支撑材料生物工程专业学生实验报告电子版

1、7.4 对学生学习效果的分析机制、方式和近四年分析情况 的支撑材料3生物工程专业学生实验报告电子版（以生化分离工程实验为例）生化分离实验报告实验题目: 辣椒红色素的提取与分离实验人员：组长：楚文颖组员：韦加艳闫孟骁 玄芳玲指导教师：李春斌 实验完成日期：2012 年 10 月 17 日组长：楚文颖 组员：韦加艳闫孟骁 玄芳玲实验地点：生命科学学院 208 生化分离工程实验室实验人： 楚文颖 玄芳玲 闫孟骁 韦加艳实验申请实验项目：辣椒红色素的提取与分离 实验原料：干辣椒实验仪器：水浴锅，中药粉碎机，索式提取器，旋转蒸发仪，层析柱。 试剂：丙酮，石油醚，95%乙醇，环己烷，硅胶等。耗材及辅助器材

2、：滤纸，脱脂棉，试管若干，圆底烧瓶一个，玻璃棒 一支，薄层层析板、温度计等。参考文献：张玲，吴凤娜，辣椒的营养保健功能及功能成分研究进展，山东食品发酵，2011（4）：39-42.卢建国，干红辣椒中红色素的提取，天然产物研究与开发，2011（23）：155-156. 张岩，赵丽丽，仝其根，辣椒红色素的提取与分离，北京工商大学学报，2011（11）：45-49.实验操作1.称取红辣椒干粉 5.0g2.将辣椒放在滤纸杯中放入索氏提取器萃取管中3.将 300ml 丙酮注入 500ml 的圆底烧瓶中，连接好索氏提取器（注：在冷顶 管最上方加少许棉花，防止丙酮过度挥发,也可用环己烷、95%乙醇提出作对

3、照试验）4、检查水浴锅水位，将水浴锅温度设定为 80 摄氏度进行索式提取，待提取 液颜色基本透明，停止索氏提取。5.将浸提液进行旋转蒸发，减压蒸馏到容器内壁附着有深橘红色色素且烧瓶 下部仅有少许粘稠状浓缩液体，停止旋转蒸发。6.取硅胶 10ml 和适量石油醚:丙酮混合液（10:1）混匀到硅胶内没有气泡，湿 柱法装层析柱：层析柱一定要垂直，并且在层析柱底部加少许棉花，不要有 气泡（一次性装完）7.先将石油醚丙酮混合液装入层析柱的 1/3,将浓缩液上样少许（均匀齐），再 将石油醚丙酮混合液加入到层析柱中进行硅胶柱层析，将不同的色素带分装 到不同的小试管中并标号。8.将提取原液与柱层析过程中不同试管

4、收集的层析液在一个薄层层析板上进 行薄层层析，展开剂为石油醚:丙酮混合液（10:1）。9.依据薄层层析板展开效果分析硅胶柱层析对辣椒红色素的分离效果。实验流程和现象：1.称取辣椒粉 放入滤纸包中2.把装有辣椒粉 的滤纸包放入3.组装索氏提取器 并接通冷凝水4.索氏提取开始（用棉花给装置保温）索氏提取器中5.提取的速度很6.橘红色，将要7.即将开始第 1 次虹吸8.第一次虹吸快虹吸9.第二次索氏提10.橘黄色11.开始第二次虹吸12. 第二次虹吸取开始颜色变浅13.第三次循环，14.颜色趋于透明15.最后一次循环16.得到的辣椒红色素颜色更浅初提物17.准备旋转蒸发18. 开始旋转蒸发19.瓶中

5、液体越来20.辣椒红色素越少挂于内壁21.硅胶柱内上样22.样品硅胶柱层析开始23.色素开始分离24. 色素分装到小试25.取色素 TLC 点样26.TLC 展开27. TLC 结果依据参考文献初步判断：薄板从上至下的色素依次为：玉米黄质、辣椒红素、 辣椒玉红素、胡萝卜素。实验总结实验结果分析：本次试验主要进行了辣椒红色素的提取过程，在实验过程中掌握了索氏提取 器和旋转蒸发仪两种生化分离技术中常用仪器的使用方法和注意事项，并进一步 学会了硅胶柱层析技术和薄层层析技术，对于生物产品的提取和分离过程有了更 加直观的了解。由于操作过程中的个别细节处理不够得当，难免影响实验的精确程度，我组 将在今后的

6、实验中更加注意细节，以保证实验的精确程度。实验原理： 1、索氏提取原理：在实验室多采用索氏提取器来提取，索氏提取器就是利用溶剂回流及虹吸原 理，使固体物质连续不断的被纯溶剂萃取，既节约溶剂，萃取效率又高。萃取先 将固体物质研碎,以增加固液的接触面积。然后将固体物质放在滤纸套 1 内，置 于提取器中，提取器的下端盛与有溶剂的圆底烧瓶相连，上面接回流冷凝管。加 热圆底烧瓶，使溶剂沸腾，蒸汽通过提取剂的支管上升，被冷凝后滴入提取器中， 溶剂和固体接触进行萃取，当溶剂面超过虹吸管的最高处时，含有萃取物的溶剂 虹吸回烧瓶，因而萃取出一部分物质，如此重复，使固体物质不断为纯的溶剂所 萃取，将萃取出的物质富

7、集在烧瓶中。2、减压浓缩原理： 旋转蒸发仪的工作原理：通过电子控制。使烧瓶在最适合速度下，恒速旋转以扩大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。旋转蒸发与普通蒸馏最大的不同就是通过旋转，增大溶剂的蒸发面积，使蒸发更加顺畅。现在的旋转蒸 发仪也可以进行减压蒸馏，通过减压还可以补充蒸发的液体而不需要停止整流操 作。3、硅胶柱层析原理： 柱层析用硅胶分子中具有硅氧烷的铰链结构，同时主颗粒表面又有很多硅醇基，对不同物质吸附能力不同，实验所用流动相对不同物质的溶解能力不同，因此不同物质在硅胶柱层析过程中要经历吸附、解吸；再吸附再解吸的过程，不同 物质的保留时间不同，从而达到分离提纯的目的。一般情况下

8、极性较大的物质容 易被硅胶吸附。4、实验操作讨论：1）本次试验操作过程比较复杂，操作时间较长，操作应该耐心细致。2）本次实验的操作过程主要是索氏提取、减压浓缩与硅胶柱层析分离、TLC 检 测四大部分。3）在索氏提取中，要注意玻璃仪器的连接，轻拿轻放，用滤纸柱装辣椒粉时， 注意防止其渗漏。4）在减压浓缩操作过程中，应注意调节温度，并使其恒定，还应该调节烧瓶高 度使烧瓶与加热水浴有合适接触面积。5）硅胶柱层析操作过程中，应注意装柱操作一次性完成，千万不能进气泡，并 选择好流动相和层析速度。5、 注意事项：1） 水浴温度应该保持在 80左右。2） 进行索氏提取前，应将提取物用纸包好不能够有散漏。3） 丙酮用完后必须立刻密闭防止丙酮挥发。4） 旋转蒸发仪使用时应提前打开抽气泵。5） 浓缩液收集瓶必须保证干净。6）在减压浓缩过程中需要适当调整转速和压力，以防止浓缩液在烧瓶中过 分分散不易取出。7） 旋转蒸发仪使用结束后先通大气，最后关闭循环水式真空泵。8） 在抽提过程中要注意观察抽提次数准确操作。9） 随时观察抽提过程中液体颜色的变化，并做好记录。1