实验三食品中金黄色葡萄球菌的检验

1、实验三食品中金黄色葡萄球菌的检验实验目的：实验目的：1、了解金黄色葡萄球菌检验原理；、了解金黄色葡萄球菌检验原理；2、掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法、掌握金黄色葡萄球菌鉴定要点和检验方法 金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一个种，可引金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属的一个种，可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素，如果在食品中起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素，如果在食品中大量生长繁殖并产生毒素，可引起食物中毒，故食大量生长繁殖并产生毒素，可引起食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在的品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在的危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际危险，检查食品中金

2、黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。意义。金黄色葡萄球菌性质及培养特征金黄色葡萄球菌性质及培养特征1 1、革兰氏阳性球菌，排列为葡萄状，无芽、革兰氏阳性球菌，排列为葡萄状，无芽孢、无荚膜。孢、无荚膜。金黄色葡萄球菌的金黄色葡萄球菌的扫描电镜照片扫描电镜照片 经经1824小时培养后形成圆形隆起、边小时培养后形成圆形隆起、边缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的菌落，直径缘整齐、表面光滑、湿润、不透明的菌落，直径为为12mm，不同菌株可产生不同色素，出现金，不同菌株可产生不同色素，出现金黄色、白色、柠檬色。黄色、白色、柠檬色。 大肠杆菌在普通营养琼脂上的菌落特征：大肠杆菌在普通营养琼脂上的菌落特征：中等大小

3、、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘中等大小、圆形、表面光滑、无色半透明、边缘整齐整齐2 2、在普通营养琼脂平板上的菌落特征：、在普通营养琼脂平板上的菌落特征： 金黄色葡萄球菌在普通营养琼脂平板上的菌落金黄色葡萄球菌在普通营养琼脂平板上的菌落3 3、具有高耐盐性，在、具有高耐盐性，在7.5%7.5%氯化钠肉汤中呈现浑浊生氯化钠肉汤中呈现浑浊生长；长；4 4、在、在BPBP平板上菌落特征：圆形、光滑凸起，湿润，平板上菌落特征：圆形、光滑凸起，湿润，直径为直径为2 23mm3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一浑浊带，外层有一透明圈；周围有一浑浊带，外层有一透明

4、圈；5 5、在血平板上菌落特征：呈金黄色，有时也呈白色，、在血平板上菌落特征：呈金黄色，有时也呈白色，大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶大而凸起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈；血圈；BPBP培养基上的菌落培养基上的菌落血平板上的菌落血平板上的菌落6、血浆凝固酶试验、血浆凝固酶试验 致病性菌株可以产致病性菌株可以产生血浆凝固酶，使血浆生血浆凝固酶，使血浆发生凝固。发生凝固。原理：原理： 鉴定食品中金黄色葡萄球菌：根据以上性质逐步确鉴定食品中金黄色葡萄球菌：根据以上性质逐步确定。定。 鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标：金鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标：金黄色葡萄球菌能产生凝血

5、浆酶，使血浆凝固；多数黄色葡萄球菌能产生凝血浆酶，使血浆凝固；多数金黄色葡萄球菌致病菌株能产生溶血毒素，使血琼金黄色葡萄球菌致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。应。实验材料：实验材料：1 1、样品：（、样品：（1 1）含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的水）含有大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的水样样 （2 2）鲜奶）鲜奶2 2、培养基与试剂：、培养基与试剂：7.5%7.5%氯化钠肉汤、血琼脂平板、氯化钠肉汤、血琼脂平板、Baird-ParkerBaird-Parker氏培养基、无菌水、革兰氏染色剂氏培养基、无菌水、革兰氏

6、染色剂3 3、器具及其他用品：显微镜、恒温培养箱、无菌吸、器具及其他用品：显微镜、恒温培养箱、无菌吸管、无菌试管、无菌平皿、载玻片、涂布器、酒精管、无菌试管、无菌平皿、载玻片、涂布器、酒精灯、接种环等灯、接种环等流流程程1 1、增菌培养法、增菌培养法检样处理：无菌操作取样检样处理：无菌操作取样25g25g（mLmL）加入）加入225mL225mL灭菌灭菌生理盐水，固体样品研磨或均质制成混悬液。生理盐水，固体样品研磨或均质制成混悬液。增菌及分离培养：吸取增菌及分离培养：吸取5mL5mL上述混悬液，接种于上述混悬液，接种于7.5%7.5%氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤氯化钠肉汤或胰酪胨大豆肉汤50mL

7、50mL培养基内，培养基内，363611培养培养24h24h，转种血平板和，转种血平板和BPBP平板，平板， 363611培养培养24h24h，挑取血平板上金黄色（有时，挑取血平板上金黄色（有时为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶为白色）菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶实验。实验。兔血浆凝固酶试验：兔血浆凝固酶试验： 吸取吸取1 1：4 4新鲜兔血浆，放入小试管中，再加新鲜兔血浆，放入小试管中，再加入培养入培养24h24h的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物，的金黄色葡萄球菌肉浸液肉汤培养物，振荡摇匀，置振荡摇匀，置363611温箱或水浴内，每半小时温箱或水浴内，每半小时观察一次，观察观察

8、一次，观察6h6h，如呈现凝固，即将试管倾斜，如呈现凝固，即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果，同时或倒置时，呈现凝块者，被认为阳性结果，同时与已知阳性和阴性葡萄球菌菌株及肉汤作为对照。与已知阳性和阴性葡萄球菌菌株及肉汤作为对照。2.1 2.1 梯度稀释转种梯度稀释转种BPBP平板平板 吸取上述吸取上述1 1：1010混悬液，进行混悬液，进行1010倍第次稀释，倍第次稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液1mL1mL，分别加入三块分别加入三块BPBP平板，每个平板接种量分别平板，每个平板接种量分别为、，然后用灭菌涂布器涂布整个平板，如水为

9、、，然后用灭菌涂布器涂布整个平板，如水分多不易吸收，可将平板放在分多不易吸收，可将平板放在363611h11h，等，等水分蒸发后反转平皿置水分蒸发后反转平皿置363611培养。培养。2、直接计数方法、直接计数方法转种血平板转种血平板 在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑在三个平板上寻找周围有浑浊带的黑色菌落，并从中任选五个菌落，分别接色菌落，并从中任选五个菌落，分别接种血平板，种血平板， 于于363611培养培养24h24h后进行后进行染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增染色镜检、血浆凝固酶试验，步骤同增菌培养方法。菌培养方法。2.3 2.3 菌落计数菌落计数 将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑将三个平板中疑似金黄色葡萄球菌黑色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，色菌落数相加，乘以血浆凝固酶阳性数，除以除以5 5，再乘以稀释倍数，即可求出每克，再乘以稀释倍数，即可求出每克样品中金黄色葡萄球菌数。样品中金黄色葡萄球菌数。结果结果1.1.根据形态特征、血平板情况以及血浆凝固酶试根据形态特征、血平板情况以及血浆凝固酶试验，判别检样中是否含有金黄色葡萄球菌。验，判别检样中是否含有金黄色葡萄球菌。2.2.估算检样中金黄色葡萄球菌的含量。估算检样中金黄色葡萄球菌的含量。第第一一法法 金金黄黄色色