显微镜油镜的使用及细菌的简单染色法1ppt课件

1、实验二 显微镜油镜的运用及 细菌的简单染色法 一、实验目的：一、实验目的：1.学习并掌握普通光学显微镜油镜的运用技术；2.学习微生物制片、染色的根本技术，掌握细菌的 简单染色法及无菌操作技术； 3.察看细菌的根本形状。 二、实验原理：二、实验原理：1、染色原理：用于生物染色的染料主要有碱性染料、染色原理：用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性酸性 染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和荷，能和 带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生当它生 长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，长

2、于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通所以通 常采用碱性染料如美蓝、结晶紫、碱性复红或常采用碱性染料如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿孔雀绿 等使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与等使其着色。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷带正电荷 的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培育基的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培育基pH下下降时，细降时，细 菌所带正电荷添加，因此易被伊红、酸性复红或菌所带正电荷添加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等刚果红等 酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染复合染 料，如伊红美蓝、伊红天青等。料，如伊红美蓝、伊红天

3、青等。简单染色法简单染色法:是只用一种染料使细菌着色以是只用一种染料使细菌着色以 显示其形状的染色法，简单染显示其形状的染色法，简单染 色不能区分细菌细胞的构造。色不能区分细菌细胞的构造。2、显微镜油镜任务原理：、显微镜油镜任务原理： 利用油镜不但能添加照明度，更主要是能添加数值口 径，由于显微镜的放大效能是由其数值口径决议的。所 谓数值口径，即光线投射到物镜上的最大角度称为镜 口角的一半正弦，乘上玻片与物镜间介质的折射率所 得的乘积，可用以下公式表示： NA=nsin NA:数值孔径 n:介质折射率 ：镜口角的半数 显微镜的分辨率是指显微镜可以区分显微镜的分辨率是指显微镜可以区分两点之间最小

4、间隔的才干。它与接物镜的两点之间最小间隔的才干。它与接物镜的数值口径成正比，与光波长度成反比，因数值口径成正比，与光波长度成反比，因此接物镜的数值口径愈大，光波波长愈短，此接物镜的数值口径愈大，光波波长愈短，那么显微镜的分辨力愈大，被检物体的细那么显微镜的分辨力愈大，被检物体的细微构造也愈能明显地域别出来。微构造也愈能明显地域别出来。 能区分两点之间最小间隔能区分两点之间最小间隔= 1/2= 1/2光波长光波长度度数值口径数值口径 = 1/2= 1/2NA NA 三三 、实验器材、实验器材1、活资料：、活资料： 培育培育18-24h的金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌(S.aureus) 和枯草芽

5、孢杆菌和枯草芽孢杆菌B.subtilis。2、染色液和试剂：、染色液和试剂： 复红、美兰、二甲苯、香柏油。复红、美兰、二甲苯、香柏油。3、器材：、器材： 载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。四、实验步骤：四、实验步骤：1、涂片： 取干净载玻片一块，在载玻片的左、右各加一滴蒸馏水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂芽孢杆菌，做成薄的涂面，留意取菌不要太多。 整个过程中要留意无菌操作。示范无菌操作技术 2、枯燥：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文 火烘干。 3、固定：手执玻片一端，让菌膜朝上， 经过火焰 2-3次固定以不烫手为宜。4、染

6、色：将固定过的涂片加复红或美兰染色、染色：将固定过的涂片加复红或美兰染色1-2min。5、水洗：用水洗去涂片上的染色液。、水洗：用水洗去涂片上的染色液。6、枯燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。、枯燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。7、镜检：先低倍察看，再高倍察看，并找出适当的视野、镜检：先低倍察看，再高倍察看，并找出适当的视野 后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将 油镜头浸入油滴中仔细调焦察看细菌的形状。油镜头浸入油滴中仔细调焦察看细菌的形状。8、绘图：、绘图：9、实验终了后的处置：、实验终了后的处置：将浸过油的镜头按下述

7、方法擦拭干净：将浸过油的镜头按下述方法擦拭干净： a.先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。先用擦镜纸将油镜头上的油擦去。 b.用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头擦23次。次。 c.再用干净的擦镜纸将镜头擦再用干净的擦镜纸将镜头擦23次。留意擦镜头时向一个次。留意擦镜头时向一个 方向擦拭。方向擦拭。看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，再用洗衣粉清洗。看后的染色玻片用废纸将香柏油擦干净，再用洗衣粉清洗。五、结果与思索题五、结果与思索题1、油镜与普通物镜在运用方法上有何不同？应 留意些什么？ 2、按比例绘出他所察看到的细菌的形状，并显 示两菌的陈列方式。六、本卷须知六、本卷须知1、油浸

8、物镜的任务间隔指物镜前透镜的外表到被检物体、油浸物镜的任务间隔指物镜前透镜的外表到被检物体 之间的间隔很短，普通在之间的间隔很短，普通在0.2mm以内，再加上普通以内，再加上普通 光学显微镜的油浸物镜没有光学显微镜的油浸物镜没有“弹簧安装，因此运用油浸弹簧安装，因此运用油浸物物 镜时要特别细心，防止由于镜时要特别细心，防止由于“调焦不慎而压碎标本片并调焦不慎而压碎标本片并使使 物镜受损。物镜受损。2、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上、染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后，应吸去玻片上 的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。的残水，以免染色液被稀释而影响染色效果。实验报告的撰写要求实验报告的撰写要求 实验报告必需以实事求是、严肃仔细的科学态度，按照指实验报告必需以实事求是、严肃仔细的科学态度，按照指导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、表达准确、数导书的要求按时完成。实验报告应该简明扼要、表达准确、数据完好、绘图明晰且写实，应有讨论、有分析，结论明确。一据完好、绘图明晰且写实，应有讨论、有分析，结论明确。一般应包括以下一些内容：般应包括以下一些内容： 1 实验工程称号；实验工程称号； 2 实验目的；实验目的； 3 实验原理；实验原理；4. 实验资料；实验资料； 5 实验步骤；实验步