关龙胆地上部分保肝作用研究

1、关龙胆地上部分保肝作用研究【摘要】 目的通过不同毒物引起的肝损伤来研究关龙胆地上部分的保肝作用。方法选用D?舶肴樘前贰虼?乙酰胺、四氯化碳等3个肝损伤毒物造肝损伤模型，通过不同机制引起的肝损伤来研究关龙胆地上部分的保肝作用。结果关龙胆地上部分有一定的保肝作用，可降低各种肝损伤模型的ALT，AST，AKP等。结论 关龙胆地上部分也有一定的药用价值，用全草取代地下部分入药有一定的可行性。 【关键词】 关龙胆 保肝作用 谷丙转氨酶 谷草转氨酶 碱性磷酸酶Abstract：ObjectiveThe activity of the aerial parts of Gentiana manshurica

2、Kitag. assessment on carbon tetrachloride-induced hepatic damage following biochemical parameters were evaluated. MethodsThe biochemical parameters were detected in model rats, eg serum transaminase enzyme levels(Aspartate aminotransferase and Alanine transaminase)and alkaliphosphatase(AKP).ResultsT

3、he biochemical parameters were reduced in model rats. ConclusionThe results showed that the crude methanolic extract of aerial parts had certain hepatoprotective effect.There are relations between activity and its content of Gentiopicroside.The effective dose proportion between aerial parts and unde

4、rground parts is similar to that of content of Gentiopicroside between them.Key words：Gentiana manshurica Kitag.; Hepatoprotective effect; Aspartate aminotransferase; Alanine transaminase; Phosphatase龙胆为常用中药，中国药典2000版收载为龙胆科植物三花龙胆Gentiana manshurica Kitag.、龙胆Gentiana scabra Bge.、三花龙胆Gentiana triflora

5、 Pall.或坚龙胆Gentiana rigescens Franch. 的干燥根及根茎，具有清热燥湿、泻肝胆火的功效，主治湿热黄疸、阴肿阴痒、带下、强中、湿疹瘙痒、目赤等症1。论文论文参考网三花龙胆又名东北龙胆，是“关龙胆”的主流，质量优良。一直以来中医以龙胆入药，只取其根及根茎部分，而地上部分则被当作废料丢弃。龙胆常被用作保肝中药。实验证明龙胆配伍茵陈、栀子、郁金等中药有促进胆汁分泌与排泄及降低转氨酶作用24。为了更合理有效地开发资源，充分发掘我国中医药宝库的潜在价值，我们对关龙胆的茎、叶、花、根中的龙胆苦苷和当药苦苷进行了较深入的研究。同时，对地上部分总提取物的保肝作用也进行了研究。筛选

6、改善肝功能药物和对其活性进行评价需用动物模型。利用毒物、营养因素缺乏、手术方法、免疫方法以及病毒可以造成肝损伤。造成肝损伤的毒物包括四氯化碳、硫代乙酰胺、醋氨酚、D-半乳糖胺、乙硫氨酸、-萘异硫氰酸酯（ANIE）、鬼笔碱（phalloidin）、-鹅膏素（-amanitin）、酒精、黄曲霉素等。 本实验选用D-半乳糖胺、硫代乙酰胺、四氯化碳等3个肝损伤毒物造肝损伤模型5，通过不同机制引起的肝损伤来研究龙胆地上部分的保肝作用。1 材料1.1 动物昆明种小鼠，体重（20.02.0）g，雌雄各半，哈尔滨市兽医研究所，动物质量合格证号：黑XCXK20020001。1.2 试剂四氯化碳（CCl4），哈尔

7、滨市新达化工厂产品（分析纯），批号000718；硫代乙酰胺（TAA），天津市科密欧化学试剂开发中心（分析纯），批号20040102；D-半乳糖胺（GlanN）：北京化工厂，批号870522；联苯双酯，德州德药制药有限公司，批号040410；甲醇，天津市科密欧化学试剂开发中心（分析纯），批号20011222；谷丙转氨酶（ALT）试剂盒、谷草转氨酶（AST）试剂盒、碱性磷酸酶（AKP）试剂盒，南京建成生物工程研究所,批号20040915。1.3 药材关龙胆，采自哈尔滨市蒋化龙胆种植基地，经哈尔滨商业大学中药鉴定教研室沈志滨副教授鉴定为关龙胆。2 方法取关龙胆根浸膏0.90 g，加蒸馏水配成0.01

8、5 g/ml溶液备用。给小鼠按20 ml/kg灌胃给药（相当于生药5 g/kg给药）。分别取关龙胆地上部分浸膏30.4，15.2，7.6 g加蒸馏水配成0.5，0.25 ，0.125 g/ml溶液备用。 给小鼠按20 ml/kg灌胃给药（分别相当于生药25，50，75 g/kg给药）。2.1 龙胆地上部分对氨基半乳糖（GlanN）急性肝损伤的保护作用取（202）g健康小鼠，雌雄各半，随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双酯组。除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水20 ml/kg外，其它各组均按20 ml/kg给药，1次/d，连续4 d。于末次给药或生理盐水后0.5

9、 h，除正常组小鼠ip生理盐水20 ml/kg外，其余6组小鼠分别按120 mg/kg腹腔注射10% GlaN,18 h后，眼眶取血，3 000 r/min离心10 min，取血清测ALT，AST，AKP。2.2 龙胆地上部分对硫代乙酰胺（TAA）急性肝损伤的保护作用取（202）g健康小鼠，雌雄各半，随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双酯组。除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水20 ml/kg外，其它各组均按20 ml/kg给药，1次/d，连续4 d。于末次给药或生理盐水后30 min，除正常组小鼠腹腔注射生理盐水20 ml/kg外，其余6组小鼠分别按50 mg

10、/kg腹腔注射TAA,18 h后，眼眶取血，3 000 r/min离心10 min，取血清测ALT，AST，AKP。2.3 龙胆地上部分对CCl4急性肝损伤的保护作用取（202）g健康小鼠，雌雄各半，随机分成正常组、模型组、关龙胆根组、不同剂量关龙胆地上部分组、联苯双酯组。除正常组、模型组小鼠每日灌胃生理盐水20 ml/kg外，其它各组均按20 ml/kg给药，1次/d，连续4 d。于末次给药或生理盐水后30 min，除正常组小鼠腹腔注射生理盐水20 ml/kg外，其余6组小鼠分别腹腔注射0.15%CCl4 10 ml/kg。18 h后，眼眶取血，3 000 r/min离心10 min，取血清

11、测ALT，AST，AKP。论文参考网3 结果3.1 龙胆地上部分对小鼠氨基半乳糖(GlanN)急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明，GlanN肝损伤组（模型组）小鼠血清转氨酶ALT，AST和A均明显升高，说明造模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组，龙胆根总提物组与模型组比较虽然可以在一定程度上降低ALT，AST，AKP水平，但经过数理统计分析，并没有显著性差异。说明龙胆全草对GlaN所致的急性肝损伤无明显保护作用。结果见表1。表1 龙胆地上部分总提物对GlanN肝损伤小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影响(略)3.2 龙胆地上部分对小鼠TAA急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明

12、，TAA肝损伤组（模型组）小鼠血清转氨酶ALT，AST，AKP均明显升高，说明造模成功。龙胆地上部分总提物高，中，低剂量组、龙胆根组与阳性对照药联苯双酯均可对抗血清ALT，AST、AKP的升高，总提物高、中、低剂量组与模型组对照有显著性差别(P0.05）。见表2。表2 龙胆地上部分总提物对TAA肝损伤小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影响(略)3.3 龙胆地上部分对小鼠CCl4急性肝损伤的保护作用血清生化测定结果表明，CCl4肝损伤组（模型组）小鼠血清中转氨酶ALT，AST和碱性磷酸酶AKP均明显升高，说明造模成功。龙胆地上部分总提物高、中、低剂量组、龙胆根总提物组与阳性对照药联苯双酯均可对

13、抗血清ALT，AST，AKP的升高，地上部分总提物高、中、低剂量组与模型组对照有显著性差别(P0.05）。结果见表3。表3 龙胆地上部分总提物对CCl4肝损伤小鼠血清ALT，AST，AKP水平的影响(略)4 讨论我们采用昆明种小鼠，设计3个实验，发现关龙胆地上部分有一定的保肝作用，可降低各种肝损伤模型的ALT，AST，AKP等。CCl4，TAA，GlanN都是引起肝损伤的传统肝损伤模型，关龙胆地上部分可使CCl4引起的肝损伤转氨酶下降，和龙胆根及根茎作用一致，提示龙胆地上部分具有抗氧化作用和细胞保护作用。TAA干扰RNA从细胞核到细胞质的转运过程，影响蛋白质的合成。龙胆地上部分能降低TAA对肝

14、脏的侵害作用，和龙胆根及根茎作用一致，提示龙胆地上部分可以保护肝细胞膜，不至于使细胞的离子环境破坏，导致肝细胞坏死。关龙胆地上部分对GlanN无明显保护作用，与龙胆根及根茎作用一致。通过实验发现，关龙胆地上部分和龙胆地下部分的给药量与其含有的龙胆苦苷量有一定的相关性。当关龙胆地上部分以510倍地下部分药量给药时，两者呈现一致的药效，但当继续增加地上部分的药量时，无明显改变，且小鼠体重减轻，可能是由于地上部分叶绿素等的影响，使小鼠食欲降低。实验研究证实三花龙胆和其它龙胆地上部分也含有一定量的龙胆苦苷和当药苦苷6，我们下一步将对三花龙胆和其它龙胆地上部分的保肝作用进行研究。【参考文献】 1国家药典委员会.中国药典，部S.北京：化学工业出版社，2000：72.2薛惠娟，赵伟康.龙胆草对甲亢大鼠肝匀浆类固醇还原酶活性的影响J.中国中西医结合杂志，1992，12（4）：230.3仲来福.四氯化碳致大鼠肝损伤的机理J.中国药理