银杏黄酮磷脂复合物对大鼠心肌再灌注血管内皮损伤的保护作用

1、银杏黄酮磷脂复合物对大鼠心肌再灌注血管内皮损伤的保护作用<    【摘要】  目的： 探讨银杏黄酮磷脂复合物对大鼠心肌缺血再灌注血管内皮损伤的保护作用。方法： 健康Wister大鼠40只，随机分为假手术组、模型组、银杏黄酮组及银杏黄酮磷脂复合物组，每组10只，检测各组血浆内皮素（ET1）、前列环素（PGI2）、血栓素A2 (TXA2)水平及血清一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）水平和超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果： 银杏黄酮磷脂复合物对心肌缺血30min再灌注120min大鼠，可明显降低血清NO及MDA含量，而使SOD活性增强，亦使血

2、浆ET1 、TXA2水平下降， PGI2水平及PGI2/TXA2比值明显增高，且变化较银杏黄酮显著。 结论： 银杏黄酮磷脂复合物对大鼠心肌再灌注血管内皮损伤具有明显的保护作用，可能与其增强抗氧化酶活性，减少自由基对内皮细胞的氧化损伤，减少内源性血管活性物质ET1释放，纠正PGI2TXA2失衡等机制有关。 【关键词中华论文网()欢迎您！】  银杏黄酮； 银杏黄酮磷脂复合物； 心肌缺血再灌注损伤； 自由基银杏黄酮(flavonoids)系银杏叶中提取的有效成分，具有舒张血管、扩张微循环口径、保护血管内皮、改善血流灌注等作用。临床上主要用于冠心病、心绞痛、脑血管疾患、脑损伤后遗症等的 治疗

3、 。银杏黄酮磷脂复合物是将银杏黄酮与磷脂在一定条件下反应制得的一类物质，它的理化性质较银杏黄酮有很大变化，而且磷脂是生物膜的重要组成部分，从而使磷脂复合物的生物性质有了很大改善，大大提高了银杏黄酮的生物利用度。本研究采用大鼠复制心肌缺血再灌注损伤模型，观察银杏黄酮磷脂复合物对缺血再灌注心肌内皮损伤保护方面的影响，探讨其心血管药理作用，以期为该药的临床应用提供基础的药 理学 资料。    1  材料与方法    1  动物    健康Wister大鼠40只，雌雄各半，体重300g左右，合

4、格证号：鲁动质字0004358，由山东鲁抗医药股份有限公司实验动物中心提供。    1.2  药品及试剂    银杏黄酮及磷脂由潍坊医学院药理学教研室提供；一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）及超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒，由南京建成生物工程研究所提供；内皮素(ET)放免药盒、6-酮前列腺素Fl(6-Keto-PGF1)放免药盒及血栓素B2(TXB2)放免药盒由解放军总 医院 科技开发中心放免研究所（原北京东亚免疫技术研究所）提供。    1.3  主要仪器  

5、  BL-420F生物技能实验系统，成都泰盟科技有限公司；DH-150型动物人工呼吸机,浙江大学医学仪器厂；紫外可见分光光度计，上海尤尼柯仪器有限公司；磁力搅拌器，深圳天南海北实业有限公司；恒温水浴箱，江苏省金坛市大地自动化仪器厂。    1.4  试验方法    1.4.1  药品制备  银杏黄酮溶于丙酮中加温至60按1:1摩尔比加入大豆磷脂搅拌成溶液状态过滤，收集滤液-减压除去反应溶剂加入适量氯仿，充分溶解其中的磷脂复合物过滤，收集滤液减压蒸馏将氯仿蒸干，60真空干燥24h，收集固体，为黄褐

6、色粉末，置干燥器中保存。    1.4.2  分组与给药  实验前先进行动物筛选，心电图检查无异常者进入实验。将40只大鼠随机分成4组，每组10只。在造模前，每日灌胃1次，共灌胃14d。其中第1组（假手术组）与第2组（模型组）灌胃生理盐水2 ml；第3组（银杏黄酮组）：灌胃银杏黄酮生理盐水混悬液（按银杏黄酮0.079g/kg）2ml；第4组（银杏黄酮磷脂复合物组）：灌胃银杏黄酮磷脂复合物生理盐水混悬液（按银杏黄酮磷脂复合物0.237g/kg，其中含银杏黄酮0.079g/kg）2ml。第14天灌胃后1h开始造模，除假手术组只穿线不结扎外，其余各组

7、均结扎30min,再灌注120min。    1.4.3  造模  大鼠冠脉结扎按 文献中华论文网()欢迎您！ 1方法稍加改进。于最后一次灌胃1h后，3%戊巴比妥钠（45mg/kg）腹腔麻醉，仰卧位固定，接BL-420F生物技能实验系统,用标准肢体二导连记录心电图。颈部去毛，切开皮肤，分离颈前肌，暴露气管，行气管插管。插管另端接于动物人工呼吸机行正压呼吸(呼吸比1:2，呼吸频率60次min，潮气量13mLkg)。胸部去毛、消毒，距胸骨左侧旁0.5cm处第3、4肋骨表面纵行切开皮肤及皮下组织约2cm，血管钳夹闭肋间外肌及小血管，小弯镊分别从第3、

8、4肋两侧肋间隙穿过夹回结扎线，扎紧肋间动脉，剪断第3、4肋骨后向左右两侧轻拉，打开胸膜和心包。以左冠状动脉主干为标志，在左心耳根部下方2mm处进针，除假手术组仅穿线不结扎外，其余各组均以3/0丝线穿过左冠状动脉下方的心肌表层在肺动脉圆锥旁出针，待心电图恢复稳定10min后，结扎左冠状动脉左前降支，结扎时将硅胶管置于结扎线与血管之间，使硅胶管压迫引起冠脉闭塞。结扎前、后及再通记录导联心电图，以结扎部位以下心肌变苍白、搏动减弱且心电图ST段弓背向上抬高达0.1mv或T波高耸，QRS波波形宽大畸形为结扎成功的标志; 解开结扎线后QRS波振幅逐渐回落，抬高的ST段回落，缺血区颜色恢复为再通成功的标志。

9、    缺血30min，再灌注120min，心脏采血。采血共分3部分，第1部分取血2ml注入含10%EDTA-Na2 30 ul和抑肽酶40 ul的离心管中混匀,43000rpm离心10min，分离血浆，放-20保存,用于检测ET1;第2部分取一次性5ml空针吸取消炎痛-EDTA.Na2液约0.3 ml，取血4ml，即刻在空针内颠倒混匀，沿试管壁缓慢注入离心管内，4离心3500rpm，15min，分离血浆，放-20保存，用于检测PGI2和TXA2；第3部分取一次性5ml空针取血3ml,注入试管中静置30min，2500 rpm，15min，分离血清，放-20保存，

10、用于检测NO、MDA和SOD。    1.4.4  检测指标和方法  用放射免疫分析法2测定血浆内皮素（ET1）、前列环素(PGI2 )和血栓素A2（TXA2）的代谢产物6酮前列腺素F1(6-Keto-PGF1)和TXB2水平；血清NO、SOD、MDA含量严格按试剂盒说明书操作测定。测定工作在潍坊医学院药理学实验室和潍坊医学院附属医院完成。    1.5  统计学处理    所有数据采用均数±标准差(x±s )表示。采用SPSS13.0软件进行统计学分析，经方差齐性检验和正态性检验后，进行单因素方差分析，组间均数差异比较采用q检验。以P<0.05为差异有统计学意义。    2  结果     各组大鼠血浆中ET1、PGI2、TXA2含量及PGI2/TXA2比值比较结果见表1。    从表1可见，模型组各项指标与假手术组比较，均有显著差异(P<0.01 )，表明缺血再灌注后血浆中缩血管物质明显升高，而扩血管物质明显降低，PGI2与TXA2的比例失调，造模成功。两药物组各项指标与模型组相比，亦有显著差