实验七脂肪酸的β-氧化

1、脂肪酸的脂肪酸的氧化氧化一、目的一、目的了解脂肪酸的了解脂肪酸的氧化作用。氧化作用。二、原理二、原理 在肝脏中，脂肪酸经在肝脏中，脂肪酸经氧化作用生成乙酰辅酶氧化作用生成乙酰辅酶A 。2分子分子乙酰辅酶乙酰辅酶A可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成也可还原生成羟丁酸。乙酰乙酸、羟丁酸。乙酰乙酸、羟丁酸和丙酮总称羟丁酸和丙酮总称为酮体。为酮体。 氧氧化化的的生生化化历历程程 乙酰乙酰CoACoAFAD FADH2 NAD +NADHRCH2CH2CO-SCoA脂酰脂酰CoACoA 脱氢脱氢酶酶脂酰脂酰CoACoA -烯脂酰烯脂酰Co

2、ACoA 水化酶水化酶 -羟脂酰羟脂酰CoACoA 脱氢酶脱氢酶 -酮酯酰酮酯酰CoACoA 硫解酶硫解酶RCHOHCH2COScoARCOCH2CO-SCoA RCH=CH-CO-SCoA +CH3COSCoAR-COScoAH H2 2O O CoASHTCATCA 乙酰CoA 乙酰CoACoA 乙酰乙酰CoACoAATPATPH H2 20 0呼吸链H H2 20 0呼吸链 乙酰CoACoA 乙酰CoA 乙酰CoA 乙酰CoA酮体的生成酮体的生成肝脏肝脏羟甲基戊二酸单酰羟甲基戊二酸单酰CoA（HMGCoA）脂肪酸脂肪酸硫解酶硫解酶2CH3COSCoACH3COCH2COSCoA乙酰乙酰乙

3、酰乙酰CoAHOOCCH2-C-CH2COSCoA |CH3OH |HMG-CoA裂解酶裂解酶HMG-CoA合成酶合成酶CH3COSCoACoASH -氧化氧化CH3COCH2COOHCH3CHOHCH2COOH乙酰乙酸乙酰乙酸丙酮丙酮 -羟丁羟丁酸酸脱氢酶脱氢酶CO2NADH+H+NAD+CH3COCH3脱羧酶脱羧酶CoASH本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮在碱性条件下，与碘生成碘仿。剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠溶液滴定。碘仿。剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠溶液滴定。 在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下： 2NaOH+

4、I2NaIO+NaI+H2O CH3COCH3+3NaOICHI3+CH3COONa+2NaOH 碘仿 剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。 NaOI+NaI+2HClI2+2NaCI+H2O I2+2Na2S2O3Na2S4O6+2NaI 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量三、三、器材器材 酸式滴定管酸式滴定管 水浴锅水浴锅 移液管移液管 剪刀及镊子剪刀及镊子 漏斗等漏斗等四、试剂与材料四、试剂与材料鲜猪肝鲜猪肝 淀粉淀粉 氯化钠氯化钠 丁酸丁酸 三氯乙酸三氯乙酸 氢氧化钠氢氧化钠 盐酸盐酸 碘等碘等1.肝糜制备肝糜制备 取新鲜肝脏，用取新鲜肝脏，用0

5、.9% 氯化钠溶液洗去污血。用滤纸吸去氯化钠溶液洗去污血。用滤纸吸去表面的水分。称取肝组织表面的水分。称取肝组织5 g置研钵中。加少量置研钵中。加少量0.9% 氯化钠氯化钠溶液溶液,研磨成细浆。再加研磨成细浆。再加0.9% 氯化钠溶液至总体积为氯化钠溶液至总体积为10 mL 。2.取取2个个50 mL锥形瓶，各加入锥形瓶，各加入3 mL 1/15 mol/L pH 7.6的磷酸盐的磷酸盐缓冲液。向一个锥形瓶中加入缓冲液。向一个锥形瓶中加入2 mL正丁酸，另一个锥形瓶正丁酸，另一个锥形瓶作为对照，不加正丁酸。然后各加入作为对照，不加正丁酸。然后各加入 2 mL肝组织糜。混匀，肝组织糜。混匀，置于

6、置于43恒温水浴中保温。恒温水浴中保温。3.沉淀蛋白质沉淀蛋白质 保温保温1.5小时后，取出锥形瓶，各加入小时后，取出锥形瓶，各加入3 mL 15%三氯乙酸溶液，在对三氯乙酸溶液，在对照瓶内追加照瓶内追加2 mL正丁酸，混匀，静置正丁酸，混匀，静置15分钟后过滤。将滤液分别收集在分钟后过滤。将滤液分别收集在2支试管中。支试管中。4.酮体的测定酮体的测定 吸取吸取2种滤液各种滤液各2 mL分别放在另分别放在另2个锥形瓶中，再各加个锥形瓶中，再各加 3 mL 0.1 mol/L碘溶液和碘溶液和3 mL 10%氢氧化钠溶液。摇匀后，静置氢氧化钠溶液。摇匀后，静置10分钟。加入分钟。加入3 mL 10%盐酸溶液中和。然后用盐酸溶液中和。然后用0.01 mol/L标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘标准硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘。滴至黄色时，加入。滴至黄色时，加入56滴淀粉溶液作指示剂。摇匀，并继续滴到蓝色滴淀粉溶液作指示剂。摇匀，并继续滴到蓝色褪去。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的褪去。记录滴定样品与对照所用的硫代硫酸钠溶液的mL数，并按下式计数，并按下式计算样品中丙酮含量。算样品中丙酮含量。5.计算计算肝脏的丙酮含量（肝脏的丙酮含量（mmol/g）=（A-B）cNa2S2O3/6式中：式中： A为滴定对照所消耗的为滴定对照所消耗的0.05 mol/L硫代硫酸钠溶液的硫代