外排泵抑制剂对铜绿假单胞菌耐药性的影响--田菁菁

1、外排泵抑制剂对铜绿假单胞菌耐药性的影响外排泵抑制剂对铜绿假单胞菌耐药性的影响专业：基础兽医学专业：基础兽医学学号：学号：20112637姓名：田菁菁姓名：田菁菁 前 言 铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa(Pseudomonas aeruginosa，Pa)Pa)为临床上最常见的引起严重医院感染的条件致为临床上最常见的引起严重医院感染的条件致病菌，主要感染医院内免疫力低下患者，其高度病菌，主要感染医院内免疫力低下患者，其高度耐药和多重耐药性使得治疗成为一大难题。随着耐药和多重耐药性使得治疗成为一大难题。随着碳青霉烯类、氟喹诺酮类抗菌药物临床应用的日碳青霉烯类

2、、氟喹诺酮类抗菌药物临床应用的日益广泛，铜绿假单胞菌对这两类抗菌药物的耐药益广泛，铜绿假单胞菌对这两类抗菌药物的耐药率也逐渐上升，目前国内外大量研究发现，其耐率也逐渐上升，目前国内外大量研究发现，其耐药与主动外排泵的过度表达有关。药与主动外排泵的过度表达有关。细菌的耐药机制细菌的耐药机制1 1、产生灭活酶、产生灭活酶, ,使抗菌药物失活或结构改变。使抗菌药物失活或结构改变。2 2、改变细菌细胞壁的通透性、改变细菌细胞壁的通透性, ,使抗菌药物不能进使抗菌药物不能进入菌体内。入菌体内。3 3、细菌体内抗菌药物作用的靶位结构改变、细菌体内抗菌药物作用的靶位结构改变, ,使之使之不能与抗菌药物合。不

3、能与抗菌药物合。4 4、形成代谢拮抗剂与药物争夺靶酶。、形成代谢拮抗剂与药物争夺靶酶。5 5、通过、通过主动外排主动外排作用作用, ,将药物排出菌体外。将药物排出菌体外。6 6、细菌分泌细胞外多糖蛋白复合物将自身包绕、细菌分泌细胞外多糖蛋白复合物将自身包绕形成细菌生物被膜。形成细菌生物被膜。 外排泵抑制剂（外排泵抑制剂（EPIs) 外排泵抑制剂外排泵抑制剂(EPIs)(EPIs)不仅可以抑制耐药细菌对不仅可以抑制耐药细菌对药物的外排药物的外排, ,恢复其对药物的敏感性恢复其对药物的敏感性, ,提高耐药细提高耐药细菌的临床治疗效果菌的临床治疗效果, ,而且在改善某些药物的药动学而且在改善某些药物

4、的药动学特性特性( (如提高口服药物的吸收如提高口服药物的吸收, ,降低肝、肾清除率降低肝、肾清除率) )方面也有广泛的用途。方面也有广泛的用途。 外排泵抑制剂（外排泵抑制剂（EPIs)EPIs)的作用机制分为的作用机制分为: : (1) (1)干扰外排泵组装干扰外排泵组装; ; (2) (2)阻断外排泵能量来源阻断外排泵能量来源; ; (3) (3)阻碍底物通过外排通道阻碍底物通过外排通道; ; (4) (4)机制未知。机制未知。材料和方法材料和方法菌菌 株株 30 30株铜绿假单胞菌来源于株铜绿假单胞菌来源于某医院临床标本，剔除重复菌某医院临床标本，剔除重复菌株。经梅里埃株。经梅里埃Vit

5、ek-32Vitek-32型细菌型细菌鉴定系统鉴定。质控菌株为铜鉴定系统鉴定。质控菌株为铜绿假单胞菌绿假单胞菌ATCC27853ATCC27853。药品和试剂药品和试剂 亚胺培南亚胺培南(IMP)(IMP)、美罗培南、美罗培南(MEP)(MEP)，购于沈阳制药有限公司；购于沈阳制药有限公司； 环丙沙星环丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)，购于深圳生物制品检定所；，购于深圳生物制品检定所； PANPAN、奥美拉唑、奥美拉唑、MHMH琼脂培养基，琼脂培养基，购于美国购于美国SigmaSigma公司。公司。琼脂对倍稀释法琼脂对倍稀释法 培养基制备使用培养基

6、制备使用MHMH琼脂，按商品说明书进行配制，琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2-7.4pH7.2-7.4。 含药琼脂平板制备：根据实验设计，将已倍比稀释的含药琼脂平板制备：根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45-45-5050水浴中平衡的水浴中平衡的MHMH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度琼脂厚度3-4mm3-4mm。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置料袋中，置2-82-8冰箱可贮存冰箱可贮存5 5天。天。 接种物制备与接种制备浓度相当

7、于接种物制备与接种制备浓度相当于0.50.5麦氏标准比浊管麦氏标准比浊管的菌悬液，再的菌悬液，再110110稀释，以多点接种器吸取制备好菌稀释，以多点接种器吸取制备好菌液（约液（约1-2l1-2l）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为）接种于琼脂平板表面，每点菌数约为104CFU104CFU，形成直径为，形成直径为5-8mm5-8mm的菌斑。接种好后置的菌斑。接种好后置3535孵孵育育16-20h16-20h，观察结果。，观察结果。试验分组试验分组生长对照组：生长对照组： 制备仅含外排泵抑制剂制备仅含外排泵抑制剂(EPIs) PAN(EPIs) PAN和奥美和奥美拉唑的培养基。拉唑的培养基。实验组

8、：实验组： PANPAN与亚胺培南与亚胺培南(IMP)(IMP)、美罗培南、美罗培南(MEP)(MEP)联合联合时为时为40g/mL40g/mL，与环丙沙星，与环丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟及左氧氟沙星沙星(LVLX)(LVLX)时为时为20g/mL20g/mL； 奥美拉唑与亚胺培南奥美拉唑与亚胺培南(IMP)(IMP)、美罗培南、美罗培南(MEP)(MEP)、环丙沙星环丙沙星(CPLX)(CPLX)及左氧氟沙星及左氧氟沙星(LVLX)(LVLX)联合时联合时均为均为20g/mL20g/mL。结果判断方法结果判断方法 将平板置于暗色、无反光物体表面上判断试验终点，按照美国临床实验室标

9、准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）推荐方法测定并读取结果。以抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。比较应用EPI前后菌株对4种抗菌药物MIC值的变化，MIC降低为原值的1/4或更低则判断为外排泵阳性株。 结果和讨论结果和讨论预测结果预测结果1. PAN1. PAN对碳青霉烯类、氟喹诺酮类抗菌药物抗菌对碳青霉烯类、氟喹诺酮类抗菌药物抗菌活性的影响活性的影响 PAN浓度为40g/mL时，能明显增强碳青霉烯类对铜绿假单胞菌的抗菌活性，PAN浓度为20g/mL时，即能明显增强氟喹诺酮类对铜绿假单胞菌的抗菌活性。2.2.奥美拉唑对碳

10、青霉烯类、氟喹诺酮类抗菌药物抗奥美拉唑对碳青霉烯类、氟喹诺酮类抗菌药物抗菌活性的影响菌活性的影响 奥美拉唑20g/mL时，对碳青霉烯类、氟喹诺酮类的抗菌活性影响均较小 讨论分析讨论分析 PAN PAN即即MC-207110MC-207110是通过结合外排泵相应位是通过结合外排泵相应位点以阻止其他底物与该位点的结合，减少药物的点以阻止其他底物与该位点的结合，减少药物的外排。外排。PANPAN除了能抑制铜绿假单胞菌除了能抑制铜绿假单胞菌RNDRND型外排型外排泵，还可抑制其他一些革兰阴性菌的泵，还可抑制其他一些革兰阴性菌的RNDRND型外排泵，型外排泵，如沙门菌属、大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克如沙门菌属、大肠埃希菌、产气肠杆菌、肺炎克雷伯菌等。雷伯菌等。 奥美拉唑为奥美拉唑为H+-K+-ATPH+-K+-ATP酶酶( (又称质子泵又称质子泵) )抑制抑制剂，通过破坏跨膜电化学梯度，从而阻断外排泵剂，通过破坏跨膜电化学梯度，从而阻断外排泵能量来源，影响药物的外排。能量来源，影响药物的外排。AeschKmannAeschKmann等已证等已证明它可以抑制金葡菌明它可以抑制金葡菌NorANorA外排泵，可使外排泵，可使NorANorA高表高表达株的诺氟沙星、环丙沙星和左氧氟沙星达株的诺氟沙星、环丙沙星和左氧氟沙星MICMIC降低降低至原值的至原值的1/4-1/81/4-