氟尿苷二乙酸酯脂质固体纳米粒的制备

1、氟尿苷二乙酸酯脂质固体纳米粒的制备 07-08-19 14:08:00 编辑：studa20 作者：连佳芳，张三奇，顾宜，石小鹏，奚苗苗 【关键词】 固体Preparation of floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles【Abstract】 AIM: To prepare floxuridine diacetate solid lipid nanoparticles (FUDRASLN) so as to improve the treatment efficacy and reduce the side effects of flox

2、uridine (FUDR). METHODS: FUDR was esterified with acetic anhydride in the presence of pyridine and 4dimethylaminopyridine. The structure of expected compound, floxuridine diacetate (FUDRA)，was identified by proton nuclear magnetic resonance. The stability of FUDRA in mouse serum and tissue homogenat

3、es and octanolbuffer partition coeffient of FUDRA were investigated by reversed phase high performance liquid chromatography (RPHPLC). FUDRA was used to prepare FUDRASLN by dry membrane technique. Transmission electron microscopy was employed to study the shape and particle diameter distribution of

4、FUDRASLN. Drug loading and entrapment efficiency were also determined by RPHPLC. RESULTS: FUDRA was more stable in weak acid solution than in base solution, hydrolyzed fast in serum and tissue homogenates, especially in liver homogenate. The partition coefficient of FUDRA was 58.13. The diameter dis

5、tribution of FUDRASLN was （20853） nm, drug loading was 7.63% and entrapment efficiency was 94.21%. CONCLUSION: The lipophilicity of FUDR is dramatically increased after esterification with acetic anhydride. FUDRASLN has a high entrapment efficiency and a good distribution in size.【Keywords】 floxurid

6、ine; solid lipid nanoparticles; targeted drug delivery system【摘要】 目的：为了提高氟尿苷（FUDR）的疗效，降低其毒副作用而制备氟尿苷二乙酸酯固体脂质纳米粒（FUDRASLN）. 方法：在吡啶和4二甲氨基吡啶存在时，FUDR与乙酸酐反应，制备氟尿苷二乙酸酯，并测定其核磁共振氢谱.RPHPLC测定其在正辛醇和磷酸盐缓冲液中的分配系数及不同pH缓冲液和组织匀浆中的稳定性.采用薄膜分散法制备FUDRASLN；透射电镜研究其形态、粒径及粒径分布；RPHPLC测定载药量、包封率. 结果：制备成的FUDRA在弱酸性溶液中较稳定，在弱碱性溶液中

7、水解较快；在血清和组织匀浆中易水解，在肝匀浆中水解最快；FUDRA分配系数为58.13. FUDRASLN粒径为（20853）nm，载药量为7.63，包封率为94.21. 结论: FUDR转化成FUDRA后亲脂性大大增加；FUDRASLN包封率较高，粒径分布较均匀.【关键词】 氟尿苷；固体脂质纳米粒；靶向给药系统0引言氟尿苷(floxuridine, FUDR)是5氟尿嘧啶（5FU）的脱氧核苷衍生物，是有效的抗代谢类抗消化道肿瘤新药，主要用于肝癌治疗. 为了增加其肝靶向性，我们制备了氟尿苷固体脂质纳米粒（FUDRSLN），但FUDR的脂溶性较小，制备固体脂质纳米粒（solid lipid na

8、noparticles, SLN）比较困难，故将FUDR酯化，合成了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，以大豆磷脂为药物载体，制备FUDRASLN，期望药物静注后可浓集于肝脏，达到提高疗效，降低毒副作用的目的.1材料和方法1.1材料RE52旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；UV265型紫外可见分光光度计（日本岛津）；INOVA400超导核磁共振仪（美国Varian）；LC10Avp高效液相色谱仪（日本岛津）；色谱柱：Kromasil C18柱，5 m，4.6 mm150.0 mm；KQ250型超声波发生器(江苏昆山淀山湖检测仪器厂)，BP190S电子天平(德国赛多利斯)，XW80A漩涡混合器（江苏海

9、门市麒麟医用仪器厂）；JEM2000Ex型透射电子显微镜（日本电子）；TG16W微量高速离心机（湖南仪器仪表总厂光华仪器厂）；Sephadex G50葡聚糖凝胶（华美生物工程公司）. 药品和试剂：FUDR（浙江海正药业股份有限公司，批号041202，纯度99.2）；乙酸酐（开封化学试剂总厂，批号001022）；大豆磷脂（注射用，上海太伟药业有限公司，批号040716）. 其他药品和试剂均为分析纯. 昆明种小鼠5只，体质量(202) g, 由第四军医大学实验动物中心提供.1.2方法1.2.1FUDRA的合成及结构鉴定FUDR 0.25 g，加入干燥的二氯甲烷30 mL中，依次加入乙酸酐0.31

10、g，吡啶3 mL，催化量4二甲氨基吡啶. 反应混合物室温搅拌3 h，反应结束后加入250 mL乙酸乙酯，依次用稀HCl，稀NaHCO3和H2O洗涤，加入适量无水Na2SO4干燥2 h，过滤，滤液旋转蒸发，除去大部分乙酸乙酯，加入石油醚使产物结晶析出，抽滤，干燥. 合成路线如图1所示. 进行核磁共振氢谱(1HNMR)鉴定.1.2.2FUDRA稳定性考察反相高效液相色谱法(RPHPLC)测定FUDRA的含量. 流动相甲醇水(3575)；流速：1 mL/min；检测波长：268 nm；保留时间：(5.50.1) min；温度：25. 配制FUDRA系列浓度标准液，分别进样20 L，以峰面积（A）对浓

11、度（c）进行线性回归，在0.5100.0 mg/L范围内有良好的线性关系，回归方程为A=-454.22+33317c，相关系数r=0.9999，P0.05(n=5). 高、中、低三种浓度的平均回收率为102.4% (RSD=2.21%). 精密吸取FUDRA(8.75 mg/L)甲醇液1 mL，加到9 mL 37水浴预热的pH分别为4.5,6.8, 7.4,7.8的缓冲液中,混漩振荡1 min后,置入37水浴中,于不同时间点取样20 L进样，测定残留FUDRA浓度. 以浓度的自然对数对时间进行线性回归，求反应速率常数和FUDRA水解半衰期. 为评价FUDRA在体内转化为FUDR的速度，进行了F

12、UDRA在小鼠血清及不同组织匀浆中的水解动力学研究. 小鼠眼眶取血后处死，迅速取出肝、肾、肺组织. 血浆离心10 min（14 000 g），取上清液0.5 mL加pH 6.8的缓冲液4.0 mL；肝、肾、肺组织称质量，加五倍量pH 6.8的缓冲液,匀浆，离心10 min（14 000 g），取上清液1.0 mL，加pH 6.8的缓冲液4.0 mL，混匀. 向37水浴中预热的血清及组织匀浆稀释液中加入FUDRA贮备液（87 mg/L）各1.0 mL，漩涡混合1 min，于不同时间取样200 L，加甲醇500 L，混合1 min，离心5 min（14 000 g），取上清液20 L进样，测定残留药物浓度. 以浓度的自然对数对时间进行线性回归，求FUDRA水解速率常数和半衰期.1.2.3FUDRA分配系数(P)的测定精密量取FUDRA的正辛醇溶液（84 mg/L） 5 mL，加入用正辛醇饱和过的磷酸盐缓冲液（pH 6.8） 5 mL, 混合5 min,HPLC法测定两相FUDRA浓度；用正辛醇饱和过的磷酸盐缓冲液（pH 6.8）配制FUDR溶液（120 mg/L），精密量取该液5 mL，加入正辛醇5 mL, 混合5 min,RPHPLC法测定两相中FUDR浓度.