抗体芯片在风湿免疫研究中的应用

1、RayBiotech抗体芯片在风湿免疫研究中的应用系统性红斑狼疮尿液标志物筛查杂志名称: Molecular & Cellular Proteomics 分子与细胞蛋白质组学(IF7.254)文献题目：Urinary Angiostatin - A Novel Putative Marker of Renal Pathology Chronicity in Lupus Nephritis作者：Tianfu Wu, Yong Du, Jie Han, Sandeep Singh, Chun Xie, Yuyuan Guo,Xin J. Zhou, Chul Ahn, Ramesh Sax

2、ena, and Chandra Mohan.本实验所用产品：RayBiotech人AAH-CYT-G4000抗体芯片 （274个生长、趋化、血管、炎症等细胞因子抗体芯片）实验样品：尿液研究背景: 寻找系统性红斑狼疮（SLE）生物标志物非常的迫切，因为SLE具有较高的肾功能衰竭发病率。用RayBiotech抗体芯片筛选狼疮性肾炎患者尿液中的细胞因子表达差异，发现SLE病人血管抑素表达水平明显升高。血管抑素是纤溶酶原活性片段，对血管生成和炎症有调节作用。后续ELISA验证和ROC分析证明血管抑素可以有效区分活动期和稳定期SLE。免疫组化结果表明血管抑素在患者肾小管上皮细胞上表达。进一步研究证明尿

3、血管抑素水平与肾脏病理慢性指数密切相关，与活性指数无关。研究思路 1 实验方法1.1 芯片样品准备 l 尿液收集；l 样品分组：SLE病人组（5例），正常对照组（3例）；1.2 RayBiotech细胞因子抗体芯片检测尿液样品中274个细胞因子的表达及其差异；1.3 ELISA验证血清和尿液样品中血管抑制素的表达；1.4 免疫组化验证肾组织血管抑制素的表达；1.5 WB探讨尿液血管抑制素的表达分子机制；2 结果2.1 RayBiotech芯片筛查SLE病人与正常对照尿液蛋白表达变化采用Ray Biotech AAH-CYT-G4000细胞因子抗体芯片筛查SLE病人（n=5）与正常对照（n=3）

4、尿液蛋白表达变化差异，筛选到Angiostatin在SLE病人尿液中显著上调(P=0.0011), 荧光信号均值Fold change大于100倍。后续实验根据芯片的筛选结果将重点研究Angiostatin。2.2 ELISA大样品验证血管抑制素作为潜在的SLE生物标志物收集SLE 病人 (n=100), CKD（慢性肾脏病）疾病对照组(n =24), 正常对照组 (n= 21) 的尿液样品和血清样品检测Angiostatin的差异，结果显示SLE病人组尿液Angiostatin表达极显著高于正常对照组(p<0.0001)，且显著高于CKD组（p<0.05）; ROC分析结果显示A

5、ngiostatin 能很好的分辨正常和SLE、活动期SLE和稳定期SLE; 而分辨CKD与SLE的效果一般。而血清样品Angiostatin在几组中的差异不显著。2.3 Angiostatin表达与疾病不同分期的相关性分析2.4 免疫组化检测肾组织Angiostatin表达 尿液Angiostatin的表达在不同分期的SLE都有显著差异，而血清与尿液中的Angiostatin表达没有相关性, 免疫组化结果显示SLE IV期病人肾组织Angiostatin高表达, 我们推测尿液中的Angiostatin高表达并非来源于血清，而有可能是来源于肾，尤其是肾小管细胞。2.5 WB初步探讨尿液血管抑制

6、素的表达分子机制 3 结论 尿血管抑素是一种新的无创性系统性红斑狼疮肾脏疾病标志物，具有潜在的应用价值。RayBiotech抗体芯片在该研究中起到非常重要的指引作用。本文使用RayBiotech AAH-CYT-G4000 细胞因子抗体芯片0-4.html4-1BB(TNFRSF9/CD137)ACE-2Adiponectin(ACRP30)Activin AAdipsin(Complement Factor D)AgRPALCAM(CD166)Alpha-fetoproteinAmphiregulinAngiogeninAngiopoietin-1Angiopoietin-2ANGPTL4A

7、xlCD80(B7-1)Beta-2 MicroglobulinBCAMBCMA(TNFRSF17)BDNFbeta IG-H3bFGFBLC(CXCL13)BMP-4BMP-5BMP-6BMP-7beta-NGFBetacellulin(BTC)CA125CA15-3CA19-9CA9Cardiotrophin-1(CT-1)Cathepsin SHCC-1(CCL14)6Ckine(CCL21)CCL28(MEC)CD14CD23CD30(TNFRSF8)CD40(TNFRSF5)CD40 Ligand(TNFSF5)CEACEACAM-1CK beta 8-1(CCL23)CNTFCri

8、pto-1CRP(C-Reactive Protein)CTACK(CCL27)CXCL16DANDecorinDKK-1Dkk-3Dkk-4CD26(DPPIV)DR6(TNFRSF21)DtkE-CadherinEDA-A2EGFEGFREG-VEGF(PK1)ENA-78(CXCL5)Endoglin(CD105)Eotaxin-1(CCL11)Eotaxin-2(MPIF-2/CCL24)Eotaxin-3(CCL26)TROP1(EpCAM)ErbB2ErbB3Erythropoietin RE-SelectinFas(TNFRSF6/Apo-1)Fas Ligand(TNFSF6)

9、Fc gamma RIIB/C(CD32B/C)FerritinFGF-4FGF-6FGF-7(KGF)FGF-9Flt-3 LigandFLRGFollistatinFractalkine(CX3CL1)FSHFurinGalectin-7GCP-2(CXCL6)GCSFGDF-15GDNFGITR(TNFRSF18)GITR Ligand(TNFSF18)GM-CSFGRO alpha/beta/gammaGRO alpha(CXCL1)Growth HormoneHB-EGFHCC-4(CCL16)hCG intactHGFHVEM(TNFRSF14)I-309(TCA-3/CCL1)I

10、CAM-1(CD54)ICAM-2(CD102)ICAM-3(CD50)IFN-gammaIGFBP-1IGFBP-2IGFBP-3IGFBP-4IGFBP-6IGF-1IGF-1 RIGF-2IL-1 R2IL-1 R4(ST2)IL-1 R1IL-10IL-10 R alphaIL-10 R betaIL-11IL-12 p40IL-12 p70IL-13IL-13 R alpha 2IL-13 R1IL-15IL-16IL-17AIL-17BIL-17CIL-17FIL-17 RAIL-18 BP alphaIL-18 R beta(AcPL)IL-1 alpha(IL-1 F1)IL-

11、1 beta(IL-1 F2)IL-1 ra(IL-1 F3)IL-2IL-2 R beta(CD122)IL-2 R gamma(Common gamma Chain)IL-2 R alphaIL-21 RIL-22IL-28A(IFN-lambda 2)IL-29(IFN-lambda 1)IL-3IL-31IL-4IL-5IL-5 R alphaIL-6IL-6 RIL-7IL-8(CXCL8)IL-9InsulinIP-10(CXCL10)I-TAC(CXCL11)LAP/TGF beta 1LeptinLeptin RLIFLight(TNFSF14)LIMPIIL-Selectin

12、(CD62L)Luteinizing hormoneLymphotactin(XCL1)LYVE-1MarapsinMCP-1(CCL2)MCP-2(CCL8)MCP-3(MARC/CCL7)MCP-4(CCL13)M-CSFM-CSF RMDC(CCL22)MICAMICBMIFMIG(CXCL9)MIP-1 alpha(CCL3)MIP-1 beta(CCL4)MIP-1 delta(CCL15)MIP-3 alpha(CCL20)MIP-3 beta(CCL19)MMP-1MMP-10MMP-13MMP-2MMP-3MMP-7MMP-8MMP-9MPIF-1(CCL23)MSP alph

13、a/betaNAP-2(PPBP/CXCL7)NCAM-1(CD56)NGFR(TNFRSF16)Nidogen-1NrCAMNRG1-beta 1(HRG1-beta 1)NT-3NT-4Oncostatin MOsteopontin(SPP1)Osteoprotegerin(TNFRSF11B)PAI-1PARC(CCL18)PDGF-AAPDGF R alphaPDGF R betaPDGF-ABPDGF-BBPECAM-1(CD31)PLGFPlatelet factor 4(CXCL4)ProcalcitoninProlactinPSA-freePSA-totalRAGERANK(T

14、NFRSF11A)RANTES(CCL5)ResistinS100 BSAA(Serum Amyloid A)SCFSCF R(CD117/c-kit)SDF-1 alpha(CXCL12 alpha)SDF-1 beta(CXCL12 beta)gp130Sonic Hedgehog N-Terminal(Shh-N)Siglec-5(CD170)Siglec-9TNF RII(TNFRSF1B)TNF RI(TNFRSF1A)TACETARC(CCL17)TECK(CCL25)TGF beta 2TGF alphaTGF beta 3TGF beta 1Thrombopoietin(TPO)ThyroglobulinTie-1Ti