实验二葡萄籽中多酚类物质的提取及含量测定

1、实验二实验二葡萄籽中多酚类物质提取及含葡萄籽中多酚类物质提取及含量测定量测定 一一 实验目的实验目的1 学习并掌握植物组织破碎的方法学习并掌握植物组织破碎的方法-研磨法研磨法2 学习葡萄籽中多酚类物质的提取方法学习葡萄籽中多酚类物质的提取方法掌握标准溶液和标准曲线的制备掌握标准溶液和标准曲线的制备二二 实验原理实验原理1 葡萄籽主要含有多酚类物质葡萄籽主要含有多酚类物质 (GPS),包括儿茶素包括儿茶素 类和类和原花青素类。其中儿茶素类包括儿茶素原花青素类。其中儿茶素类包括儿茶素 、表儿茶、表儿茶 素及其素及其没食子酸酯没食子酸酯 ，是葡萄籽中主要的单聚体，是葡萄籽中主要的单聚体 ，也是原，也

2、是原 花青花青素寡聚体和多聚体的构成单位素寡聚体和多聚体的构成单位 。2 在植物体内经生物化学反应而形成复杂的聚合物在植物体内经生物化学反应而形成复杂的聚合物 ，是，是一种强抗氧化一种强抗氧化 剂，其抗氧化功效是维生素剂，其抗氧化功效是维生素C的的20倍、维倍、维生素生素E的的50 倍倍 ；具；具 有有 抗抗 氧氧 化化 及及 清清 除除 自自 由由 基基 、抗、抗 辐辐 射射 、抗、抗 肿肿 瘤瘤 、抗、抗 衰衰 老、治疗心血管疾病、提高免老、治疗心血管疾病、提高免疫功能疫功能 、预防神经退行性、预防神经退行性 改变等作用。改变等作用。 二二 实验原理实验原理3 常用的植物多酚总量的测定方法

3、中较为普遍使用的方常用的植物多酚总量的测定方法中较为普遍使用的方法有法有: 酒石酸亚铁比色法、香草醛酒石酸亚铁比色法、香草醛-浓盐酸法、浓盐酸法、FD 法、法、FC 法、普鲁士蓝法等。法、普鲁士蓝法等。4 根据反应机理，香草醛为显色剂，与儿茶素在酸性条根据反应机理，香草醛为显色剂，与儿茶素在酸性条件下发生羟醛缩合反应，反应产物为红色的半缩醛和缩件下发生羟醛缩合反应，反应产物为红色的半缩醛和缩醛化合物。醛化合物。5 本实验中采用过量的显色剂和略低于室温（本实验中采用过量的显色剂和略低于室温（25）条）条件下进行反应，有利提高测定结果的准确性。件下进行反应，有利提高测定结果的准确性。三 实验材料、

4、仪器、试剂 葡萄籽 研钵，玻璃棒，烧杯，量筒，水浴锅，电热套，冷凝回流装置，离心机，可见分光光度计等。 蒸馏水，60乙醇，香草醛，儿茶素，甲醇等 四 实验步骤：1、材料的预处理与研磨取新鲜葡萄，去皮和果肉后取出葡萄籽作为实验材料。取新鲜葡萄，去皮和果肉后取出葡萄籽作为实验材料。 首先对实验材料进行清洗，用滤纸吸干多余的水分之后，称首先对实验材料进行清洗，用滤纸吸干多余的水分之后，称取取1g进行研磨粉碎。进行研磨粉碎。把材料放进研钵内，捣碎研磨，要求研磨的粉末足够细。把材料放进研钵内，捣碎研磨，要求研磨的粉末足够细。2 2、供试品溶液制备、供试品溶液制备 称取葡萄籽粗粉称取葡萄籽粗粉 1.00g

5、，置，置 100mL圆底圆底烧瓶中，加烧瓶中，加60%乙醇溶液乙醇溶液 50mL，水浴回流，水浴回流提取提取2 次，每次次，每次30min，滤过，合并滤液，滤过，合并滤液，水相转移至水相转移至100mL 量瓶中，蒸量瓶中，蒸 馏水稀释至刻馏水稀释至刻度，定容。取上述溶液度，定容。取上述溶液 4mL,离心离心 30min(12000rpm)，取上清液，备用，取上清液，备用 。 3、对照品储备液的制备对照品储备液的制备 取干燥的儿茶素对照品，精确称取取干燥的儿茶素对照品，精确称取10.09mg，置于置于25ml量筒中，加蒸馏水溶解量筒中，加蒸馏水溶解并定容至刻度。并定容至刻度。既得储备液。既得储备

6、液。4、儿茶素标准曲线的制作 分别精密移取对照分别精密移取对照品储备液品储备液 0.5mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.5mL、4.0 mL ，置置5 mL量瓶中量瓶中，加蒸馏水定容至刻度。加蒸馏水定容至刻度。 分别移取分别移取上述上述不同浓度对照品溶不同浓度对照品溶液各液各 0.5mL，置置10mL玻璃试玻璃试管中管中(避光避光)，加入加入 3.0mL4%香草醛香草醛-甲醇溶液和甲醇溶液和1.5mL浓盐酸浓盐酸，混匀混匀，室室温放置显色温放置显色15min。以纯水为空白，。以纯水为空白，利用利用722型型可见分可见分光光度光光度计计 ，在在 500nm 下测定吸光度下测定吸光度(

7、A)。以儿茶素浓。以儿茶素浓度度 (x)为横坐标为横坐标 ，吸光度吸光度 (Y) 为纵坐标为纵坐标 ，绘制标准曲绘制标准曲线线 ，并求，并求得得回归方程。回归方程。5 5、待测样品中活性物质含量测定、待测样品中活性物质含量测定 取取0.5mL上清液，上清液，置置 10mL玻璃试玻璃试管中管中(避光避光)，加入加入 3.0mL 4%香草醛香草醛-甲醇溶液和甲醇溶液和1.5mL浓盐酸浓盐酸，混匀混匀，室温放置显色室温放置显色15min。以以0.5mL上清液稀释上清液稀释10倍倍为对照，为对照，利用利用722型型可见分光光度可见分光光度计，计，在在 500nm 下测定吸光度下测定吸光度(A)。上清液中生成的有色物质的上清液中生成的有色物质的OD值值=A待测待测-