、4。从可见，淋巴结转移阳性的乳腺癌其微血管密度明显高于淋巴结转移阴性者（P0.001），级和级乳腺癌之间MVD无显著性差异，而级、级和级之间MVD的差异有显著性（P0.05）。表1LN-R在乳腺癌中的表达与临床指标之间的关系项别nLN-

12、R2P值()()(?)病理分级24151095.9930.19963211615172510淋巴结转移（）28332218.711<0.001（）45151812     1LN-R在乳腺癌中表达于癌细胞的基底膜面，呈黄褐色，胞浆及胞核不着色。LSAB×400    2LN-R在乳腺癌中表达广泛，几乎分布于整个细胞膜，有的累及胞浆。LSAB×400    3乳腺癌间质微血管密度与淋巴结转移之间的关系     4

13、乳腺癌间质微血管密度与病理分级之间的关系     2.3LN-R在乳腺癌中的表达程度与肿瘤微血管密度之间的关系73例乳腺癌中，LN-R的表达程度与MVD有显著的相关性（P0.0001），即在LN-R表达程度较强的病例中其MVD明显增高，详见表2。表2LN-R在乳腺癌中的表达程度与肿瘤间质微血管密度(MVD)之间的关系组别nMVDLN-R(-)1834.47±4.65(+)2144.58±6.78(?)3456.89±8.45     F=59.87P<0.0001 2.4LN-R

14、在乳腺癌中的表达程度及间质微血管密度与淋巴结转移及预后的关系(表3，4)以MVD的平均值47.82和LN-R表达的程度为界将73例乳腺癌病例分为4组。由表3可知，在LN-R表达增强和MVD增高组中其淋巴结转移例数明显高于LN-R表达减弱和MVD减少组(P<0.0001)。由表4可知，随访的28例病人中，有11例在3年之内复发，其中有9例LN-R表达增强（?）；而在17例未复发组中只有6例LN-R表达增强。复发组LN-R表达增强的比率明显高于未复发组(P<0.05)。同时两组比较，其MVD值亦有显著差异性，即复发组MVD值明显高于未复发组(P<0.05)。表3乳腺癌LN-R表达

15、及MVD值与肿瘤淋巴结转移的关系组别ABCDnLN-R（?）LN-R(?)LN-R(-+)LN-R(-+)MVD47.82MVD<47.82MVD47.82MVD<47.82淋巴结转移(+)2718324(-)46113626     A组与D组比较，2=15.28 P<0.0001，其余组间比较差异均无显著性 表4乳腺癌LN-R表达及MVD值与肿瘤3年复发的关系组别nLN-R（+）MVD复发组11957.52±9.066未复发组17646.35±8.671     2=4.0

16、92,P=0.0431；t=3.271,P=0.003 3讨论基底膜的主要成分LN在促进肿瘤转移的过程中与肿瘤细胞表面受体的作用密不可分。瘤细胞表面LN-R的多少直接影响LN促进肿瘤转移能力的发挥。实验表明1，人浸润性乳腺癌细胞质膜特异性结合LN的能力较正常或良性乳腺病变高50倍，而且其肿瘤细胞表面较低度恶性者有更多未结合的LN-R，这为恶性肿瘤粘着于基膜创造了条件。血管形成是肿瘤的生长、侵袭、转移过程的必要条件，在这一过程中，肿瘤与宿主血管的相互作用关系尤其是肿瘤细胞表面的具有高亲和力的层粘连蛋白受体与其配体基底膜上的层粘连蛋白及血管内皮细胞之间的关系尤为密切。层粘连蛋白在肿瘤的血管生成早期

17、起着关键性的作用，这与其形态学结构关系密切。作为一个成熟的血管，内皮细胞与基底膜上的层粘连蛋白连接紧密2,3。动物实验表明，移植瘤2天后可见基底膜层粘连蛋白和型胶原呈强阳性染色，同时内皮细胞和周细胞增殖以及内皮细胞从原发灶迁移4。一些体外实验认为，层粘连蛋白A链上的SIKVAV肽段与内皮细胞的关系密切。Grant等5建立了体内模型系统，并认为层粘连蛋白上的SIKVAV肽段是具有新的血管生成活性的，并能促进肿瘤的血管化和肿瘤生长。本组实验发现，LN-R的表达程度与肿瘤的血管密度之间存在明显的正相关性，与淋巴结转移亦存在明显相关性。依据这一实验结果，我们认为在大多数非原位癌中，LN-R主要与血管周

18、围的基底膜上的LN特异性的结合而发挥其促进血管内皮细胞生长的作用。乳腺癌中LNA链上的SIKVAV肽段通过连接LN三条多肽链上的二硫键与其特异性受体结合，发挥其促进肿瘤新生血管形成和肿瘤转移的作用。而肿瘤的新生血管的形成又进一步促进了肿瘤的转移。本组实验结果还显示淋巴结转移组和非淋巴结转移组比较，其MVD值有显著的差异性。 Stitt等6通过鼠的动物模型观察LN及LN-R与内皮细胞的关系发现在实验开始后的第17天血管开始新生，持续至21天后新生血管停止发育；而LN-R在实验后的第12天开始出现至17天以后开始减少至21天完全消失。这一实验结果表明，在早期阶段LN及LN-R对血管形成至关重要，而

19、对于成熟的血管则作用甚微。从而不难看出，在恶性度较高的乳腺癌中LN-R对于肿瘤的血管形成以及促进肿瘤的转移意义重大。而乳腺癌间质微血管的形成又为其淋巴结转移提供了直接的通道。Angelo等7报道了在97例皮肤恶性黑色素瘤中微血管数和LN-R的表达情况，得出黑色素瘤的侵袭和转移与血管数量的增加和LN-R的表达有关。Giampietro等8报道了179例无淋巴结转移的乳腺癌病人的预后与微血管数及LN-R之间的关系，指出微血管数和LN-R的表达程度均可作为判断乳腺癌病人预后的独立指标。本组73例乳腺癌标本相关指标的研究进一步支持了上述观点。基金项目：国家自然科学基金资助项目（No 39870314）

20、作者简介：寇伯君，33岁，女，硕士，讲师。研究方向：肿瘤间质病理寇伯君（白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室，长春130021）李玉林（白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室，长春130021）朱桂彬（白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室，长春130021）吴珊（白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室，长春130021）张丽红（白求恩医科大学基础医学院病理解剖教研室，长春130021）参考文献1，Liotta LA, Alan R. The role of extracellular matrix. Development, 1984；90:3573712，Kibbey MC, Yamam

21、ura K, Jun SH et al. Enhancement of tumor growth by basement membrane: modulation of growth and angiogenesis by laminin-derived synthetic peptides. Cancer Treat Res, 1994;71:2672753，Bonfil RD, Vinyals A, Bustuoabad OD et al. Stimulation of angiogenesis as an explanation of Matrigel-enhanced tumorigenicity. Int J Cancer, 1994;58(2):2332394，Paku S, Paweletz N. First steps of tumor-related angiogenesis. Lab Invest, 1991;65(3):3343465，Grant D