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文档简介

1、 处理、恢复培养 、固定及保存 将过滤后的各采样点水样盛入500ml烧瓶中并编号。烧 杯上蒙以带孔的塑料薄膜或盖上带孔的薄塑料板，每个处 理组和对照组各插入15个花枝，对照组用自来水，在人工 光照下连续处理6h。每种水中至少应设两个平行处理组， 对于非水溶性物质，可先用二甲基亚砜溶解，经自来水稀 释后在进行处理，同时要做二甲基亚砜的对照试验。处理 到指定时间，将水样倒掉，换上自来水，在人工光照下做 连续24-30h的恢复培养，除掉叶子和花梗，把花序放入新 配制的卡诺氏液中固定24h，再将花序移入70%酒精中， 即可制片观察。也可将固定后的花序置于3-5oC长期保存， 但每月需更换70%酒精一次

2、 压片及微核观察 一个花序愈是上部的花蕾年龄越老。选择一个适龄的 花蕾（一般在中下部），用解剖刀把花蕾从中间劈成两部 分，用解剖针或尖镊子打开花蕾，剥出花药，滴一滴醋酸 洋红，并稍加压挤，置100倍显微镜下观察，若绝大部分 是早期四倍体，则充分捣碎花药，让更多四倍体释放出 来，并加一滴醋酸洋红（经显微镜观察染色颜色过深可滴 加1-2滴45%的冰醋酸），弃去载玻片上无关杂质，小心 盖上盖玻片，置酒精灯火上来回3-4次微热（不要让染液 煮沸冒泡），然后趁热把玻片放在几层吸水纸下，用大拇 指压挤盖玻片，取出后置250倍显微镜下观察计数,随机统 计四分体和微核数，每个处理组和对照组至少观察五张叶 子，

3、统计1500个四分体。 制片关键及微核统计标准 严格选择早期四分体时期的花蕾压片是实验成功的关键。 早期四分体直径为18-22 m，外面具有一层包膜，细胞核 大而明显，一个花序只采用一个含早期四分体的适龄花蕾 供制片用即可。一个四分体的微核数从零到几个不等，微 核直径为0.5-3 m，呈圆形或椭圆形，分布在主核周围， 着色与主核一致。以下情况的微核不应统计（1）四分体以 外的微核;(2由于分裂期延缓所造成的特别大的四分体中 的微核；（3）已死亡的四分体中的微核；（4）雄蕊毛、 花药壁以及花丝细胞中的微核 结果评价 1 微核率=微核总数/四分体总数 2 对照组和处理组微核率标准差的计算 3 由于对照组有本底微核，利用“平均值 差的标准误差公式，可以判断处理组和 对照组间微核率差异的显著程度P285公式 4 当平均值差等于或大于Sd表示

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